| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 生物传感技术 | 第14-16页 |
| 1.1.1 生物传感器的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 生物传感器的应用 | 第15-16页 |
| 1.1.2.1 医学领域 | 第15-16页 |
| 1.1.2.2 食品工业 | 第16页 |
| 1.1.2.3 环境监测 | 第16页 |
| 1.2 纳米通道单分子检测技术 | 第16-18页 |
| 1.2.1 纳米通道单分子检测技术的原理 | 第17页 |
| 1.2.2 生物纳米通道单分子技术概述 | 第17页 |
| 1.2.3 生物纳米通道单分子技术的应用 | 第17-18页 |
| 1.2.3.1 基于生物纳米通道的DNA单分子测序 | 第17-18页 |
| 1.2.3.2 基于生物纳米通道的生物超分子组装体的单分子分析 | 第18页 |
| 1.3 肿瘤 | 第18-21页 |
| 1.3.1 肿瘤抗原 | 第18-19页 |
| 1.3.2 肿瘤标志物 | 第19页 |
| 1.3.3 肿瘤细胞 | 第19页 |
| 1.3.4 常见的肿瘤标志物分析方法 | 第19-21页 |
| 1.3.4.1 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法 | 第20页 |
| 1.3.4.2 蛋白质组学技术 | 第20页 |
| 1.3.4.3 双向电泳技术 | 第20页 |
| 1.3.4.4 胶体金层析技术 | 第20-21页 |
| 1.3.4.5 生物芯片技术 | 第21页 |
| 1.3.5 常见的肿瘤细胞的分析方法 | 第21页 |
| 1.4 本课题的提出以及主要研究内容 | 第21-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-37页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第25-29页 |
| 2.1.1 仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.2 试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.3 实验中主要缓冲溶液的配置 | 第28-29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 基于DNA杂交链式反应结合SYBRGreenI荧光检测人胃癌血清中microRNA | 第29-31页 |
| 2.2.1.1 DNA杂交链式反应 | 第29页 |
| 2.2.1.2 荧光染料的结合与荧光检测 | 第29-30页 |
| 2.2.1.3 microRNA荧光传感器校正曲线的测定 | 第30页 |
| 2.2.1.4 特异性检测 | 第30页 |
| 2.2.1.5 人胃癌血清样品中microRNA表达量的检测 | 第30-31页 |
| 2.2.2 基于发夹型DNA构建的电化学生物传感器灵敏检测甲基化RNA | 第31-33页 |
| 2.2.2.1 电化学信号启动子HRP-IgG-AuNPs的制备 | 第31页 |
| 2.2.2.2 金电极预处理 | 第31页 |
| 2.2.2.3 电沉积纳米金 | 第31-32页 |
| 2.2.2.4 连接反应 | 第32页 |
| 2.2.2.5 电化学信号检测 | 第32-33页 |
| 2.2.2.6 甲基化RNA免疫感器校正曲线的测定 | 第33页 |
| 2.2.2.7 甲基化RNA免疫传感器灵敏性检测 | 第33页 |
| 2.2.2.8 直线型探针和发夹型探针分别构建的甲基化RNA免疫传感器的区别 | 第33页 |
| 2.2.2.9 电化学信号启动子HRP-IgG-AuNP和HRP-IgG分别构建的免疫传感器的区别 | 第33页 |
| 2.2.3 基于生物蛋白纳米孔结合限制性核酸内切酶放大技术实现肿瘤细胞的灵敏检测 | 第33-37页 |
| 2.2.3.1 构建磷脂双分子层 | 第34-35页 |
| 2.2.3.4 连接反应与outputDNA的释放 | 第35页 |
| 2.2.3.5 纳米孔信号记录与数据处理 | 第35-36页 |
| 2.2.3.6 纳米孔道单分子检测细胞的校正曲线测定 | 第36页 |
| 2.2.3.7 特异性检测 | 第36页 |
| 2.2.3.8 人血清样品中肿瘤细胞的检测 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-57页 |
| 3.1 基于DNA杂交链式反应结合SYBRGreenI荧光检测人胃癌血清中microRNA | 第37-42页 |
| 3.1.1 不同反应情况的荧光检测体系的荧光信号表征 | 第37-38页 |
| 3.1.2 条件优化 | 第38-39页 |
| 3.1.3 校正曲线和线性范围 | 第39页 |
| 3.1.4 传感器的选择性和稳定性 | 第39-41页 |
| 3.1.5 正常人与胃癌患者血清中microRNA-21表达量的测定 | 第41-42页 |
| 3.2 基于发夹型DNA构建的电化学生物传感器灵敏检测甲基化RNA | 第42-50页 |
| 3.2.1 实验可行性分析 | 第42-44页 |
| 3.2.2 DPV检测的可行性分析 | 第44页 |
| 3.2.3 条件优化 | 第44-46页 |
| 3.2.4 标准曲线的测定 | 第46-47页 |
| 3.2.5 免疫传感器的重复性、稳定性和选择性 | 第47-48页 |
| 3.2.6 直线型探针和发夹型探针分别构建的甲基化RNA免疫传感器的区别 | 第48-49页 |
| 3.2.7 电化学信号启动子HRP-IgG-AuNP和HRP-IgG分别构建的免疫传感器的区别 | 第49-50页 |
| 3.3 基于生物蛋白纳米孔结合限制性核酸内切酶放大技术实现肿瘤细胞的灵敏检测 | 第50-57页 |
| 3.3.1 对称电解质和不对称电解质体系在检测核酸的灵敏性分析 | 第50-51页 |
| 3.3.2 预实验信号分析 | 第51-52页 |
| 3.3.3 实验可行性分析 | 第52-54页 |
| 3.3.4 标准曲线的绘制 | 第54-55页 |
| 3.3.5 纳米孔结合酶放大技术选择性的研究 | 第55-56页 |
| 3.3.6 血清样品中纳米孔结合酶放大技术检测Ramos细胞的灵敏性分析 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 基于DNA杂交链式反应结合SYBRGreenI荧光检测人胃癌血清中microRNA | 第57-58页 |
| 4.2 基于发夹型DNA构建的电化学生物传感器灵敏检测甲基化RNA | 第58-59页 |
| 4.3 基于生物蛋白纳米孔结合限制性核酸内切酶放大技术实现肿瘤细胞的灵敏检测 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 5.1 基于DNA杂交链式反应结合SYBRGreenI荧光检测人胃癌血清中microRNA | 第60页 |
| 5.2 基于发夹型DNA构建的电化学生物传感器灵敏检测甲基化RNA | 第60页 |
| 5.3 基于生物蛋白纳米孔结合限制性核酸内切酶放大技术实现肿瘤细胞的灵敏检测 | 第60-61页 |
| 6 创新之处 | 第61-62页 |
| 7 参考文献 | 第62-71页 |
| 8 致谢 | 第71-72页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第72页 |
