| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 缩略词索引表 | 第12-13页 |
| 第一部分 番茄溃疡病菌的生物学特性及检测技术和单克隆抗体研究进展 | 第13-25页 |
| 第一节 番茄溃疡病菌的生物特性、危害程度及流行情况 | 第13-15页 |
| 1.1 番茄溃疡病菌的生物特性及症状危害 | 第13-15页 |
| 1.2 番茄溃疡病菌传播和流行 | 第15页 |
| 第二节 番茄溃疡病菌检测技术现状和研究进展 | 第15-18页 |
| 2.1 血清学方法检测 | 第15-16页 |
| 2.1.1 酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) | 第15-16页 |
| 2.1.2 免疫荧光法(Immunofluorescence,IF) | 第16页 |
| 2.2 分离培养法 | 第16-17页 |
| 2.3 分子生物学方法 | 第17-18页 |
| 2.3.1 DNA探针(DNA-probe)杂交 | 第17页 |
| 2.3.2 PCR方法 | 第17-18页 |
| 第三节 杂交瘤细胞和单克隆抗体的制备原理、研究进展及其应用 | 第18-24页 |
| 3.1 单克隆抗体产生历史和原理 | 第18-20页 |
| 3.1.1 单克隆抗体的概念 | 第18页 |
| 3.1.2 淋巴细胞杂交瘤的发展简史 | 第18-19页 |
| 3.1.3 杂交瘤单克隆抗体技术的理论基础 | 第19-20页 |
| 3.2 单克隆抗体制备流程图 | 第20-21页 |
| 3.3 单克隆抗体的研究进展 | 第21-22页 |
| 3.3.1 嵌合抗体 | 第21页 |
| 3.3.2 噬菌体抗体库技术 | 第21-22页 |
| 3.3.3 核糖体展示技术 | 第22页 |
| 3.3.4 转基因小鼠制备全人抗体 | 第22页 |
| 3.4 单克隆抗体的应用 | 第22-24页 |
| 3.4.1 单抗的预防应用 | 第23页 |
| 3.4.2 单抗的治疗应用 | 第23页 |
| 3.4.3 单抗的诊断及检测应用 | 第23-24页 |
| 立题依据和研究意义 | 第24-25页 |
| 第二部分 番茄溃疡病菌多克隆抗体、单克隆抗体的制备与鉴定 | 第25-42页 |
| (一) 材料 | 第25-28页 |
| (二) 方法 | 第28-42页 |
| 1. 番茄溃疡病菌多克隆抗体的制备 | 第28-32页 |
| 1.1 抗原制备 | 第28-29页 |
| 1.1.1 菌种活化和培养 | 第28页 |
| 1.1.2 PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 1.2 新西兰兔免疫方法 | 第29-30页 |
| 1.3 间接ELISA方法测定多抗血清效价 | 第30页 |
| 1.4 免疫兔血清采集 | 第30-31页 |
| 1.5 血清的纯化 | 第31页 |
| 1.6 pAb的Western blot鉴定 | 第31-32页 |
| 2 番茄溃疡病菌单克隆抗体的制备及鉴定 | 第32-42页 |
| 2.1 抗原制备(同多抗) | 第32页 |
| 2.2 动物免疫 | 第32-33页 |
| 2.3 小鼠血清效价的检测 | 第33页 |
| 2.4 骨髓瘤SP2/0细胞的复苏、扩大培养和收集 | 第33-34页 |
| 2.5 饲养层细胞的制备 | 第34页 |
| 2.6 细胞融合 | 第34-35页 |
| 2.6.1 免疫脾细胞悬液的制备 | 第34-35页 |
| 2.6.2 细胞融合方法 | 第35页 |
| 2.7 杂交瘤细胞的筛选 | 第35-36页 |
| 2.8 杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法)[57] | 第36-37页 |
| 2.9 杂交瘤细胞株的扩大培养及冻存和复苏 | 第37-38页 |
| 2.10 单克隆抗体腹水的制备 | 第38页 |
| 2.11 单克隆抗体的纯化 | 第38-39页 |
| 2.12 紫外分光光度计测定蛋白含量[60] | 第39页 |
| 2.13 单克隆抗体的鉴定 | 第39-42页 |
| 2.13.1 单抗效价的测定[61] | 第39页 |
| 2.13.2 单克隆抗体亚类鉴定 | 第39-40页 |
| 2.13.3 单克隆抗体相对亲和力测定[62] | 第40页 |
| 2.13.4 单克隆抗体的特异性测定 | 第40页 |
| 2.13.5 单克隆抗体杂交瘤细胞染色体分型[63] | 第40-41页 |
| 2.13.6 McAb的Western-blot的鉴定[64] | 第41-42页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第42-55页 |
| 3.1 PCR鉴定结果 | 第42页 |
| 3.2 多克隆抗体制备结果 | 第42-44页 |
| 3.2.1 兔抗体血清效价测定结果 | 第42-43页 |
| 3.2.2 多克隆抗体IgG SDS-PAGE结果 | 第43-44页 |
| 3.3 单克隆抗体制备结果 | 第44-55页 |
| 3.3.1 最佳抗原、抗体浓度的确定 | 第44-45页 |
| 3.3.2 免疫与融合小鼠的选择 | 第45-46页 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞株的亚克隆、筛选 | 第46-47页 |
| 3.3.4 单克隆抗体效价 | 第47-49页 |
| 3.3.5 单克隆抗体亚类鉴定及蛋白浓度测定 | 第49页 |
| 3.3.6 杂交瘤细胞染色体分析 | 第49-50页 |
| 3.3.7 腹水制备与腹水蛋白纯化结果分析 | 第50-52页 |
| 3.3.8 单克隆抗体亲和力测定 | 第52-53页 |
| 3.3.9 单克隆体特异性鉴定 | 第53-55页 |
| 第四部分 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 抗原和动物免疫 | 第55页 |
| 4.2 细胞融合 | 第55-56页 |
| 4.3 杂交瘤细胞的培养观察和单抗的筛选检测 | 第56页 |
| 4.4 单抗腹水的制备 | 第56-57页 |
| 4.5 单抗结果分析 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
