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热胁迫下糙皮侧耳菌丝体海藻糖代谢调控研究

摘要第4-5页
Abstract第5-6页
缩略词表第13-14页
第一章、绪论第14-33页
    1.1 引言第14页
    1.2 植物受热胁迫的研究第14-20页
        1.2.1 热胁迫对植物的影响第14-18页
        1.2.2 植物耐热机制的研究第18-19页
        1.2.3 耐热型植株的育种第19-20页
    1.3 真菌受热胁迫的研究第20-25页
        1.3.1 热胁迫对真菌的影响第20-22页
        1.3.2 真菌耐热机制的研究第22-24页
        1.3.3 真菌耐热菌株的选育第24页
        1.3.4 食用菌中热胁迫的相关研究第24-25页
    1.4 生物体中海藻糖研究的进展第25-28页
        1.4.1 海藻糖对生物体的保护作用第25-27页
        1.4.2 海藻糖合成途径的研究进展第27-28页
    1.5 真菌遗传转化体系的研究进展第28-30页
        1.5.1 真菌转化宿主类型第28页
        1.5.2 真菌转化的转化方法第28-30页
    1.6 真菌中农杆菌介导的遗传转化的研究进展第30-31页
        1.6.1 真菌中农杆菌介导的遗传转化的特点第30页
        1.6.2 影响农杆菌转化的因素第30-31页
    1.7 本论文的研究意义和主要内容第31-32页
    1.8 技术路线第32-33页
第二章、材料与方法第33-58页
    2.1 试验材料第33-35页
        2.1.1 菌株培养及保存第33页
        2.1.2 培养基第33-34页
        2.1.3 试剂及配制第34-35页
    2.2 试验方法第35-58页
        2.2.1 糙皮侧耳PoTPS1的生物信息学分析第35页
        2.2.2 糙皮侧耳总RNA的提取第35-36页
        2.2.3 糙皮侧耳总RNA中DNA的消化第36页
        2.2.4 糙皮侧耳cDNA的制备第36页
        2.2.5 糙皮侧耳总DNA的提取第36-37页
        2.2.6 碱裂解法提取质粒第37页
        2.2.7 糙皮侧耳PoTPS1及NTH基因的克隆第37-39页
        2.2.8 大肠杆菌感受态的制备第39页
        2.2.9 大肠杆菌的转化第39-40页
        2.2.10 PoTPS1原核表达载体的构建第40-41页
        2.2.11 农杆菌转化载体的构建第41页
        2.2.12 农杆菌原生质体的制备第41-42页
        2.2.13 农杆菌的转化第42页
        2.2.14 糙皮侧耳原生质体的制备第42页
        2.2.15 糙皮侧耳原生质体再生率的检测第42页
        2.2.16 糙皮侧耳潮霉素耐受浓度的筛选第42页
        2.2.17 糙皮侧耳的转化第42-43页
        2.2.18 糙皮侧耳TPS1和NTH过表达转化子的构建第43-44页
        2.2.19 PoTPS1的原核表达第44页
        2.2.20 PoTPS1原核表达蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析第44-45页
        2.2.21 PoTPS1蛋白的纯化第45页
        2.2.22 PoTPS1酶动力学参数的检测第45-46页
        2.2.23 粗酶液的提取第46页
        2.2.24 总蛋白含量的测定第46页
        2.2.25 PoTPS1酶活的检测第46-48页
        2.2.26 海藻糖合成代谢途径其它酶酶活的检测第48-49页
        2.2.27 ROS清除相关的酶活检测第49-51页
        2.2.28 海藻糖含量的检测第51页
        2.2.29 荧光定量PCR第51-52页
        2.2.30 农杆菌菌株的筛选第52页
        2.2.31 糙皮侧耳农杆菌转化条件的优化第52页
        2.2.32 糙皮侧耳转化子的PCR验证第52-53页
        2.2.33 糙皮侧耳转化子的Southern blot验证第53-56页
        2.2.34 糙皮侧耳转化子报告基因表达的检测第56页
        2.2.35 糙皮侧耳转化子有丝分裂稳定性的检测第56页
        2.2.36 糙皮侧耳菌丝的处理第56-57页
        2.2.37 糙皮侧耳菌丝胞内ROS的检测第57页
        2.2.38 糙皮侧耳菌丝MDA水平的检测第57页
        2.2.39 数据处理第57-58页
第三章、糙皮侧耳6-磷酸海藻糖合成酶基因的研究第58-68页
    3.1 引言第58页
    3.2 结果与分析第58-65页
        3.2.1 PoTPS1的基因和氨基酸序列的分析第58-60页
        3.2.2 PoTPS1的原核表达与纯化第60-61页
        3.2.3 纯化后PoTPS1蛋白的酶动力学分析第61-63页
        3.2.4 PoTPS1的活性与海藻糖含量之间的关联性分析第63-64页
        3.2.5 Trep和NTH酶活与海藻糖含量之间的关联性分析第64-65页
    3.3 讨论第65-66页
    3.4 本章小结第66-68页
第四章、糙皮侧耳农杆菌介导的遗传转化体系的构建第68-77页
    4.1 引言第68页
    4.2 结果与分析第68-75页
        4.2.1 潮霉素浓度的确定第68-69页
        4.2.2 糙皮侧耳原生质体再生率的测定第69-70页
        4.2.3 转化用农杆菌菌株的筛选第70页
        4.2.4 糙皮侧耳转化子的筛选和鉴定第70-72页
        4.2.5 糙皮侧耳根癌农杆菌介导的遗传转化条件的优化第72-73页
        4.2.6 转化子报告基因的表达第73-74页
        4.2.7 转化子有丝分裂稳定性检测第74-75页
    4.3 讨论第75-76页
    4.4 本章小结第76-77页
第五章、糙皮侧耳热胁迫下海藻糖合成与ROS和菌丝生长的关系第77-94页
    5.1 引言第77页
    5.2 结果与分析第77-91页
        5.2.1 热胁迫抑制了糙皮侧耳菌丝的生长第77-78页
        5.2.2 热胁迫促进糙皮侧耳菌丝胞内ROS的积累第78-81页
        5.2.3 ROS抑制了糙皮侧耳菌丝的生长第81-83页
        5.2.4 H_2O_2诱导了糙皮侧耳菌丝胞内海藻糖的合成第83页
        5.2.5 外源添加海藻糖有利于糙皮侧耳菌丝热胁迫后的恢复生长第83-86页
        5.2.6 TPS1和NTH基因过表达转化子的构建及生理特性的检测第86-89页
        5.2.7 内源海藻糖含量的升高有利于糙皮侧耳菌丝热胁迫后的恢复生长第89-91页
    5.3 讨论第91-93页
    5.4 本章小结第93-94页
第六章、全文总结与展望第94-96页
    6.1 全文总结第94页
    6.2 创新点第94页
    6.3 展望第94-96页
参考文献第96-111页
致谢第111-112页
作者简介第112页

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