| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 植物无融合生殖概念与研究意义 | 第11-12页 |
| 1.2 苹果属无融合生殖现状 | 第12-15页 |
| 1.2.1 苹果属植物无融合生殖的资源与类型 | 第12-14页 |
| 1.2.2 平邑甜茶无融合生殖的发育特性研究现状 | 第14页 |
| 1.2.3 无融合生殖的遗传特性研究 | 第14-15页 |
| 1.3 无融合生殖分子机理研究 | 第15-17页 |
| 1.4 核酸测序技术发展及数字基因表达谱测序技术 | 第17-18页 |
| 1.4.1 第一代测序技术 | 第17页 |
| 1.4.2 第二代测序技术 | 第17-18页 |
| 1.4.3 第三代测序技术 | 第18页 |
| 1.4.4 DGE(数字基因表达谱技术) | 第18页 |
| 1.5 无融合生殖与抗性 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第21页 |
| 2.1.3 酶、试剂盒、抗生素、化学药品及生化试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 设备与仪器 | 第22页 |
| 2.1.5 PCR引物的合成及序列测定 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 苹果基因组表达谱分析 | 第22页 |
| 2.2.2 核酸提取与检测 | 第22-24页 |
| 2.2.2.1 植物总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2.2 总RNA含量与纯度检测 | 第23页 |
| 2.2.2.3 反转录cDNA | 第23-24页 |
| 2.2.2.4 植物基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.3 基因克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态的转化 | 第26页 |
| 2.2.5 DNA序列测定 | 第26-27页 |
| 2.2.6 农杆菌感受态细胞GV3101/LBA4404的制备与转化 | 第27页 |
| 2.2.6.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.2.6.2 农杆菌感受态的转化 | 第27页 |
| 2.2.7 载体构建 | 第27-29页 |
| 2.2.7.1 MhANl-like异位表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.7.2 MhAN1-like基因异位表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.2.7.3 MhAN1-like亚细胞定位表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.2.7.4 pGEX-MhAN1-like表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.8 材料农杆菌转染 | 第29-30页 |
| 2.2.8.1 洋葱表皮转化 | 第29页 |
| 2.2.8.2 农杆菌介导的番茄转化 | 第29-30页 |
| 2.2.9 转基因植株的鉴定 | 第30页 |
| 2.2.10 pGEX-MhAN1-like蛋白原核表达 | 第30页 |
| 2.2.11 番茄种子萌发试验 | 第30页 |
| 2.2.12 植物相关生理指标的测定 | 第30-32页 |
| 2.2.12.1 相对含水量(RWC)测定 | 第30页 |
| 2.2.12.2 丙二醛(MDA)含量测定 | 第30-31页 |
| 2.2.12.3 脯氨酸(Proline)含量测定 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-43页 |
| 3.1 表达谱分析 | 第32-34页 |
| 3.2 MhAN1-like基因生物信息学分析 | 第34-38页 |
| 3.2.1 序列信息 | 第34-35页 |
| 3.2.2 同源性与进化树分析 | 第35-36页 |
| 3.2.3 保守域分析 | 第36-37页 |
| 3.2.4 二级和三维结构分析 | 第37-38页 |
| 3.3 MhAN1-like的原核诱导和SDS-PAGE分析 | 第38页 |
| 3.4 MhAN1-like亚细胞定位 | 第38-39页 |
| 3.5 转基因植株获得及检测 | 第39-40页 |
| 3.6 转基因番茄种子萌发试验 | 第40页 |
| 3.7 转基因番茄抗性鉴定 | 第40-43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-57页 |
| 附录 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第62页 |
