| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 文献综述 | 第11-23页 |
| 第一章 真核起始因子 5A 的研究进展 | 第11-23页 |
| 1.1 艾美耳球虫及其生活史 | 第11页 |
| 1.2 真核起始因子 5A | 第11-12页 |
| 1.3 eIF5A 的成熟 | 第12-15页 |
| 1.3.1 eIF5A 的成熟过程 | 第12-13页 |
| 1.3.2 DHS 的催化机理 | 第13页 |
| 1.3.3 DHS 与高精眯合成酶 | 第13-15页 |
| 1.3.4 DOHH 在成熟过程中的催化作用 | 第15页 |
| 1.4 真核生物中 eIF5A 的结构和功能 | 第15-18页 |
| 1.4.1 eIF5A 的结构及保守位点 | 第15-17页 |
| 1.4.2 真核生物中 eIF5A 的功能 | 第17页 |
| 1.4.3 eIF5A 的亚细胞定位 | 第17-18页 |
| 1.5 真核生物中 DHS 的结构和功能 | 第18-20页 |
| 1.5.1 DHS 的结构 | 第18-19页 |
| 1.5.2 DHS 的功能 | 第19-20页 |
| 1.6 真核生物中 DOHH 的结构和功能 | 第20-22页 |
| 1.6.1 DOHH 的结构 | 第20-21页 |
| 1.6.2 DOHH 的功能 | 第21-22页 |
| 1.7 eIF5A 及其修饰酶的进化 | 第22-23页 |
| 试验研究 | 第23-60页 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫 eIF5A 和 DHS 的克隆与生物信息学分析 | 第23-41页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 虫株 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器与试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 E. tenella 的接种 | 第24页 |
| 2.2.2 E.tenella 第二代裂殖子的收集与纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 E.tenella 卵囊的收集纯化 | 第25页 |
| 2.2.4 E. tenella 广东株子孢子的收集纯化 | 第25页 |
| 2.2.5 E. tenella 不同发育阶段的总 RNA 提取 | 第25-26页 |
| 2.2.6 cDNA 第一链的合成 | 第26页 |
| 2.2.7 EteIF5A 及 EtDHS 的扩增 | 第26-29页 |
| 2.2.8 菌液的鉴定和测序 | 第29-30页 |
| 2.2.9 EteIF5A 和 EtDHS 的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-39页 |
| 2.3.1 EteIF5A 及 EtDHS 序列的搜寻 | 第30页 |
| 2.3.2 EteIF5A 和 EtDHS 的 PCR 产物电泳结果 | 第30页 |
| 2.3.3 连接 PMD -18T 后的菌液鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.4 测序结果及初步的序列分析 | 第31-35页 |
| 2.3.5 EteIF5A 和 EtDHS 与其它物种相似性的分析结果 | 第35-38页 |
| 2.3.6 系统发育分析 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-40页 |
| 2.5 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 EteIF5A 在球虫不同发育阶段的表达差异 | 第41-49页 |
| 3.1 材料 | 第41页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第41页 |
| 3.1.3 组织来源 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-43页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第41-42页 |
| 3.2.2 实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）扩增 | 第42-43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-48页 |
| 3.3.1 E.tenella 广东株不同发育时期总 RNA 的提取 | 第43页 |
| 3.3.2 E.tenella 广东株不同发育时期的普通 PCR | 第43-44页 |
| 3.3.3 标准曲线的建立公式 | 第44-46页 |
| 3.3.4 目的基因的表达差异分析 | 第46-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 EteIF5A 及 EtDHS 的原核表达 | 第49-60页 |
| 4.1 材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 表达菌和载体 | 第49页 |
| 4.1.2 限制性内切酶和主要试剂 | 第49页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第49页 |
| 4.1.4 试剂配制 | 第49-50页 |
| 4.2 方法 | 第50-55页 |
| 4.2.1 构建原核表达载体 | 第50-53页 |
| 4.2.2 原核表达 | 第53-55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-59页 |
| 4.3.1 重组质粒 pMAL-c2x-EteIF5A 和 pMAL-c2x-EtDHS 的酶切鉴定 | 第55-56页 |
| 4.3.2 融合蛋白 eIF5A-MBP 的 IPTG 诱导表达结果及可溶性分析 | 第56-57页 |
| 4.3.3 融合蛋白 DHS-MBP 的 IPTG 诱导表达结果 | 第57-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59页 |
| 4.5 小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 缩略词 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简介 | 第70页 |
