| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-22页 |
| 1 热休克蛋白HSC70文献综述 | 第10-16页 |
| 1.1 热休克蛋白分类 | 第10-11页 |
| 1.2 热休克蛋白HSC70分子结构 | 第11-12页 |
| 1.3 热休克蛋白70生物学功能 | 第12-14页 |
| 1.4 热休克蛋白HSC70基因表达调控分子机理 | 第14-16页 |
| 2 贝类HSC70研究现状 | 第16-18页 |
| 2.1 贝类热休克蛋白基因HSC70的克隆 | 第16-17页 |
| 2.2 贝类热休克蛋白基因HSC70与环境污染预警 | 第17-18页 |
| 3 Gnaq蛋白的文献概括 | 第18-20页 |
| 3.1 Gnaq蛋白的分类与结构 | 第18-19页 |
| 3.2 Gnaq蛋白质的功能 | 第19-20页 |
| 4 选题依据及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 ChHsc70转录调控因子筛选以及该转录因子cDNA全长克隆 | 第22-53页 |
| 第一节 DNA亲和层析筛选潜在ChHsc70基因转录调控因子 | 第22-30页 |
| 1 实验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 生物材料 | 第22页 |
| 1.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 1.3 实验试剂 | 第23-24页 |
| 1.4 主要实验试剂配制 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-28页 |
| 3.1 洗脱液蛋白的电泳检测 | 第26-27页 |
| 3.2 质谱检测结果 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 第二节 ChGnaq的cDNA全长克隆与原核表达 | 第30-52页 |
| 1 实验材料 | 第30-33页 |
| 1.1 生物材料 | 第30页 |
| 1.2 实验仪器 | 第30-31页 |
| 1.3 实验试剂 | 第31-32页 |
| 1.4 主要实验试剂配制方法 | 第32-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-43页 |
| 2.1 牡蛎总RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.2 逆转录获取第一链cDNA链 | 第34页 |
| 2.3 近江牡蛎ChGnaq编码区序列的扩增 | 第34-39页 |
| 2.4 ChGnaq全长的扩增 | 第39-43页 |
| 2.5 ChGnaq序列展示以及三维结构的预测、系统发育进化树的构建 | 第43页 |
| 3 实验结果 | 第43-50页 |
| 3.1 近江牡蛎总RNA提取结果 | 第43-44页 |
| 3.2 ChGnaq编码区的扩增 | 第44-45页 |
| 3.3 ChGnaq全长cDNA扩增的RACE结果 | 第45-47页 |
| 3.4 ChGnaq氨基酸多重序列比对以及系统发育进化树分析 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 ChGnaq对ChHsc70的调控功能鉴定 | 第53-82页 |
| 第一节 RNA干扰鉴定ChGnaq对ChHsc70调控作用 | 第53-64页 |
| 1 实验材料 | 第53-54页 |
| 1.1 实验对象 | 第53页 |
| 1.2 实验仪器 | 第53页 |
| 1.3 实验试剂 | 第53-54页 |
| 1.4 实验试剂配制方法 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-59页 |
| 2.1 Gnaq的siRNA设计合成 | 第54-55页 |
| 2.2 牡蛎血细胞收集与铺板 | 第55-56页 |
| 2.3 牡蛎血细胞RNA转染 | 第56页 |
| 2.4 提取牡蛎血细胞RNA | 第56-57页 |
| 2.5 RT-PCR检测ChGnaq和ChHsc70表达相关性 | 第57-59页 |
| 3 结果 | 第59-63页 |
| 3.1 荧光定量PCR检测牡蛎血细胞中ChGnaq表达方法的建立 | 第59-60页 |
| 3.2 牡蛎血细胞RNA电泳图 | 第60-61页 |
| 3.3 敲低ChGnaqmRNA后对ChHsc70表达的影响 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 第二节 过表达鉴定ChGnaq对ChHsc70调控作用 | 第64-81页 |
| 1 实验材料 | 第64-66页 |
| 1.1 实验材料 | 第64页 |
| 1.2 实验耗材 | 第64-65页 |
| 1.3 实验试剂 | 第65-66页 |
| 1.4 实验所用试剂配制方法 | 第66页 |
| 2 实验方法 | 第66-75页 |
| 2.1 真核表达载体的构建 | 第66-72页 |
| 2.2 HEK293T细胞的培养 | 第72-74页 |
| 2.3 相对荧光素酶的活性的测定 | 第74-75页 |
| 3 结果 | 第75-78页 |
| 3.1 HEK293T细胞培养 | 第75-76页 |
| 3.2 真核重组表达载体的阳性克隆筛选 | 第76页 |
| 3.3 提取细胞转染所需质粒 | 第76-77页 |
| 3.4 相对荧光素酶活性检测结果 | 第77-78页 |
| 4 讨论 | 第78-81页 |
| 本章小结 | 第81-82页 |
| 第四章 近江牡蛎基因ChGnaq和ChHsc70对温度和污染物的响应模式 | 第82-98页 |
| 1 实验材料 | 第82-83页 |
| 1.1 实验材料 | 第82页 |
| 1.2 实验仪器 | 第82-83页 |
| 1.3 实验试剂 | 第83页 |
| 2 实验方法 | 第83-85页 |
| 2.1 材料的处理和取样 | 第83-84页 |
| 2.2 总RNA的提取及cDNA的获取 | 第84-85页 |
| 2.3 荧光定量PCR | 第85页 |
| 2.4 数据分析与处理 | 第85页 |
| 3 结果 | 第85-94页 |
| 3.1 热激近江牡蛎的ChGnaq和ChHsc70的转录表达模式 | 第85-86页 |
| 3.2 CdCl2持续处理近江牡蛎后ChGnaq和ChHsc70的转录表达模式 | 第86-88页 |
| 3.3 壬基酚持续处理近江牡蛎后ChGnaq和ChHsc70的转录表达模式 | 第88-89页 |
| 3.4 ChGnaq和ChHsc70基因对不同温度的响应 | 第89-92页 |
| 3.5 ChGnaq基因和ChHsc70基因对温度和污染物联合处理的响应 | 第92-93页 |
| 3.6 ChGnaq和ChHsc70两基因表达量的比值与温度变化和污染物处理的关系 | 第93-94页 |
| 4 讨论 | 第94-97页 |
| 本章小结 | 第97-98页 |
| 全文总结与展望 | 第98-100页 |
| 1 总结 | 第98页 |
| 2 创新点 | 第98-99页 |
| 3 展望 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-115页 |
| 附录 | 第115-118页 |
| 论文清单 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
