| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1. 甲壳类高血糖激素家族生理功能研究进展 | 第15-22页 |
| 1.1 高血糖激素基因克隆研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 高血糖激素研究方法进展 | 第17-19页 |
| 1.2.1 眼柄切除法 | 第17页 |
| 1.2.2 活体注射法 | 第17-18页 |
| 1.2.3 免疫组化法 | 第18页 |
| 1.2.4 RNAi 干扰法 | 第18页 |
| 1.2.5 小结 | 第18-19页 |
| 1.3 高血糖激素生理功能研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3.1 渗透调节 | 第19页 |
| 1.3.2 糖类代谢 | 第19-20页 |
| 1.3.3 免疫防御 | 第20页 |
| 1.3.4 蜕皮调控 | 第20-21页 |
| 1.3.5 生殖调节 | 第21-22页 |
| 2．本项目研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 凡纳滨对虾高血糖激素基因克隆和表达分析 | 第23-50页 |
| 第一节 凡纳滨对虾高血糖激素基因克隆 | 第23-38页 |
| 1 材料和方法 | 第24-31页 |
| 1.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第24页 |
| 1.1.2 所用引物 | 第24-25页 |
| 1.2 实验方法 | 第25-31页 |
| 1.2.1 总 RNA 提取 | 第25页 |
| 1.2.2 5’RACE | 第25-28页 |
| 1.2.3 3’RACE | 第28页 |
| 1.2.4 纯化 PCR 产物 | 第28-29页 |
| 1.2.5 连接 T 载体 | 第29页 |
| 1.2.6 重组质粒转化大肠杆菌 DH5α | 第29页 |
| 1.2.7 菌落 PCR 及目的基因测序 | 第29-30页 |
| 1.2.8 凡纳滨对虾 CHH 基因全序列的生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 2 实验结果 | 第31-36页 |
| 2.1 LvCHH 全长 cDNA 的克隆及序列分析 | 第31-32页 |
| 2.2 LvCHH 序列同源性分析 | 第32-34页 |
| 2.3 LvCHH 系统进化树的构建及分析 | 第34-36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 第二节 凡纳滨对虾高血糖激素基因原核表达及活性验证 | 第38-50页 |
| 1 实验材料与方法 | 第38-45页 |
| 1.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 1.2 实验方法 | 第39-45页 |
| 1.2.1 目的片段的 PCR 扩增 | 第39-41页 |
| 1.2.2 目的片段回收、转化与测序 | 第41页 |
| 1.2.3 重组质粒 p32a-LvCHH 的构建与鉴定 | 第41-42页 |
| 1.2.4 LvCHH 基因的诱导表达 | 第42-43页 |
| 1.2.5 His 标签纯化蛋白 | 第43页 |
| 1.2.6 蛋白超滤 | 第43页 |
| 1.2.7 SDS-PAGE 分析诱导表达产物 | 第43页 |
| 1.2.8 重组蛋白 Western Blot 检测 | 第43-44页 |
| 1.2.9 重组高血糖激素活性检测 | 第44-45页 |
| 1.2.10 数据的处理 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-48页 |
| 2.1 凡纳滨对虾高血糖激素原核表达 | 第45-48页 |
| 2.1.1 重组质粒 pET32a-LvCHH 的构建与检测 | 第45-46页 |
| 2.1.2 重组高血糖激素的 SDS-PAGE 分析与 western blot 分析 | 第46-48页 |
| 2.2 凡纳滨对虾重组高血糖激素活力测定 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 高血糖激素在凡纳滨对虾生理代谢中调控机制的研究 | 第50-82页 |
| 第一节 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝信号通路和离子转运的影响 | 第50-64页 |
| 1 材料和方法 | 第51-54页 |
| 1.1 实验材料 | 第51页 |
| 1.2 试验方法 | 第51-54页 |
| 1.2.1 实验梯度设置 | 第51页 |
| 1.2.2 样品采集与制备 | 第51-52页 |
| 1.2.3 实验指标测定 | 第52-54页 |
| 1.2.4 数据处理与分析 | 第54页 |
| 2 实验结果 | 第54-61页 |
| 2.1 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝生物胺含量的影响 | 第54-55页 |
| 2.2 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝 cAMP 和 cGMP 含量的影响 | 第55-56页 |
| 2.3 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝 PKA 和 PKC 活性的影响 | 第56-57页 |
| 2.4 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝 Na+/K+-ATPase、V-ATPase 和 CA（CAc、CAg）活力和 mRNA 表达的影响 | 第57-60页 |
| 2.5 注射高血糖激素对凡纳滨对虾血淋巴渗透压的影响 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-64页 |
| 3.1 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝生物胺含量的影响 | 第61-62页 |
| 3.2 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝 cAMP 和 cGMP 以及 PKA 和 PKC 活性的影响 | 第62页 |
| 3.3 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝 3 种离子转运酶活力、mRNA 表达和血淋巴渗透压的影响 | 第62-64页 |
| 第二节 高血糖激素对凡纳滨对虾糖类代谢的影响 | 第64-74页 |
| 1 材料和方法 | 第64-67页 |
| 1.1 实验材料 | 第64-65页 |
| 1.2 实验方法 | 第65-67页 |
| 1.2.1 实验梯度设置 | 第65页 |
| 1.2.2 样品采集与制备 | 第65页 |
| 1.2.3 实验指标测定 | 第65-67页 |
| 1.2.4 实验结果处理与分析 | 第67页 |
| 2 实验结果 | 第67-72页 |
| 2.1 注射血糖激素对凡纳滨对虾肝胰脏 cAMP 和 cGMP 含量的影响 | 第67-68页 |
| 2.2 注射高血糖激素对凡纳滨对虾肝胰脏和肌肉糖原合酶（GS）活力的影响 | 第68-69页 |
| 2.3 注射高血糖激素对凡纳滨对虾肝胰脏和肌肉糖原磷酸化酶（GP）活力的影响 | 第69-70页 |
| 2.4 注射高血糖激素对凡纳滨对虾肝胰脏和肌肉磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（PEPCK）、果糖二磷酸酶（FBPase）活力的影响 | 第70-72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| 第三节 注射高血糖激素对凡纳滨对虾免疫防御指标的影响 | 第74-82页 |
| 1 材料和方法 | 第75-77页 |
| 1.1 实验材料 | 第75页 |
| 1.2 实验方法 | 第75-77页 |
| 1.2.1 实验梯度设置 | 第75页 |
| 1.2.2 样品采集与制备 | 第75-76页 |
| 1.2.3 实验指标测定 | 第76-77页 |
| 1.2.4 数据处理与分析 | 第77页 |
| 2 实验结果 | 第77-80页 |
| 2.1 注射高血糖激素对凡纳滨对虾血淋巴生物胺含量的影响 | 第77-78页 |
| 2.2 注射高血糖激素对凡纳滨对虾血细胞数量的影响 | 第78-79页 |
| 2.3 注射高血糖激素对血细胞酚氧化酶原、血浆酚氧化酶的影响 | 第79-80页 |
| 2.4 注射高血糖激素对凡纳滨对虾血浆抗菌、溶菌活力的影响 | 第80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 个人简历 | 第92页 |
| 发表的学术论文与研究成果 | 第92-93页 |
