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高血糖激素(CHH)在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生理代谢中作用机制的研究

摘要第5-8页
Abstract第8-11页
第一章 文献综述第15-23页
    1. 甲壳类高血糖激素家族生理功能研究进展第15-22页
        1.1 高血糖激素基因克隆研究进展第15-17页
        1.2 高血糖激素研究方法进展第17-19页
            1.2.1 眼柄切除法第17页
            1.2.2 活体注射法第17-18页
            1.2.3 免疫组化法第18页
            1.2.4 RNAi 干扰法第18页
            1.2.5 小结第18-19页
        1.3 高血糖激素生理功能研究进展第19-22页
            1.3.1 渗透调节第19页
            1.3.2 糖类代谢第19-20页
            1.3.3 免疫防御第20页
            1.3.4 蜕皮调控第20-21页
            1.3.5 生殖调节第21-22页
    2.本项目研究的目的和意义第22-23页
第二章 凡纳滨对虾高血糖激素基因克隆和表达分析第23-50页
    第一节 凡纳滨对虾高血糖激素基因克隆第23-38页
        1 材料和方法第24-31页
            1.1 实验材料第24-25页
                1.1.1 实验动物第24页
                1.1.2 所用引物第24-25页
            1.2 实验方法第25-31页
                1.2.1 总 RNA 提取第25页
                1.2.2 5’RACE第25-28页
                1.2.3 3’RACE第28页
                1.2.4 纯化 PCR 产物第28-29页
                1.2.5 连接 T 载体第29页
                1.2.6 重组质粒转化大肠杆菌 DH5α第29页
                1.2.7 菌落 PCR 及目的基因测序第29-30页
                1.2.8 凡纳滨对虾 CHH 基因全序列的生物信息学分析第30-31页
        2 实验结果第31-36页
            2.1 LvCHH 全长 cDNA 的克隆及序列分析第31-32页
            2.2 LvCHH 序列同源性分析第32-34页
            2.3 LvCHH 系统进化树的构建及分析第34-36页
        3 讨论第36-38页
    第二节 凡纳滨对虾高血糖激素基因原核表达及活性验证第38-50页
        1 实验材料与方法第38-45页
            1.1 实验材料第38-39页
            1.2 实验方法第39-45页
                1.2.1 目的片段的 PCR 扩增第39-41页
                1.2.2 目的片段回收、转化与测序第41页
                1.2.3 重组质粒 p32a-LvCHH 的构建与鉴定第41-42页
                1.2.4 LvCHH 基因的诱导表达第42-43页
                1.2.5 His 标签纯化蛋白第43页
                1.2.6 蛋白超滤第43页
                1.2.7 SDS-PAGE 分析诱导表达产物第43页
                1.2.8 重组蛋白 Western Blot 检测第43-44页
                1.2.9 重组高血糖激素活性检测第44-45页
                1.2.10 数据的处理第45页
        2 结果第45-48页
            2.1 凡纳滨对虾高血糖激素原核表达第45-48页
                2.1.1 重组质粒 pET32a-LvCHH 的构建与检测第45-46页
                2.1.2 重组高血糖激素的 SDS-PAGE 分析与 western blot 分析第46-48页
            2.2 凡纳滨对虾重组高血糖激素活力测定第48页
        3 讨论第48-50页
第三章 高血糖激素在凡纳滨对虾生理代谢中调控机制的研究第50-82页
    第一节 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝信号通路和离子转运的影响第50-64页
        1 材料和方法第51-54页
            1.1 实验材料第51页
            1.2 试验方法第51-54页
                1.2.1 实验梯度设置第51页
                1.2.2 样品采集与制备第51-52页
                1.2.3 实验指标测定第52-54页
                1.2.4 数据处理与分析第54页
        2 实验结果第54-61页
            2.1 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝生物胺含量的影响第54-55页
            2.2 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝 cAMP 和 cGMP 含量的影响第55-56页
            2.3 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝 PKA 和 PKC 活性的影响第56-57页
            2.4 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝 Na+/K+-ATPase、V-ATPase 和 CA(CAc、CAg)活力和 mRNA 表达的影响第57-60页
            2.5 注射高血糖激素对凡纳滨对虾血淋巴渗透压的影响第60-61页
        3 讨论第61-64页
            3.1 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝生物胺含量的影响第61-62页
            3.2 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝 cAMP 和 cGMP 以及 PKA 和 PKC 活性的影响第62页
            3.3 注射高血糖激素对凡纳滨对虾鳃丝 3 种离子转运酶活力、mRNA 表达和血淋巴渗透压的影响第62-64页
    第二节 高血糖激素对凡纳滨对虾糖类代谢的影响第64-74页
        1 材料和方法第64-67页
            1.1 实验材料第64-65页
            1.2 实验方法第65-67页
                1.2.1 实验梯度设置第65页
                1.2.2 样品采集与制备第65页
                1.2.3 实验指标测定第65-67页
                1.2.4 实验结果处理与分析第67页
        2 实验结果第67-72页
            2.1 注射血糖激素对凡纳滨对虾肝胰脏 cAMP 和 cGMP 含量的影响第67-68页
            2.2 注射高血糖激素对凡纳滨对虾肝胰脏和肌肉糖原合酶(GS)活力的影响第68-69页
            2.3 注射高血糖激素对凡纳滨对虾肝胰脏和肌肉糖原磷酸化酶(GP)活力的影响第69-70页
            2.4 注射高血糖激素对凡纳滨对虾肝胰脏和肌肉磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)、果糖二磷酸酶(FBPase)活力的影响第70-72页
        3 讨论第72-74页
    第三节 注射高血糖激素对凡纳滨对虾免疫防御指标的影响第74-82页
        1 材料和方法第75-77页
            1.1 实验材料第75页
            1.2 实验方法第75-77页
                1.2.1 实验梯度设置第75页
                1.2.2 样品采集与制备第75-76页
                1.2.3 实验指标测定第76-77页
                1.2.4 数据处理与分析第77页
        2 实验结果第77-80页
            2.1 注射高血糖激素对凡纳滨对虾血淋巴生物胺含量的影响第77-78页
            2.2 注射高血糖激素对凡纳滨对虾血细胞数量的影响第78-79页
            2.3 注射高血糖激素对血细胞酚氧化酶原、血浆酚氧化酶的影响第79-80页
            2.4 注射高血糖激素对凡纳滨对虾血浆抗菌、溶菌活力的影响第80页
        3 讨论第80-82页
结论第82-84页
参考文献第84-91页
致谢第91-92页
个人简历第92页
发表的学术论文与研究成果第92-93页

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