| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-44页 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌概述 | 第12-22页 |
| 1.1.1 金黄色葡萄球菌简介 | 第12-15页 |
| 1.1.2 金黄色葡萄球菌致病性 | 第15-18页 |
| 1.1.3 金黄色葡萄球菌耐药性 | 第18-21页 |
| 1.1.4 金黄色葡萄球菌感染性疾病的防治 | 第21-22页 |
| 1.2 金黄色葡萄球菌毒性因子概述 | 第22-28页 |
| 1.2.1 金黄色葡萄球菌毒性因子的种类与功能 | 第22-25页 |
| 1.2.2 金黄色葡萄球菌毒性因子的表达调控 | 第25-27页 |
| 1.2.3 金黄色葡萄球菌毒性因子的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.3 金黄色葡萄球菌生物被膜概述 | 第28-35页 |
| 1.3.1 细菌生物被膜简介 | 第28-29页 |
| 1.3.2 金黄色葡萄球菌生物被膜的发育 | 第29-33页 |
| 1.3.3 金黄色葡萄球菌生物被膜主要相关因子与调控 | 第33-35页 |
| 1.3.4 生物被膜相关感染的防治 | 第35页 |
| 1.4 酚可溶性蛋白(PSMs)概述 | 第35-44页 |
| 1.4.1 PSMs简介 | 第35-38页 |
| 1.4.2 PSMs的致病性 | 第38-42页 |
| 1.4.3 金黄色葡萄球菌中PSMs的表达调控 | 第42-43页 |
| 1.4.4 PSMs与抗感染治疗 | 第43-44页 |
| 第二章 金黄色葡萄球菌PSMs的调控机制解析 | 第44-88页 |
| 2.1 研究背景简介 | 第44页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第44-60页 |
| 2.2.1 实验所用菌株、质粒及细菌培养条件 | 第44-46页 |
| 2.2.2 DNA相关操作 | 第46-49页 |
| 2.2.3 细菌感受态制备与转化 | 第49-50页 |
| 2.2.4 金黄色葡萄球菌基因敲除菌株的构建 | 第50-51页 |
| 2.2.5 回补菌株的构建 | 第51页 |
| 2.2.6 金黄色葡萄球菌中RNA相关实验方法 | 第51-53页 |
| 2.2.7 psm基因启动子特异性DNA结合蛋白的筛选与鉴定(DNA pulldown assay) | 第53-54页 |
| 2.2.8 体外表达MgrA蛋白 | 第54页 |
| 2.2.9 凝胶电泳阻滞实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA) | 第54-55页 |
| 2.2.10 DNA酶足迹实验 | 第55页 |
| 2.2.11 金黄色葡萄球菌生理表型实验 | 第55-60页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第60-82页 |
| 2.3.1 psm a操纵子启动子DNA结合蛋白的鉴定 | 第60-61页 |
| 2.3.2 MgrA能够特异性结合psm a启动子序列 | 第61-62页 |
| 2.3.3 MgrA在psm a启动子区域的识别序列与启动子-10和-35区域重合 | 第62-64页 |
| 2.3.4 MgrA编码基因突变菌株的构建 | 第64页 |
| 2.3.5 mgrA突变菌株在对数生长中期存在一个非生长时期 | 第64-65页 |
| 2.3.6 在对数生长中期,mgrA突变菌株的自溶能力增强 | 第65-67页 |
| 2.3.7 MgrA回补质粒能够很好地回补mgrA敲除菌株中mgrA表达的缺失 | 第67-68页 |
| 2.3.8 MgrA是psm a操纵子基因的转录抑制因子 | 第68-69页 |
| 2.3.9 MgrA能够抑制所有类型的psm基因的表达 | 第69-73页 |
| 2.3.10 MgrA通过抑制psm基因的转录从而减少PSMs的产生 | 第73-74页 |
| 2.3.11 MgrA与agr系统协同调节金黄色葡萄球菌中PSMs编码基因的表达水平 | 第74-76页 |
| 2.3.12 MgrA参与生物被膜发育过程的调节 | 第76-77页 |
| 2.3.13 在生物被膜中,MgrA对psm基因的转录抑制作用与细菌在液体培养条件下一致 | 第77-78页 |
| 2.3.14 静态条件下mgrA突变菌株形成一个结构化程度更高的生物被膜 | 第78-80页 |
| 2.3.15 动态条件下mgrA突变菌株生物被膜形成能力以及生物被膜解离速率均明显增强 | 第80-82页 |
| 2.4 讨论 | 第82-88页 |
| 2.4.1 关于MgrA对PSMs编码基因转录调控的讨论 | 第82-83页 |
| 2.4.2 关于MgrA在启动子区域识别位点的讨论 | 第83-85页 |
| 2.4.3 关于MgrA对生物被发育的调控作用的讨论 | 第85-87页 |
| 2.4.4 关于MgrA通过调控PSMs进而调控其他PSMs相关生理表型的讨论 | 第87-88页 |
| 第三章 金黄色葡萄球菌毒性因子的筛选 | 第88-108页 |
| 3.1 研究背景简介 | 第88页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第88-95页 |
| 3.2.1 实验菌株、质粒及细菌培养条件 | 第88-89页 |
| 3.2.2 金黄色葡萄球菌转座子突变体库构建 | 第89-90页 |
| 3.2.3 Southern blot | 第90页 |
| 3.2.4 随机引物PCR (Arbitrary primed PCR) | 第90-91页 |
| 3.2.5 秀丽隐杆线虫感染杀伤模型 | 第91-93页 |
| 3.2.6 细胞侵染模型 | 第93-94页 |
| 3.2.8 基因突变菌株构建 | 第94-95页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第95-104页 |
| 3.3.1 pBTn质粒的验证 | 第95-96页 |
| 3.3.2 构建突变体库 | 第96-98页 |
| 3.3.3 毒性因子的筛选 | 第98-100页 |
| 3.3.4 转座子突变菌株秀丽隐杆线虫杀伤能力分析 | 第100-101页 |
| 3.3.5 转座子突变菌株侵染细胞能力降低 | 第101页 |
| 3.3.6 转座子突变菌株抵抗巨噬细胞吞噬杀伤的能力降低 | 第101-103页 |
| 3.3.7 所选择的基因后续功能研究 | 第103-104页 |
| 3.4 讨论 | 第104-108页 |
| 3.4.1 关于转座子突变体库构建的讨论 | 第104-105页 |
| 3.4.2 关于利用秀丽隐杆线虫模型筛选毒性因子的讨论 | 第105页 |
| 3.4.3 关于细胞模型实验的讨论 | 第105-106页 |
| 3.4.4 本课题后续研究方向讨论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第122页 |
