| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 缩写说明 | 第8-9页 |
| 第一章 研究背景 | 第9-17页 |
| 1.1 引言 | 第9-10页 |
| 1.2 肿瘤发生 | 第10-12页 |
| 1.2.1 肿瘤发生的基因突变学说 | 第10-11页 |
| 1.2.2 抑癌基因 TP53 | 第11页 |
| 1.2.3 DNA 损伤与 ATM-p53 信号通路 | 第11-12页 |
| 1.2.4 抑癌基因 E2F1 | 第12页 |
| 1.3 Smad 蛋白 | 第12-16页 |
| 1.3.1 Smad 蛋白介导的 TGF-β信号通路 | 第13-14页 |
| 1.3.2 BMP-Smad 信号通路 | 第14-15页 |
| 1.3.3 Smad 蛋白与肿瘤 | 第15-16页 |
| 1.4 阿霉素简介 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第17-34页 |
| 2.1 仪器、材料和试剂 | 第17-21页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第17页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第17页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第17-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-34页 |
| 2.2.1 小鼠基因组 DNA 提取 | 第21页 |
| 2.2.2 p53 基因敲除小鼠基因型 PCR 鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 2.2.4 原代 MEF 细胞提取 | 第23页 |
| 2.2.5 原代 MEF 细胞复苏与传代培养 | 第23-24页 |
| 2.2.6 原代 MEF 细胞 siRNA 转染 | 第24页 |
| 2.2.7 原代 MEF 细胞的瞬时质粒转染 | 第24-25页 |
| 2.2.8 Plat E 细胞的逆转录病毒包装 | 第25页 |
| 2.2.9 原代 MEF 细胞的逆转录病毒 shRNA 转染 | 第25-26页 |
| 2.2.10 细胞总蛋白的提取与定量 | 第26-27页 |
| 2.2.11 细胞总 RNA 提取与反转录 | 第27-28页 |
| 2.2.12 Western Blot 检测 | 第28页 |
| 2.2.13 Real time PCR 检测 | 第28-29页 |
| 2.2.14 细胞增殖的 Brdu 检测 | 第29-30页 |
| 2.2.15 细胞毒性与增殖检测的 WST-1 检测 | 第30页 |
| 2.2.16 活细胞台盼蓝染色计数 | 第30-31页 |
| 2.2.17 E1A/RasV12诱导的原代 MEF 细胞克隆形成 | 第31页 |
| 2.2.18 裸鼠模型的肿瘤形成实验 | 第31-32页 |
| 2.2.19 化疗药物阿霉素裸鼠注射 | 第32页 |
| 2.2.20 肿瘤组织冰冻切片以及 HE 染色形态观察 | 第32-34页 |
| 第三章 实验结果 | 第34-50页 |
| 3.1 人直肠癌中 p53 蛋白缺失造成 Smad1 蛋白表达上调 | 第34-37页 |
| 3.2 敲低 Smad1 蛋白，而非 Smad5 蛋白，促进 p53-/- MEF 增殖 | 第37-40页 |
| 3.3 敲低 smad1 蛋白的表达促进 p53-/-细胞转化 | 第40-42页 |
| 3.4 敲低 smad1 蛋白的表达促进 p53-/-细胞的肿瘤形成 | 第42-44页 |
| 3.5 敲低 smad1 蛋白表达促进阿霉素对肿瘤的化疗效果 | 第44-47页 |
| 3.6 敲低 Smad1 蛋白促进人直肠癌细胞对 Dox 的敏感性 | 第47-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 总结与展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录一 实验仪器 | 第59-61页 |
| 附录二 实验试剂配方 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
