| 摘要 | 第2-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 小肽研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1 小肽定义及吸收特点 | 第12页 |
| 1.2 小肽在反刍动物上的吸收特点 | 第12-13页 |
| 1.3 小肽在奶牛乳腺组织中的营养作用 | 第13-14页 |
| 2 小肽转运蛋白的研究进展 | 第14-16页 |
| 2.1 PepT1转运蛋白的特点、分布及功能 | 第14-15页 |
| 2.2 PepT2转运蛋白的特点、分布及功能 | 第15-16页 |
| 2.3 PHT1转运蛋白的特点、分布及功能 | 第16页 |
| 3 支链氨基酸 | 第16-18页 |
| 3.1 支链氨基酸的定义 | 第16页 |
| 3.2 支链氨基酸对mTOR信号通路的调控 | 第16-17页 |
| 3.3 支链氨基酸在奶牛泌乳调控中的研究 | 第17-18页 |
| 4 试验研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 试验一 小肽转运蛋白在奶牛乳腺组织及乳腺上皮细胞中的定位 | 第19-37页 |
| 1 材料与方法 | 第19-28页 |
| 1.1 试剂与材料 | 第19-21页 |
| 1.1.1 组织来源 | 第19页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 1.1.3 试剂的配制 | 第20-21页 |
| 1.2 设备与仪器 | 第21-22页 |
| 1.3 试验方法 | 第22-28页 |
| 1.3.1 奶牛乳腺细胞的分离培养与鉴定 | 第22页 |
| 1.3.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第22-24页 |
| 1.3.3 奶牛乳腺组织石蜡切片的制备 | 第24页 |
| 1.3.4 奶牛乳腺组织石蜡切片H.E.染色 | 第24页 |
| 1.3.5 奶牛乳腺组织切片免疫荧光染色观察 | 第24-25页 |
| 1.3.6 奶牛乳腺组织及乳腺上皮细胞POTs、Casein及ANPEP mRNA水平的表达 | 第25-27页 |
| 1.3.7 Western Blot检测奶牛乳腺组织及乳腺上皮细胞PepT1和PepT2蛋白水平 | 第27-28页 |
| 1.4 数据分析 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-35页 |
| 2.1 奶牛乳腺上皮细胞培养与鉴定 | 第28-31页 |
| 2.1.1 乳腺上皮细胞形态观察 | 第29页 |
| 2.1.2 乳腺上皮细胞生长特性 | 第29-30页 |
| 2.1.3 乳腺上皮细胞染色体核型分析 | 第30页 |
| 2.1.4 乳腺上皮细胞角蛋白18的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2 PepT1和PepT2蛋白在奶牛乳腺组织中的定位 | 第31-33页 |
| 2.3 PepT1和PepT2蛋白在奶牛乳腺上皮细胞中的定位 | 第33页 |
| 2.4 PepT1、PepT2、PHT1和PHT2 mRNA在奶牛乳腺组织及乳腺上皮细胞中的表达 | 第33-35页 |
| 2.4.1 RNA的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4.2 GAPDH和POTs的实时荧光定量PCR电泳图 | 第34页 |
| 2.4.3 奶牛乳腺组织POTs mRNA及PepT1和PepT2蛋白表达 | 第34-35页 |
| 2.4.4 奶牛乳腺上皮细胞POTs mRNA及PepT1和PepT2蛋白表达 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 3.1 POTS在奶牛乳腺组织中的定位和定量分析 | 第35-36页 |
| 3.2 POTs在奶牛乳腺上皮细胞中的定位和定量分析 | 第36页 |
| 4 小结 | 第36-37页 |
| 试验二 小肽转运蛋白POTS在奶牛组织中的定量分析 | 第37-43页 |
| 1 材料与方法 | 第37页 |
| 1.1 试剂与材料 | 第37页 |
| 1.2 设备与仪器 | 第37页 |
| 1.3 试验方法 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-40页 |
| 2.1 奶牛各组织中POTs mRNA的表达 | 第37-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 4 结论 | 第42-43页 |
| 试验三 二肽对奶牛乳腺上皮细胞蛋白合成的影响 | 第43-58页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 1.1 试验主要试剂 | 第43页 |
| 1.2 设备与仪器 | 第43页 |
| 1.3 色谱条件 | 第43页 |
| 1.4 二肽稳定性分析 | 第43-44页 |
| 1.4.1 工作液的配制 | 第43-44页 |
| 1.4.2 标准曲线的制备 | 第44页 |
| 1.5 不同饥饿时间对奶牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白、κ-酪蛋白和PepT1mRNA表达的影响 | 第44页 |
| 1.6 不同二肽浓度下奶牛乳腺上皮细胞Casein、POTs和ANPEP mRNA的表达 | 第44页 |
| 1.7 二肽及其相应氨基酸对奶牛乳腺上皮细胞Casein、POTs和ANPEP mRNA表达的影响 | 第44-45页 |
| 1.8 乳腺上皮细胞总RNA的提取及检测 | 第45-46页 |
| 1.9 数据分析 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-55页 |
| 2.1 Met-Met、Val-Met和Leu-Met二肽标准曲线 | 第46-47页 |
| 2.2 二肽稳定性分析 | 第47页 |
| 2.3 mTOR、S6K1、4E-BPI、eIF-4E、Casein和ANPEP基因实时荧光定量PCR电泳图 | 第47-48页 |
| 2.4 奶牛乳腺上皮细胞经不同时间饥饿后β-酪蛋白、κ-酪蛋白和PepT1基因表达量的变化 | 第48页 |
| 2.5 不同浓度二肽对奶牛乳腺上皮细胞Casein、POTs和ANPEP基因表达的影响 | 第48-53页 |
| 2.6 氨基酸不同添加形式对BMEC乳蛋白合成相关基因mRNA表达的影响 | 第53-55页 |
| 2.7 乳腺上皮细胞培养前后培养液中二肽含量变化 | 第55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 3.1 不同浓度二肽对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成相关基因mRNA表达量的影响 | 第56页 |
| 3.2 氨基酸不同添加形式对乳蛋白合成相关基因mRNA表达量的影响及细胞培养前后培养液中二肽含量变化 | 第56-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 全文结论 | 第58-59页 |
| 1 全文结论 | 第58页 |
| 2 本研究创新点 | 第58页 |
| 3 下一步研究计划 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66-67页 |
