| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 综述部分 | 第14-32页 |
| 第一章 提高体细胞核移植效率的研究进展 | 第14-22页 |
| 1.1 体细胞核移植技术的发展 | 第14-15页 |
| 1.2 体细胞核移植方法 | 第15-16页 |
| 1.3 提高核移植效率的方法 | 第16-21页 |
| 1.3.1 受体胞质的选择 | 第16-17页 |
| 1.3.2 供体细胞的选择和处理 | 第17-18页 |
| 1.3.3 激活方法对核移植效率的影响 | 第18-19页 |
| 1.3.4 胞质提取物处理对核移植效率的影响 | 第19-20页 |
| 1.3.5 表观遗传修饰药物处理对核移植效率的影响 | 第20-21页 |
| 1.3.6 抑制Xist 基因的表达对核移植效率的影响 | 第21页 |
| 1.4 展望 | 第21-22页 |
| 第二章 转基因家畜的研究和应用 | 第22-32页 |
| 2.1 转基因动物的生产方法 | 第22-26页 |
| 2.1.1 显微注射法 | 第22-23页 |
| 2.1.2 病毒载体法 | 第23页 |
| 2.1.3 精子载体法 | 第23-24页 |
| 2.1.4 胚胎干细胞介导法 | 第24-25页 |
| 2.1.5 体细胞核移植法 | 第25-26页 |
| 2.2 转基因家畜在农业生产上的应用 | 第26-29页 |
| 2.2.1 提高生产性能 | 第26-27页 |
| 2.2.2 提高产品质量 | 第27页 |
| 2.2.3 提高抗病力 | 第27-29页 |
| 2.3 转基因家畜在生物医学领域的应用 | 第29-30页 |
| 2.3.1 生产药用蛋白和生物制品 | 第29页 |
| 2.3.2 器官移植 | 第29-30页 |
| 2.3.3 人类疾病模型 | 第30页 |
| 2.4 展望 | 第30-32页 |
| 实验研究 | 第32-82页 |
| 第三章 山羊体细胞核移植体系的优化 | 第32-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-34页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂和主要仪器设备 | 第32页 |
| 3.1.3 供体细胞处理 | 第32页 |
| 3.1.4 卵母细胞体外成熟（IVM） | 第32-33页 |
| 3.1.5 核移植（nuclear transfer，NT） | 第33页 |
| 3.1.6 胚胎培养和胚胎移植 | 第33页 |
| 3.1.7 实验设计 | 第33-34页 |
| 3.1.8 数据分析 | 第34页 |
| 3.2 结果 | 第34-39页 |
| 3.2.1 激活时间对山羊克隆胚胎核重塑和早期发育的影响 | 第34-36页 |
| 3.2.2 CB 处理对山羊克隆胚胎发育潜能的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.3 胚胎培养液对山羊克隆胚胎早期发育的影响 | 第37页 |
| 3.2.4 胚胎移植时间对核移植效率的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.5 移植胚胎数量对核移植效率的影响 | 第38-39页 |
| 3.3 讨论 | 第39-41页 |
| 3.4 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 不同胎儿成纤维细胞系对转人溶菌酶基因克隆山羊生产效率的影响 | 第42-61页 |
| 4.1 材料与方法 | 第43-48页 |
| 4.1.1 试验动物 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂和主要仪器 | 第43页 |
| 4.1.3 山羊胎儿的采集 | 第43页 |
| 4.1.4 胎儿成纤维细胞的培养 | 第43-44页 |
| 4.1.5 不同胎儿成纤维细胞系的增殖能力检测 | 第44页 |
| 4.1.6 不同胎儿成纤维细胞系的染色体稳定性检测 | 第44页 |
