| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 绪论 | 第13页 |
| 1.2 转基因作物概述 | 第13-15页 |
| 1.3 Bt蛋白的研究 | 第15-18页 |
| 1.3.1 Bt蛋白起源 | 第15页 |
| 1.3.2 Bt蛋白的命名 | 第15-16页 |
| 1.3.3 Bt蛋白的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.4 Bt杀虫机理 | 第17-18页 |
| 1.4 Bt蛋白的受体研究 | 第18-21页 |
| 1.4.1 钙粘蛋白(Cadherin,CAD) | 第18-19页 |
| 1.4.2 氨肽酶N(AminopeptidaseN,APN) | 第19-20页 |
| 1.4.3 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP) | 第20页 |
| 1.4.4 ABC转运体(ABC-binding cassette transpoter) | 第20-21页 |
| 1.5 Bt抗性现状及原因 | 第21-22页 |
| 1.6 抗性治理 | 第22-23页 |
| 1.7 研究内容与目的 | 第23-24页 |
| 第二章 四种Bt蛋白对鳞翅目害虫的生物活性测定 | 第24-31页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-27页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂及缓冲液的配制 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.4 毒蛋白的提取 | 第26-27页 |
| 2.1.4.1 Cry1Ca的提取 | 第26页 |
| 2.1.4.2 Cry2Ah的提取 | 第26-27页 |
| 2.1.5 Cry2Ah和Cry1Ca蛋白纯化 | 第27页 |
| 2.1.5.1 Cry2Ah蛋白纯化 | 第27页 |
| 2.1.5.2 Cry1Ca蛋白纯化 | 第27页 |
| 2.1.6 蛋白含量的测定 | 第27页 |
| 2.1.7 生物测定的方法 | 第27页 |
| 2.1.8 数据统计与分析 | 第27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-29页 |
| 2.2.1 Bt蛋白的提取、活化以及定量 | 第27-28页 |
| 2.2.2 Bt蛋白的杀虫活性测定 | 第28-29页 |
| 2.3 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 斜纹夜蛾取食Cry1Ca蛋白后中肠组织病理变化 | 第31-38页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31-32页 |
| 3.1.1 供试虫源和菌株 | 第31页 |
| 3.1.2 仪器与试剂 | 第31页 |
| 3.1.3 中肠提取 | 第31-32页 |
| 3.1.4 超薄切片制作及电镜观察 | 第32页 |
| 3.2 结果与分析 | 第32-36页 |
| 3.3 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 斜纹夜蛾中肠BBMV上结合Cry1Ca的蛋白 | 第38-45页 |
| 4.1 材料与方法 | 第38-41页 |
| 4.1.1 供试用虫及Bt菌株 | 第38-39页 |
| 4.1.2 斜纹夜蛾中肠BBMV的提取及定量 | 第39页 |
| 4.1.3 WesternBlot分析 | 第39-40页 |
| 4.1.4 斜纹夜蛾BBMV上Cry1Ca蛋白结合蛋白的分析——Pull-down | 第40页 |
| 4.1.5 Cry1Ac与Cry1Ca对斜纹夜蛾杀虫活性差异的初步探究 | 第40页 |
| 4.1.6 银染 | 第40-41页 |
| 4.1.7 蛋白条带质谱检测 | 第41页 |
| 4.2 结果与分析 | 第41-43页 |
| 4.2.1 斜纹夜蛾中肠BBMV的提取及其与Cry1Ca蛋白结合结果 | 第41页 |
| 4.2.2 Pull-down的建立与应用 | 第41-43页 |
| 4.2.3 Cry1Ac与CryCa对斜纹夜蛾杀虫活性差异的初步探究 | 第43页 |
| 4.2.4 蛋白条带质谱检测 | 第43页 |
| 4.3 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 ABCC2基因时空表达以及功能验证 | 第45-55页 |
| 5.1 材料与方法 | 第45-50页 |
| 5.1.1 供试昆虫与主要试剂 | 第45-46页 |
| 5.1.2 主要仪器及生产公司 | 第46页 |
| 5.1.3 样本制备 | 第46-47页 |
| 5.1.4 斜纹夜蛾总RNA提取 | 第47页 |
| 5.1.5 cDNA合成 | 第47页 |
| 5.1.6 RT-PCR分析 | 第47-48页 |
| 5.1.7 数据处理 | 第48页 |
| 5.1.8 克隆载体的构建 | 第48页 |
| 5.1.9 表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 5.1.10 ABCC2重组蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第49页 |
| 5.1.11 Ligandblot分析 | 第49-50页 |
| 5.1.12 细胞培养 | 第50页 |
| 5.1.13 Cry1Ca蛋白制备 | 第50页 |
| 5.1.14 pAc受体质粒的构建 | 第50页 |
| 5.1.15 细胞转染和毒理生测 | 第50页 |
| 5.2 结果与分析 | 第50-53页 |
| 5.2.1 ABCC2在斜纹夜蛾不同龄期和不同组织中的相对表达量 | 第50-52页 |
| 5.2.2 目的蛋白表达与纯化 | 第52页 |
| 5.2.3 Ligandblot分析 | 第52-53页 |
| 5.2.4 pAc5.1B-EGFP-ABCC2构建 | 第53页 |
| 5.2.5 Cry1Ac和Cry1Ca对真核表达SlABCC2细胞的毒性 | 第53页 |
| 5.3 讨论 | 第53-55页 |
| 第六章 全文总结 | 第55-57页 |
| 6.1 主要结论 | 第55页 |
| 6.2 创新点 | 第55-56页 |
| 6.3 讨论和展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-68页 |
| 质谱分析结果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
