| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1. 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 热休克蛋白的研究概况 | 第11-15页 |
| 1.1.1 热休克蛋白的发现及分类 | 第11页 |
| 1.1.2 热休克蛋白基因的表达调控 | 第11-12页 |
| 1.1.3 Hsps蛋白的结构特性 | 第12-13页 |
| 1.1.4 Hsps与昆虫生长发育的关系 | 第13-14页 |
| 1.1.5 hsps与昆虫耐热性的关系 | 第14页 |
| 1.1.6 昆虫在化学农药胁迫下的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 龟纹瓢虫的研究现状 | 第15页 |
| 1.3 本实验研究目的及意义 | 第15-17页 |
| 2. 材料与方法 | 第17-28页 |
| 2.1 虫源及饲养方法 | 第17页 |
| 2.2 主要的试剂及仪器 | 第17页 |
| 2.3 龟纹瓢虫hsp70-1基因部分片段及hsp70-2、hsp90基因全长的克隆 | 第17-21页 |
| 2.3.1 总RNA的提取及第一链cDNA的合成 | 第17-18页 |
| 2.3.2 pjhsp70-1、pjhsp70-2和pjhsp90基因片段的克隆 | 第18-20页 |
| 2.3.3 pjhsp70-2和pjhsp90基因3’RACE及5’RACE的克隆 | 第20-21页 |
| 2.4 pjhsp70-2和pjhsp90基因的原核表达 | 第21-24页 |
| 2.4.1 pjhsp70-2和pjhsp90 cDNA序列ORF的扩增 | 第21-22页 |
| 2.4.2 原核表达载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.4.3 蛋白的诱导表达与检测 | 第23页 |
| 2.4.4 Western blot分析 | 第23-24页 |
| 2.5 pjhsp70和pjhsp90基因胁迫条件下表达分析 | 第24-28页 |
| 2.5.1 龟纹瓢虫不同温度胁迫下生物学状态观察 | 第24页 |
| 2.5.2 龟纹瓢虫吡虫啉处理下的生物测定 | 第24-25页 |
| 2.5.3 龟纹瓢虫胁迫处理 | 第25页 |
| 2.5.4 总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.5.5 eDNA第一条链的合成 | 第25-26页 |
| 2.5.6 荧光定量PCR引物的设计 | 第26页 |
| 2.5.7 定量PCR引物特异性检测 | 第26页 |
| 2.5.8 定量片段的确认 | 第26页 |
| 2.5.9 荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.5.10 数据处理 | 第27-28页 |
| 3. 结果与分析 | 第28-53页 |
| 3.1 pjhsp70和pjhsp90基因的克隆 | 第28-30页 |
| 3.1.1 pjhsp70和pjhsp90 cDNA序列片段PCR扩增结果 | 第28页 |
| 3.1.2 3’RACE和5’RACE实验结果 | 第28-29页 |
| 3.1.3 pjhsp70-2和pjhsp90基因cDNA序列全长 | 第29-30页 |
| 3.2 pjhsp70和pjhsp90基因序列分析 | 第30-42页 |
| 3.2.1 pjhsp70-1基因序列分析 | 第30-31页 |
| 3.2.2 pjhsp70-2基因序列分析 | 第31-36页 |
| 3.2.3 pjhsp90基因序列分析 | 第36-42页 |
| 3.3 pjhsp70-2和pjhsp90基因的原核表达 | 第42-46页 |
| 3.3.1 pjhsp70-2基因原核表达结果分析 | 第42-44页 |
| 3.3.2 pjhsp90基因原核表达结果分析 | 第44-46页 |
| 3.4 pjhsp70和pjhsp90基因胁迫表达模式 | 第46-53页 |
| 3.4.1 龟纹瓢虫不同温度胁迫下生物学状态观察 | 第46页 |
| 3.4.2 毗虫啉对龟纹瓢虫成虫的生物测定 | 第46页 |
| 3.4.3 荧光定量分析特异引物的确定 | 第46-48页 |
| 3.4.4 高温胁迫下龟纹瓢虫不同龄期pjhsp70和pjhsp90基因的表达变化 | 第48-49页 |
| 3.4.5 热激预处理后pjhsp70和pjhsp90高温胁迫下的表达变化 | 第49-51页 |
| 3.4.6 不同浓度吡虫啉对pjhsp70和pjhsp90基因表达量的影响 | 第51-53页 |
| 4. 讨论 | 第53-56页 |
| 4.1 pjhsp70和pjhsp90基因的克隆及分析 | 第53-54页 |
| 4.2 温度胁迫下pjhsp70和pjhsp90基因表达水平分析 | 第54-55页 |
| 4.3 吡虫啉胁迫下pjhsp70和pjhsp90基因表达水平 | 第55-56页 |
| 5. 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第66页 |
