| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 序言 | 第10-22页 |
| 1.1 植物遗传转化研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 根癌农杆菌介导植物遗传转化 | 第11-18页 |
| 1.2.1 根癌农杆菌介导的遗传转化机理 | 第11-12页 |
| 1.2.2 农杆菌介导的遗传转化特点 | 第12-13页 |
| 1.2.3 农杆菌介导植物遗传转化的影响因素 | 第13-18页 |
| 1.2.3.1 工程菌的的制备 | 第13-14页 |
| 1.2.3.2 外植体的选择 | 第14-16页 |
| 1.2.3.3 外植体的预培养、接种及与农杆菌的共培养 | 第16-17页 |
| 1.2.3.4 外植体脱菌与选择培养 | 第17-18页 |
| 1.3 农杆菌介导转化植物悬浮细胞研究 | 第18页 |
| 1.4 橡胶树遗传转化的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 1.6 技术路线 | 第21-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-37页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 农杆菌菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.2 组织培养条件和试验所用重要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.1 组织培养条件 | 第22页 |
| 2.2.2 试验所用重要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 试验用培养基及其成分 | 第23页 |
| 2.3 根癌农杆菌介导转化橡胶树胚性细胞悬浮系研究 | 第23-27页 |
| 2.3.1 根癌农杆菌的培养 | 第23-24页 |
| 2.3.2 适宜抗生素浓度确定试验 | 第24页 |
| 2.3.2.1 胚性愈伤组织对不同抗生素浓度的敏感性试验 | 第24页 |
| 2.3.2.2 不同浓度的替卡西林对农杆菌的抑制作用 | 第24页 |
| 2.3.3 农杆菌介导转化橡胶树胚性悬浮细胞影响因素试验 | 第24-26页 |
| 2.3.3.1 农杆菌菌液浓度对转化效率的影响 | 第24-25页 |
| 2.3.3.2 共培养方式对转化效率的影响 | 第25页 |
| 2.3.3.3 共培养基pH值对转化效率的影响 | 第25页 |
| 2.3.3.4 共培养基中附加AS对转化效率的影响 | 第25页 |
| 2.3.3.5 共培养温度对转化效率的影响 | 第25页 |
| 2.3.3.6 共培养时间对转化效率的影响 | 第25-26页 |
| 2.3.4 GUS组织化学染色及FDA细胞活性测定 | 第26页 |
| 2.3.4.1 GUS组织化学染色 | 第26页 |
| 2.3.4.2 FDA细胞活性测定 | 第26页 |
| 2.3.5 试验数据统计与分析 | 第26-27页 |
| 2.3.6 抗性愈伤组织的筛选 | 第27页 |
| 2.3.7 抗性愈伤组织诱导体细胞胚与植株再生 | 第27页 |
| 2.4 拟转化植株的分子检测 | 第27-37页 |
| 2.4.1 橡胶树幼苗基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.4.2 检测引物的设计 | 第28页 |
| 2.4.3 拟转化植株uidA和npt-Ⅱ基因的PCR检测 | 第28-29页 |
| 2.4.4 PCR产物的回收 | 第29-30页 |
| 2.4.5 PCR目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第30-31页 |
| 2.4.5.1 连接反应 | 第30页 |
| 2.4.5.2 感受态E.coli JM109的制备 | 第30页 |
| 2.4.5.3 感受态鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4.5.4 转化 | 第31页 |
| 2.4.5.5 阳性菌的PCR鉴定及克隆基因测序 | 第31页 |
| 2.4.6 橡胶树基因组DNA酶切 | 第31-32页 |
| 2.4.7 DNA杂交(Southern blotting) | 第32-37页 |
| 2.4.7.1 杂交所需试剂准备 | 第32-33页 |
| 2.4.7.2 DNA的印迹转移 | 第33页 |
| 2.4.7.3 尼龙膜的固定 | 第33-34页 |
| 2.4.7.4 探针的制备 | 第34-35页 |
| 2.4.7.5 杂交 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-54页 |
| 3.1 橡胶树胚性愈伤组织对不同浓度的抗生素敏感性试验 | 第37-38页 |
| 3.1.1 橡胶树胚性愈伤组织对不同替卡西林浓度的敏感性 | 第37页 |
| 3.1.2 橡胶树愈伤组织对不同卡那霉素浓度的敏感性试验 | 第37-38页 |
| 3.2 不同浓度的替卡西林对农杆菌的抑制效果 | 第38-39页 |
| 3.3 农杆菌介导转化橡胶树胚性悬浮细胞影响因素 | 第39-43页 |
| 3.3.1 农杆菌浓度对转化的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.2 共培养方式对转化的影响 | 第40页 |
| 3.3.3 共培养基pH值对转化的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.4 共培养AS浓度对转化的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.5 共培养温度对转化的影响 | 第42页 |
| 3.3.6 共培养时间对转化的影响 | 第42-43页 |
| 3.4 抗性愈伤组织的筛选 | 第43-44页 |
| 3.5 抗性愈伤组织诱导胚状体及植株再生 | 第44-46页 |
| 3.6 抗性愈伤组织、胚状体及再生植株GUS组织化学染色检测 | 第46-47页 |
| 3.7 拟转化植株的分子检测 | 第47-54页 |
| 3.7.1 拟转化植株幼苗基因组DNA的提取 | 第47-48页 |
| 3.7.2 拟转化植株PCR检测 | 第48-49页 |
| 3.7.3 拟转化植株PCR产物测序分析 | 第49-50页 |
| 3.7.4 拟转化植株基因组DNA酶切 | 第50-53页 |
| 3.7.5 拟转化植株的npt-Ⅱ基因Southern杂交分析 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 4.1 转化的外植体选择 | 第54页 |
| 4.2 农杆菌介导转化橡胶树胚性悬浮细胞的主要影响因素 | 第54-55页 |
| 4.3 转化对再生植株的影响 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 附表1 | 第57-58页 |
| 附表2 | 第58-59页 |
| 缩略词 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
