| 符号说明 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 植物非生物胁迫研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 非生物胁迫对植物生长发育的普遍性影响 | 第12-13页 |
| 1.1.2 非生物胁迫对植物生长发育的特异性影响 | 第13-14页 |
| 1.1.3 复杂的非生物胁迫调控网络 | 第14-16页 |
| 1.2 植物中的钙离子信号 | 第16-19页 |
| 1.2.1 钙离子信号的产生 | 第16-17页 |
| 1.2.2 钙离子信号的识别 | 第17页 |
| 1.2.3 钙离子信号的传导 | 第17-18页 |
| 1.2.4 钙离子结合蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.4.1 含有EF-hand结构的钙离子结合蛋白 | 第18页 |
| 1.2.4.2 含有C2结构的钙离子结合蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.4.3 annexin蛋白 | 第19页 |
| 1.3 植物中的annexin | 第19-24页 |
| 1.3.1 annexin的由来与进化 | 第20页 |
| 1.3.2 annexin的结构与功能 | 第20-24页 |
| 1.3.2.1 annexin与膜结合 | 第21-23页 |
| 1.3.2.1.1 钙离子依赖型 | 第21-22页 |
| 1.3.2.1.2 钙离子非依赖型 | 第22-23页 |
| 1.3.2.2 annexin蛋白与钙离子通道 | 第23-24页 |
| 1.3.2.3 annexin蛋白与非生物胁迫 | 第24页 |
| 1.4 学位论文选题的意义与目的 | 第24-26页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第26-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-34页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.5 主要溶液及培养基 | 第28-33页 |
| 2.1.6 引物(下划线部分为相应酶切位点) | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-47页 |
| 2.2.1 基因组DNA提取方法 | 第34-35页 |
| 2.2.2 CTAB法提取花生总RNA | 第35页 |
| 2.2.3 RNA的纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.4 RNA反转录成cDNA | 第36页 |
| 2.2.5 基因的克隆 | 第36-37页 |
| 2.2.6 目的片段的回收与连接 | 第37页 |
| 2.2.7 大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 2.2.8 质粒转化 | 第37-38页 |
| 2.2.9 菌液PCR鉴定与测序 | 第38页 |
| 2.2.10 基因枪瞬时转化洋葱表皮 | 第38-41页 |
| 2.2.10.1 洋葱表皮的准备 | 第38页 |
| 2.2.10.2 金粉的准备 | 第38-39页 |
| 2.2.10.3 质粒的提取 | 第39页 |
| 2.2.10.4 质粒的浓缩 | 第39-40页 |
| 2.2.10.5 微弹DNA的制备 | 第40页 |
| 2.2.10.6 基因枪转化洋葱表皮 | 第40页 |
| 2.2.10.7 GFP荧光信号的观察 | 第40-41页 |
| 2.2.11 AnnAh1基因的定点突变 | 第41-42页 |
| 2.2.12 SDS-PAGE胶的制备 | 第42-43页 |
| 2.2.13 重组蛋白的诱导表达 | 第43-44页 |
| 2.2.14 SDS-PAGE电泳 | 第44页 |
| 2.2.15 Westem blot | 第44-45页 |
| 2.2.16 纯化目的蛋白 | 第45页 |
| 2.2.17 抗血清的制备 | 第45-46页 |
| 2.2.18 根癌农杆菌LBA4404的转化及验证 | 第46页 |
| 2.2.18.1 农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 2.2.18.2 农杆菌的转化及验证 | 第46页 |
| 2.2.19 烟草的遗传转化 | 第46-47页 |
| 2.2.20 转基因烟草的验证 | 第47页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第47-66页 |
| 3.1 花生AnnAh1基因和AnnAh2基因的序列分析 | 第47-51页 |
| 3.2 不同非生物胁迫下花生AnnAh1基因和AnnAh2基因的表达分析 | 第51-52页 |
| 3.3 花生AnnAh1基因和AnnAh2基因的亚细胞定位分析 | 第52-56页 |
| 3.3.1 亚细胞定位载体的构建 | 第52-54页 |
| 3.3.2 花生AnnAh1基因和AnnAh2基因的瞬时表达 | 第54-56页 |
| 3.4 花生AnnAh1和AnnAh2蛋白抗血清的制备 | 第56-60页 |
| 3.4.1 原核表达载体的构建 | 第56-57页 |
| 3.4.2 重组蛋白的诱导表达 | 第57-59页 |
| 3.4.3 重组蛋白的纯化 | 第59页 |
| 3.4.4 免疫与抗血清的初步验证 | 第59-60页 |
| 3.5 花生AnnAh1基因和AnnAh2基因的抗盐性分析 | 第60-66页 |
| 3.5.1 植物表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 3.5.2 烟草的遗传转化及筛选 | 第61-63页 |
| 3.5.3 NaCl对种子萌发的影响 | 第63-66页 |
| 第四章 讨论 | 第66-69页 |
| 4.1 花生AnnAh1基因和AnnAh2基因的序列分析 | 第66-67页 |
| 4.2 花生AnnAh1基因和AnnAh2基因的亚细胞定位分析 | 第67-68页 |
| 4.3 花生AnnAh1基因和AnnAh2基因的抗盐性分析 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 学位论文评闳及答辩情况表 | 第84页 |
