| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 1.1 丹参中的主要成分 | 第16-17页 |
| 1.2 丹参酚酸类成分生源合成及调控研究进展 | 第17-24页 |
| 1.2.1 酚酸类成分生源途径研究进展 | 第17-21页 |
| 1.2.2 丹参中迷迭香酸生源途径的相关基因 | 第21-23页 |
| 1.2.3 丹参酚酸类成分合成积累调控研究进展 | 第23-24页 |
| 1.3 丹参基因组学与功能基因组学研究进展 | 第24-25页 |
| 1.4 植物 MYB 转录因子研究进展 | 第25-33页 |
| 1.4.1 MYB 转录因子的发现 | 第25页 |
| 1.4.2 MYB 转录因子的结构及分类 | 第25-26页 |
| 1.4.3 MYB 转录因子的进化 | 第26-28页 |
| 1.4.4 植物 MYB 转录因子的生物学功能 | 第28-31页 |
| 1.4.5 植物 MYB 转录因子的表达调控 | 第31-32页 |
| 1.4.6 植物 MYB 转录因子的 DNA 结合特性 | 第32-33页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第33页 |
| 1.6 本研究的创新点 | 第33-34页 |
| 1.7 本研究的技术路线 | 第34-36页 |
| 第二章 丹参 MYB 转录因子基因的克隆和组织特异性表达 | 第36-67页 |
| 2.1 引言 | 第36页 |
| 2.2 材料、试剂与仪器 | 第36-39页 |
| 2.2.1 丹参无菌苗的获得与培养 | 第36-37页 |
| 2.2.2 菌株与载体 | 第37页 |
| 2.2.3 试剂 | 第37页 |
| 2.2.4 缓冲液 | 第37页 |
| 2.2.5 培养基 | 第37-38页 |
| 2.2.6 主要仪器 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-50页 |
| 2.3.1 丹参 Total RNA 的提取 | 第39-40页 |
| 2.3.2 反转录反应 | 第40页 |
| 2.3.3 R2R3 MYB 同源片段的获得 | 第40-42页 |
| 2.3.4 R2R3 MYB 基因 cDNA 序列的 5' 和 3' RACE 扩增 | 第42-44页 |
| 2.3.5 丹参 R2R3 MYB 转录因子基因 cDNA 全长序列的克隆 | 第44-45页 |
| 2.3.6 丹参 R2R3 MYB 转录因子基因 DNA 序列的克隆 | 第45-46页 |
| 2.3.7 丹参 MYB 转录因子基因启动子克隆 | 第46-49页 |
| 2.3.8 生物信息学分析 | 第49页 |
| 2.3.9 丹参 R2R3 MYB 转录因子基因的组织特异性表达 | 第49-50页 |
| 2.4 实验结果 | 第50-65页 |
| 2.4.1 丹参 Total RNA 的提取与检测 | 第50-51页 |
| 2.4.2 丹参 R2R3 MYB 转录因子基因保守序列的获得 | 第51页 |
| 2.4.3 丹参 R2R3 MYB 转录因子基因 cDNA 5' 和 3' 序列的获得 | 第51-52页 |
| 2.4.4 丹参 R2R3 MYB 转录因子基因 cDNA 全长序列的获得 | 第52-53页 |
| 2.4.5 丹参 R2R3 MYB 转录因子基因序列分析 | 第53-64页 |
| 2.4.6 丹参 R2R3 MYB 转录因子基因的组织特异性表达 | 第64-65页 |
| 2.5 讨论 | 第65-67页 |
| 第三章 丹参 MYB 转录因子的亚细胞定位 | 第67-79页 |
| 3.1 引言 | 第67页 |
| 3.2 材料、试剂与仪器 | 第67-68页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第67页 |
