| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章、绪论 | 第14-33页 |
| 1.1 引言 | 第14页 |
| 1.2 植物受热胁迫的研究 | 第14-20页 |
| 1.2.1 热胁迫对植物的影响 | 第14-18页 |
| 1.2.2 植物耐热机制的研究 | 第18-19页 |
| 1.2.3 耐热型植株的育种 | 第19-20页 |
| 1.3 真菌受热胁迫的研究 | 第20-25页 |
| 1.3.1 热胁迫对真菌的影响 | 第20-22页 |
| 1.3.2 真菌耐热机制的研究 | 第22-24页 |
| 1.3.3 真菌耐热菌株的选育 | 第24页 |
| 1.3.4 食用菌中热胁迫的相关研究 | 第24-25页 |
| 1.4 生物体中海藻糖研究的进展 | 第25-28页 |
| 1.4.1 海藻糖对生物体的保护作用 | 第25-27页 |
| 1.4.2 海藻糖合成途径的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.5 真菌遗传转化体系的研究进展 | 第28-30页 |
| 1.5.1 真菌转化宿主类型 | 第28页 |
| 1.5.2 真菌转化的转化方法 | 第28-30页 |
| 1.6 真菌中农杆菌介导的遗传转化的研究进展 | 第30-31页 |
| 1.6.1 真菌中农杆菌介导的遗传转化的特点 | 第30页 |
| 1.6.2 影响农杆菌转化的因素 | 第30-31页 |
| 1.7 本论文的研究意义和主要内容 | 第31-32页 |
| 1.8 技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章、材料与方法 | 第33-58页 |
| 2.1 试验材料 | 第33-35页 |
| 2.1.1 菌株培养及保存 | 第33页 |
| 2.1.2 培养基 | 第33-34页 |
| 2.1.3 试剂及配制 | 第34-35页 |
| 2.2 试验方法 | 第35-58页 |
| 2.2.1 糙皮侧耳PoTPS1的生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.2.2 糙皮侧耳总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.3 糙皮侧耳总RNA中DNA的消化 | 第36页 |
| 2.2.4 糙皮侧耳cDNA的制备 | 第36页 |
| 2.2.5 糙皮侧耳总DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.6 碱裂解法提取质粒 | 第37页 |
| 2.2.7 糙皮侧耳PoTPS1及NTH基因的克隆 | 第37-39页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态的制备 | 第39页 |
| 2.2.9 大肠杆菌的转化 | 第39-40页 |
| 2.2.10 PoTPS1原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.11 农杆菌转化载体的构建 | 第41页 |
| 2.2.12 农杆菌原生质体的制备 | 第41-42页 |
| 2.2.13 农杆菌的转化 | 第42页 |
| 2.2.14 糙皮侧耳原生质体的制备 | 第42页 |
| 2.2.15 糙皮侧耳原生质体再生率的检测 | 第42页 |
| 2.2.16 糙皮侧耳潮霉素耐受浓度的筛选 | 第42页 |
| 2.2.17 糙皮侧耳的转化 | 第42-43页 |
| 2.2.18 糙皮侧耳TPS1和NTH过表达转化子的构建 | 第43-44页 |
| 2.2.19 PoTPS1的原核表达 | 第44页 |
| 2.2.20 PoTPS1原核表达蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第44-45页 |
| 2.2.21 PoTPS1蛋白的纯化 | 第45页 |
| 2.2.22 PoTPS1酶动力学参数的检测 | 第45-46页 |
