| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-58页 |
| 1.1 乳腺癌及相关功能基因BRCA1的研究 | 第15-33页 |
| 1.1.1 乳腺癌的发病因素 | 第15-18页 |
| 1.1.2 乳腺癌的病理类型 | 第18-20页 |
| 1.1.2.1 乳腺非浸润性癌 | 第19页 |
| 1.1.2.2 早期浸润癌 | 第19页 |
| 1.1.2.3 浸润性癌 | 第19-20页 |
| 1.1.3 乳腺癌相关功能基因 | 第20-30页 |
| 1.1.3.1 BRCA1基因 | 第21-24页 |
| 1.1.3.2 BRCA2基因 | 第24-26页 |
| 1.1.3.3 PTEN基因 | 第26-27页 |
| 1.1.3.4 ATM基因 | 第27-28页 |
| 1.1.3.5 p53基因 | 第28-29页 |
| 1.1.3.6 c-erbB-2(HER-2/neu)基因 | 第29页 |
| 1.1.3.7 c-myc基因 | 第29-30页 |
| 1.1.3.8 nm23基因 | 第30页 |
| 1.1.4 乳腺癌细胞系的研究现状 | 第30-33页 |
| 1.2 组织培养的概念和发展 | 第33-48页 |
| 1.2.1 组织培养的概念 | 第33-34页 |
| 1.2.2 组织培养的发展及应用 | 第34-38页 |
| 1.2.2.1 在细胞生物学上的应用 | 第35-36页 |
| 1.2.2.2 在细胞胚胎学上的应用 | 第36-37页 |
| 1.2.2.3 在药理学以及药物学上的应用 | 第37-38页 |
| 1.2.3 肿瘤细胞的体外培养 | 第38-48页 |
| 1.2.3.1 培养肿瘤细胞的生物学特性 | 第38-40页 |
| 1.2.3.2 肿瘤细胞体外培养方法 | 第40-46页 |
| 1.2.3.3 提高肿瘤细胞的存活率及生长率的具体措施 | 第46-47页 |
| 1.2.3.4 体外培养肿瘤细胞的注意事项 | 第47页 |
| 1.2.3.5 肿瘤细胞体外培养的重要性 | 第47-48页 |
| 1.3 细胞培养物的应用及其质量控制 | 第48-58页 |
| 1.3.1 细胞培养物质量控制的流程 | 第48-50页 |
| 1.3.2 细胞系质量控制的内容 | 第50-58页 |
| 1.3.2.1 细胞系外源因子污染检测 | 第50-54页 |
| 1.3.2.2 细胞系鉴别试验 | 第54-55页 |
| 1.3.2.3 细胞系的染色体核型分析 | 第55-56页 |
| 1.3.2.4 细胞系的肿瘤原性试验 | 第56-57页 |
| 1.3.2.5 细胞系特殊功能的检测 | 第57-58页 |
| 第二章 乳腺癌细胞系的建立、鉴定 | 第58-88页 |
| 摘要 | 第58页 |
| 2.1 引言 | 第58-59页 |
| 2.2 材料与方法 | 第59-74页 |
| 2.2.1 材料 | 第59-63页 |
| 2.2.1.1 组织材料 | 第59页 |
| 2.2.1.2 细胞系 | 第59-60页 |
| 2.2.1.3 菌种 | 第60页 |
| 2.2.1.4 主要试剂、培养基及药品 | 第60-62页 |
| 2.2.1.5 器材 | 第62-63页 |
| 2.2.1.6 主要仪器 | 第63页 |
| 2.2.2 方法 | 第63-74页 |
| 2.2.2.1 组织的原代培养 | 第63-64页 |
| 2.2.2.2 细胞传代 | 第64-65页 |
| 2.2.2.3 细胞的冻存与复苏 | 第65页 |
| 2.2.2.4 生长曲线的测定 | 第65-66页 |
| 2.2.2.5 细胞系真菌及细菌污染的检测方法 | 第66-67页 |
| 2.2.2.6 细胞系支原体污染的检测方法 | 第67-70页 |
| 2.2.2.7 细胞系的同功酶分析 | 第70-72页 |
| 2.2.2.8 细胞系的免疫组化分析 | 第72-73页 |
| 2.2.2.9 细胞系的成瘤性试验 | 第73-74页 |
| 2.3 结果 | 第74-83页 |
| 2.3.1 乳腺癌细胞系原代培养结果 | 第74-77页 |
| 2.3.2 乳腺癌细胞系生长曲线测定 | 第77-78页 |
| 2.3.3 细胞系细菌、真菌污染检测结果 | 第78页 |
| 2.3.4 细胞系支原体污染检测结果 | 第78-80页 |
| 2.3.5 细胞系同功酶分析结果 | 第80-81页 |
| 2.3.6 细胞系免疫组化分析结果 | 第81-83页 |
| 2.3.7 细胞系成瘤性试验结果 | 第83页 |
| 2.4 讨论 | 第83-87页 |
| 小结和创新点 | 第87-88页 |
| 第三章 乳腺癌相关基因的功能研究 | 第88-114页 |
| 摘要 | 第88页 |
| 3.1 引言 | 第88-90页 |
| 3.2 材料与方法 | 第90-102页 |
| 3.2.1 材料 | 第90-93页 |
| 3.2.1.1 菌株及细胞系 | 第90页 |
| 3.2.1.2 组织材料 | 第90页 |
| 3.2.1.3 载体与试剂 | 第90-93页 |
| 3.2.1.4 仪器设备 | 第93页 |
| 3.2.1.5 数据库及分子生物学软件 | 第93页 |
| 3.2.2 方法 | 第93-102页 |
| 3.2.2.1 BRCA1基因可变剪接体的克隆与鉴定 | 第93-97页 |
| 3.2.2.2 组织及细胞系中BRCA1-E1aA-△2-17的RT-PCR分析 | 第97-98页 |
| 3.2.2.3 细胞的转染以及荧光成像 | 第98-99页 |
| 3.2.2.4 转染细胞的Western blotting分析 | 第99-101页 |
| 3.2.2.5 MTT法测转染细胞相对活力 | 第101-102页 |
| 3.2.2.6 Annexin Ⅴ-FITC/PI双染检测转染细胞凋亡 | 第102页 |
| 3.3 结果 | 第102-111页 |
| 3.3.1 BRCA1基因可变剪接体的克隆与序列分析结果 | 第102-105页 |
| 3.3.2 组织及细胞系中BRCA1-E1aA-△2-17的RT-PCR分析结果 | 第105页 |
| 3.3.3 BRCA1-E1aA-△2-17在细胞中的亚定位研究结果 | 第105-108页 |
| 3.3.4 BRCA1-E1aA-△2-17过量表达对细胞的影响 | 第108-111页 |
| 3.4 讨论 | 第111-113页 |
| 小结和创新点 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-123页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
