| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 黄花蒿简介 | 第10页 |
| 1.2 黄花蒿的药用价值 | 第10-11页 |
| 1.2.1 青蒿素介绍 | 第10-11页 |
| 1.2.2 青蒿素衍生物介绍 | 第11页 |
| 1.3 青蒿素合成,分泌,存储场所—腺毛体 | 第11-13页 |
| 1.4 青蒿素生物合成的代谢途径 | 第13-16页 |
| 1.4.1 青蒿素生物合成的上游途径 | 第13-14页 |
| 1.4.2 青蒿素生物合成的下游途径 | 第14-16页 |
| 1.5 影响青蒿素含量的因素 | 第16-18页 |
| 1.5.1 不同植物形态对青蒿素含量的影响 | 第16页 |
| 1.5.2 不同地形对青蒿素含量的影响 | 第16页 |
| 1.5.3 气候条件对青蒿素含量的影响 | 第16-17页 |
| 1.5.4 采集时间以及采集部位的影响 | 第17页 |
| 1.5.5 外源激素对青蒿素含量的影响 | 第17-18页 |
| 1.6 转基因技术提高黄花蒿中青蒿素含量 | 第18-20页 |
| 1.6.1 在黄花蒿中过表达单基因对青蒿素含量影响 | 第18页 |
| 1.6.2 在黄花蒿中同时过表达多基因对青蒿素含量影响 | 第18-19页 |
| 1.6.3 在黄花蒿中抑制竞争支路基因的表达对青蒿素含量影响 | 第19页 |
| 1.6.4 在黄花蒿过表达转录因子对青蒿素含量影响 | 第19-20页 |
| 第二章 绪论 | 第20-22页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第20页 |
| 2.2 研究内容和范围 | 第20-21页 |
| 2.3 研究的技术路线 | 第21-22页 |
| 第三章 DBR2基因的克隆以及植物表达载体的构建 | 第22-34页 |
| 3.1 实验材料以及试剂 | 第22页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 3.1.2 仪器与设备 | 第22页 |
| 3.1.3 试剂以及购买的试剂盒 | 第22页 |
| 3.1.4 主要自配试剂 | 第22页 |
| 3.2 常规实验方法以及步骤 | 第22-27页 |
| 3.2.1 黄花蒿总RNA的提取与检测 | 第22-23页 |
| 3.2.2 RAN反转录为cDNA | 第23-24页 |
| 3.2.3 目的条带的回收 | 第24页 |
| 3.2.4 目的片段与克隆载体T以及质粒载体的连接 | 第24-25页 |
| 3.2.5 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第25页 |
| 3.2.6 农杆菌LB4404感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第25页 |
| 3.2.7 连T产物或重组质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第25-26页 |
| 3.2.8 质粒的抽提 | 第26页 |
| 3.2.9 重组质粒转化 | 第26页 |
| 3.2.10 重组子的鉴定和测序 | 第26-27页 |
| 3.3 DBR2基因的克隆 | 第27-31页 |
| 3.4 pCAMBIA1305-DBR2植物高效表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.5 含DBR2基因工程菌的获得 | 第32-34页 |
| 第四章 转基因黄花蒿的获得 | 第34-42页 |
| 4.1 实验材料 | 第34页 |
| 4.1.1 植物材料与工程菌 | 第34页 |
| 4.1.2 试剂以及仪器设备 | 第34页 |
| 4.2 常规方法步骤 | 第34-35页 |
| 4.2.1 SDS法小量提取黄花蒿基因组DINA | 第34-35页 |
| 4.2.2 荧光定量第一链cDNA的合成 | 第35页 |
| 4.3 黄花蒿的遗传转化 | 第35-37页 |
| 4.3.1 工程菌的两次活化 | 第35-36页 |
| 4.3.2 工程菌侵染黄花蒿叶 | 第36页 |
| 4.3.3 转染叶片的培养 | 第36页 |
| 4.3.4 黄花蒿抗性植株的炼苗与田间试验 | 第36-37页 |
| 4.4 转基因黄花蒿的鉴定 | 第37-39页 |
| 4.5 转基因黄花蒿鉴定的结果与分析 | 第39-42页 |
| 4.5.1 PCR检测 | 第39-40页 |
| 4.5.2 荧光定量PCR检测 | 第40-42页 |
| 第五章 转基因黄花蒿中青蒿素及相关物质的检测 | 第42-50页 |
| 5.1 实验材料 | 第42页 |
| 5.2 试剂与仪器设备 | 第42页 |
| 5.3 实验方法与步骤 | 第42-43页 |
| 5.3.1 青蒿素及相关物质的提取 | 第42页 |
| 5.3.2 HPLC测定青蒿素及相关物质 | 第42-43页 |
| 5.4 青蒿素及相关物质含量测定的结果与分析 | 第43-50页 |
| 5.4.1 青蒿素及相关物质标准曲线的建立 | 第43-44页 |
| 5.4.2 样品和标准品的HPLC图谱 | 第44-45页 |
| 5.4.3 青蒿素含量的测定 | 第45页 |
| 5.4.4 二氢青蒿酸含量的测定 | 第45-46页 |
| 5.4.5 竞争支路上代谢产物的测定 | 第46-50页 |
| 结论与展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-63页 |
| 附录1：常用抗生素以及细菌培养基的配置 | 第58-59页 |
| 附录2：MS培养基配方 | 第59-60页 |
| 附录3：缩略词表 | 第60-62页 |
| 附录4：发表论文情况 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