| 2.2.23 粗酶液的提取 | 第46页 |
| 2.2.24 总蛋白含量的测定 | 第46页 |
| 2.2.25 PoTPS1酶活的检测 | 第46-48页 |
| 2.2.26 海藻糖合成代谢途径其它酶酶活的检测 | 第48-49页 |
| 2.2.27 ROS清除相关的酶活检测 | 第49-51页 |
| 2.2.28 海藻糖含量的检测 | 第51页 |
| 2.2.29 荧光定量PCR | 第51-52页 |
| 2.2.30 农杆菌菌株的筛选 | 第52页 |
| 2.2.31 糙皮侧耳农杆菌转化条件的优化 | 第52页 |
| 2.2.32 糙皮侧耳转化子的PCR验证 | 第52-53页 |
| 2.2.33 糙皮侧耳转化子的Southern blot验证 | 第53-56页 |
| 2.2.34 糙皮侧耳转化子报告基因表达的检测 | 第56页 |
| 2.2.35 糙皮侧耳转化子有丝分裂稳定性的检测 | 第56页 |
| 2.2.36 糙皮侧耳菌丝的处理 | 第56-57页 |
| 2.2.37 糙皮侧耳菌丝胞内ROS的检测 | 第57页 |
| 2.2.38 糙皮侧耳菌丝MDA水平的检测 | 第57页 |
| 2.2.39 数据处理 | 第57-58页 |
| 第三章、糙皮侧耳6-磷酸海藻糖合成酶基因的研究 | 第58-68页 |
| 3.1 引言 | 第58页 |
| 3.2 结果与分析 | 第58-65页 |
| 3.2.1 PoTPS1的基因和氨基酸序列的分析 | 第58-60页 |
| 3.2.2 PoTPS1的原核表达与纯化 | 第60-61页 |
| 3.2.3 纯化后PoTPS1蛋白的酶动力学分析 | 第61-63页 |
| 3.2.4 PoTPS1的活性与海藻糖含量之间的关联性分析 | 第63-64页 |
| 3.2.5 Trep和NTH酶活与海藻糖含量之间的关联性分析 | 第64-65页 |
| 3.3 讨论 | 第65-66页 |
| 3.4 本章小结 | 第66-68页 |
| 第四章、糙皮侧耳农杆菌介导的遗传转化体系的构建 | 第68-77页 |
| 4.1 引言 | 第68页 |
| 4.2 结果与分析 | 第68-75页 |
| 4.2.1 潮霉素浓度的确定 | 第68-69页 |
| 4.2.2 糙皮侧耳原生质体再生率的测定 | 第69-70页 |
| 4.2.3 转化用农杆菌菌株的筛选 | 第70页 |
| 4.2.4 糙皮侧耳转化子的筛选和鉴定 | 第70-72页 |
| 4.2.5 糙皮侧耳根癌农杆菌介导的遗传转化条件的优化 | 第72-73页 |
| 4.2.6 转化子报告基因的表达 | 第73-74页 |
| 4.2.7 转化子有丝分裂稳定性检测 | 第74-75页 |
| 4.3 讨论 | 第75-76页 |
| 4.4 本章小结 | 第76-77页 |
| 第五章、糙皮侧耳热胁迫下海藻糖合成与ROS和菌丝生长的关系 | 第77-94页 |
| 5.1 引言 | 第77页 |
| 5.2 结果与分析 | 第77-91页 |
| 5.2.1 热胁迫抑制了糙皮侧耳菌丝的生长 | 第77-78页 |
| 5.2.2 热胁迫促进糙皮侧耳菌丝胞内ROS的积累 | 第78-81页 |
| 5.2.3 ROS抑制了糙皮侧耳菌丝的生长 | 第81-83页 |
| 5.2.4 H_2O_2诱导了糙皮侧耳菌丝胞内海藻糖的合成 | 第83页 |
| 5.2.5 外源添加海藻糖有利于糙皮侧耳菌丝热胁迫后的恢复生长 | 第83-86页 |
| 5.2.6 TPS1和NTH基因过表达转化子的构建及生理特性的检测 | 第86-89页 |
| 5.2.7 内源海藻糖含量的升高有利于糙皮侧耳菌丝热胁迫后的恢复生长 | 第89-91页 |
| 5.3 讨论 | 第91-93页 |
| 5.4 本章小结 | 第93-94页 |
| 第六章、全文总结与展望 | 第94-96页 |
| 6.1 全文总结 | 第94页 |
| 6.2 创新点 | 第94页 |
| 6.3 展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 作者简介 | 第112页 |