| 3.2.2 菌株与载体 | 第67页 |
| 3.2.3 试剂 | 第67页 |
| 3.2.4 培养基 | 第67-68页 |
| 3.2.5 主要仪器 | 第68页 |
| 3.3 实验方法 | 第68-73页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第68页 |
| 3.3.2 丹参 Total RNA 的提取 | 第68页 |
| 3.3.3 反转录反应 | 第68页 |
| 3.3.4 PCR 获得目标序列 | 第68-69页 |
| 3.3.5 PCR 产物的纯化回收 | 第69页 |
| 3.3.6 纯化回收产物及 pTF-486 质粒的酶切反应 | 第69页 |
| 3.3.7 酶切产物的纯化回收 | 第69页 |
| 3.3.8 PCR 片段与 pTF-486 质粒连接 | 第69-70页 |
| 3.3.9 连接产物转化大肠杆菌 DH5α，涂板和筛选 | 第70页 |
| 3.3.10 质粒酶切鉴定重组质粒 | 第70-71页 |
| 3.3.11 质粒大提 | 第71-72页 |
| 3.3.12 基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第72-73页 |
| 3.4 实验结果 | 第73-76页 |
| 3.4.1 绿色荧光蛋白融合表达载体 pTF-486-SmMYB39，pTF-486-SmMYB29，pTF-486-SmMYB87 和 pTF-486-SmMYB36 的构建 | 第73-75页 |
| 3.4.2 重组质粒的菌落 PCR 鉴定 | 第75-76页 |
| 3.4.3 重组质粒的双酶切鉴定 | 第76页 |
| 3.4.4 重组质粒在洋葱表皮细胞中的瞬时表达 | 第76页 |
| 3.5 讨论 | 第76-79页 |
| 第四章 丹参 MYB 转录因子在酚酸类成分合成积累中的作用 | 第79-107页 |
| 4.1 引言 | 第79页 |
| 4.2 材料、试剂与仪器 | 第79-80页 |
| 4.2.1 丹参无菌苗的获得与培养 | 第79-80页 |
| 4.2.2 菌株与载体 | 第80页 |
| 4.2.3 试剂 | 第80页 |
| 4.2.4 培养基 | 第80页 |
| 4.2.5 主要仪器 | 第80页 |
| 4.3 实验方法 | 第80-93页 |
| 4.3.1 丹参 Total RNA 的提取 | 第80页 |
| 4.3.2 反转录反应 | 第80页 |
| 4.3.3 植物过表达载体的构建 | 第80-85页 |
| 4.3.4 RNAi 沉默表达载体的构建 | 第85-88页 |
| 4.3.5 EHA105 感受态细胞的制备及电转化 | 第88页 |
| 4.3.6 农杆菌介导的植物转化及抗性丹参幼苗的获得 | 第88-89页 |
| 4.3.7 过表达和 RNAi 沉默植株的分子鉴定 | 第89-91页 |
| 4.3.8 丹参酸类成分含量测定 | 第91页 |
| 4.3.9 总酚含量的测定 | 第91-92页 |
| 4.3.10 Real-time PCR 测定相关基因表达量 | 第92-93页 |
| 4.3.11 C4H 和 TAT 酶活性测定 | 第93页 |
| 4.3.12 数据分析 | 第93页 |
| 4.4 实验结果 | 第93-105页 |
| 4.4.1 植物过表达载体的构建 | 第93-97页 |
| 4.4.2 RNAi 沉默植物表达载体的构建 | 第97-99页 |
| 4.4.3 过表达和 RNAi 沉默植株的分子鉴定 | 第99-100页 |
| 4.4.4 目的基因过表达和 RNAi 沉默对丹参酚酸类成分合成积累的影响 | 第100-102页 |
| 4.4.5 SmMYB39 过表达和 RNAi 沉默对迷迭香酸途径上相关酶基因表达的影响 | 第102-103页 |