| 4.1.7 不同胎儿成纤维细胞系的细胞周期和凋亡检测 | 第44页 |
| 4.1.8 转基因载体的准备 | 第44-45页 |
| 4.1.9 胎儿成纤维细胞的转染和筛选 | 第45页 |
| 4.1.10 核移植程序 | 第45-46页 |
| 4.1.11 转基因山羊的鉴定 | 第46-47页 |
| 4.1.12 实验设计 | 第47页 |
| 4.1.13 数据分析 | 第47-48页 |
| 4.2 结果 | 第48-57页 |
| 4.2.1 胎儿成纤维细胞的生长特性和形态 | 第48-49页 |
| 4.2.2 胎儿成纤维细胞的增殖能力和染色体稳定性 | 第49-51页 |
| 4.2.3 胎儿成纤维细胞处理后的细胞周期和细胞凋亡 | 第51-52页 |
| 4.2.4 不同胎儿成纤维细胞系的转染效率 | 第52-53页 |
| 4.2.5 不同转基因细胞系对核移植胚胎植入前发育的影响 | 第53-54页 |
| 4.2.6 不同转基因细胞株对核移植胚胎体内发育的影响 | 第54-56页 |
| 4.2.7 转基因羊PCR 和Southern 鉴定结果 | 第56-57页 |
| 4.3 讨论 | 第57-60页 |
| 4.4 小结 | 第60-61页 |
| 第五章 转人β-防御素3 基因克隆山羊的生产 | 第61-74页 |
| 5.1 材料和方法 | 第62-65页 |
| 5.1.1 试验动物 | 第62页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第62页 |
| 5.1.3 载体 | 第62页 |
| 5.1.4 山羊胎儿成纤维细胞 | 第62页 |
| 5.1.5 转HBD3 基因山羊胎儿成纤维细胞的制备 | 第62-63页 |
| 5.1.6 转HBD3 基因单克隆细胞的PCR 鉴定 | 第63页 |
| 5.1.7 核移植 | 第63-64页 |
| 5.1.8 转基因羊的PCR 鉴定 | 第64页 |
| 5.1.9 转基因羊的southern 鉴定 | 第64-65页 |
| 5.1.10 反向PCR 鉴定整合位点侧翼序列 | 第65页 |
| 5.2 结果 | 第65-72页 |
| 5.2.1 转HBD3 基因山羊胎儿成纤维细胞的筛选和鉴定 | 第65-67页 |
| 5.2.2 转HBD3 基因克隆羊的生产 | 第67-70页 |
| 5.2.3 转HBD3 基因克隆羊的鉴定 | 第70-71页 |
| 5.2.4 反向PCR 鉴定整合位点侧翼序列 | 第71-72页 |
| 5.3 讨论 | 第72-73页 |
| 5.4 小结 | 第73-74页 |
| 第六章 转人防御素-3 基因克隆山羊乳腺上皮细胞诱导表达和继代克隆 | 第74-82页 |
| 6.1 材料和方法 | 第74-77页 |
| 6.1.1 主要试剂和主要仪器 | 第74页 |
| 6.1.2 实验动物 | 第74页 |
| 6.1.3 转基因羊乳腺上皮细胞的分离培养 | 第74-75页 |
| 6.1.4 乳腺上皮细胞的鉴定 | 第75页 |
| 6.1.5 转基因羊乳腺上皮细胞的诱导表达 | 第75页 |
| 6.1.6 利用Tricine SDS-PAGE 电泳和western blot 检测HBD-3 的表达 | 第75-76页 |
| 6.1.7 转基因羊乳腺上皮细胞的继代克隆 | 第76-77页 |
| 6.2 实验结果 | 第77-80页 |
| 6.2.1 转基因羊乳腺上皮细胞的分离培养 | 第77-78页 |
| 6.2.2 转基因羊乳腺上皮细胞的特异性染色 | 第78页 |
| 6.2.3 转基因羊乳腺上皮细胞的HBD3 诱导表达 | 第78-79页 |
| 6.2.4 转基因羊乳腺上皮细胞的继代克隆 | 第79-80页 |
| 6.3 讨论 | 第80-81页 |
| 6.4 小结 | 第81-82页 |
| 全文结论 | 第82-83页 |
| 主要创新点和下一步研究方向 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-103页 |
| 缩略词 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105-106页 |