| 4.4.6 SmMYB39 过表达和 RNAi 沉默对 C4H 和 TAT 酶活性的影响 | 第103-105页 |
| 4.5 讨论 | 第105-107页 |
| 第五章 CHS RNAi 沉默和水杨酸诱导子对丹参毛状根酚酸类成分积累的影响 | 第107-124页 |
| 5.1 引言 | 第107-108页 |
| 5.2 材料、试剂与方法 | 第108-109页 |
| 5.2.1 材料 | 第108页 |
| 5.2.2 菌株与载体 | 第108页 |
| 5.2.3 试剂 | 第108页 |
| 5.2.4 培养基 | 第108-109页 |
| 5.2.5 主要仪器 | 第109页 |
| 5.3 实验方法 | 第109-113页 |
| 5.3.1 丹参 CHS 基因保守片段的获得 | 第109-110页 |
| 5.3.2 CHS RNAi 沉默表达载体的构建 | 第110-111页 |
| 5.3.3 发根农杆菌 ATCC15834 感受态细胞的制备及电转化 | 第111页 |
| 5.3.4 农杆菌介导的植物转化及抗性丹参毛状根的获得 | 第111页 |
| 5.3.5 丹参毛状根的分子鉴定 | 第111-112页 |
| 5.3.6 水杨酸诱导子处理 | 第112页 |
| 5.3.7 总黄酮含量测定 | 第112-113页 |
| 5.3.8 酚酸类成分的 HPLC 测定 | 第113页 |
| 5.3.9 Real-time PCR 测定相关基因的表达量 | 第113页 |
| 5.3.10 数据分析 | 第113页 |
| 5.4 实验结果 | 第113-122页 |
| 5.4.1 丹参 CHS 基因保守片段的获得 | 第113-115页 |
| 5.4.2 CHS RNAi 沉默表达载体的构建 | 第115-117页 |
| 5.4.3 丹参毛状根的分子鉴定 | 第117-118页 |
| 5.4.4 CHS RNAi 沉默和水杨酸诱导子对丹参毛状根中酚酸类成分和总黄酮含 量的影响 | 第118-121页 |
| 5.4.5 CHS RNAi 沉默和水杨酸诱导子对相关基因表达量的影响 | 第121-122页 |
| 5.5 讨论 | 第122-124页 |
| 第六章 诱导子介导的丹参酚酸类成分合成积累的调控研究 | 第124-133页 |
| 6.1 引言 | 第124页 |
| 6.2 材料、试剂与仪器 | 第124-125页 |
| 6.2.1 材料 | 第124页 |
| 6.2.2 菌株 | 第124页 |
| 6.2.3 试剂 | 第124页 |
| 6.2.4 缓冲液 | 第124页 |
| 6.2.5 培养基 | 第124-125页 |
| 6.2.6 主要仪器 | 第125页 |
| 6.3 实验方法 | 第125-126页 |
| 6.3.1 诱导子制备 | 第125页 |
| 6.3.2 诱导实验 | 第125页 |
| 6.3.3 迷迭香酸和丹酚酸 B 含量 HPLC 测定 | 第125页 |
| 6.3.4 总酚含量测定 | 第125页 |
| 6.3.5 Real-time PCR 测定相关基因表达量 | 第125-126页 |
| 6.3.6 PAL、C4H 和 TAT 酶活性测定 | 第126页 |
| 6.3.7 数据分析 | 第126页 |
| 6.4 实验结果 | 第126-129页 |
| 6.4.1 诱导子对丹参毛状根形态学性状和生物量积累的影响 | 第126页 |
| 6.4.2 诱导子对丹参毛状根酚酸类成分积累的影响 | 第126-127页 |
| 6.4.3 迷迭香酸两条平行途径上的关键酶基因在转录水平上对诱导子的不同响 应 | 第127-128页 |
| 6.4.4 PAL、C4H 和 TAT 酶活性对诱导子的不同响应 | 第128-129页 |
| 6.5 讨论 | 第129-133页 |
| 第七章 总结 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
| 作者简介 | 第151页 |
