| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第9-20页 |
| 1.1 乳酸菌研究现状 | 第9-10页 |
| 1.1.1 乳酸菌在饲料行业的应用 | 第9页 |
| 1.1.2 乳酸菌在食品行业的应用 | 第9页 |
| 1.1.3 乳酸菌在医疗保健行业的应用 | 第9-10页 |
| 1.1.4 乳酸菌在微生态制剂行业的应用 | 第10页 |
| 1.1.5 乳酸菌在人工口服疫苗行业的应用 | 第10页 |
| 1.2 外源基因在乳酸菌中的表达 | 第10-12页 |
| 1.2.1 胞内表达 | 第11页 |
| 1.2.2 胞外表达 | 第11-12页 |
| 1.2.3 胞壁表达 | 第12页 |
| 1.3 融合表达载体 | 第12-15页 |
| 1.3.1 为蛋白纯化提供亲和标签的融合表达载体 | 第13-14页 |
| 1.3.2 提高蛋白可溶性的融合载体 | 第14-15页 |
| 1.3.3 报告基因检测系统 | 第15页 |
| 1.4 红色荧光蛋白 | 第15-18页 |
| 1.4.1 红色荧光蛋白的理化性质 | 第15-16页 |
| 1.4.2 红色荧光蛋白的修饰改进 | 第16-17页 |
| 1.4.3 红色荧光蛋白的应用 | 第17-18页 |
| 1.5 淀粉酶基因 | 第18-19页 |
| 1.6 技术路线图 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 菌种 | 第20页 |
| 2.2 培养基 | 第20-21页 |
| 2.3 主要试剂 | 第21页 |
| 2.3.1 常规生化试剂 | 第21页 |
| 2.3.2 分子生物学试剂 | 第21页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.5 引物设计 | 第22页 |
| 2.6 试验试剂及药品的配置 | 第22-24页 |
| 2.7 试验方法 | 第24-34页 |
| 2.7.1 dsred2 基因的克隆 | 第24-25页 |
| 2.7.2 dsred2 基因克隆到 pMG36e 载体 | 第25-27页 |
| 2.7.3 pMG36e- dsred2 电转化干酪乳杆菌 | 第27-28页 |
| 2.7.4 α-淀粉酶基因的克隆 | 第28-30页 |
| 2.7.5 amy 基因克隆到 pMG36-dsred2 载体 | 第30-31页 |
| 2.7.6 pMG36e -dsred2-amy 电转化干酪乳杆菌[94] | 第31页 |
| 2.7.7 融合表达载体表达活性检测 | 第31-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-44页 |
| 3.1 dsred2 基因的克隆 | 第34-35页 |
| 3.1.1 质粒 pPIC9k-dsred2 的提取 | 第34页 |
| 3.1.2 dsred2 基因克隆到 T 载体 | 第34-35页 |
| 3.2 dsred2 基因克隆到 PMG36E 载体 | 第35-37页 |
| 3.3 amy 基因的克隆 | 第37-41页 |
| 3.3.1 提取地衣芽孢杆菌的基因组 DNA | 第37页 |
| 3.3.2 amy 基因克隆到 T 载体 | 第37-39页 |
| 3.3.3 α-淀粉酶基因克隆到载体 pMG36-dsred2 | 第39-40页 |
| 3.3.4 pMG36-dsred2-amy 电转化乳酸菌 | 第40-41页 |
| 3.4 融合表达载体表达活性检测 | 第41-44页 |
| 3.4.1 荧光检测 | 第41-43页 |
| 3.4.2 淀粉酶活性检测 | 第43页 |
| 3.4.3 SDS-PAGE 蛋白电泳检测 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-48页 |
| 4.1 乳酸菌融合表达系统 | 第44页 |
| 4.2 引物设计 | 第44-45页 |
| 4.3 红的荧光蛋白 dsred 基因的表达 | 第45-46页 |
| 4.3.1 红色荧光蛋白基因在载体 pMD19-T 上的表达 | 第45-46页 |
| 4.3.2 红色荧光蛋白在载体 pMG36e 上的表达 | 第46页 |
| 4.4 amy 基因的表达 | 第46-47页 |
| 4.5 融合基因的表达 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录1 碱裂解法提取质粒 | 第55-56页 |
| 附录2 PCR 产物的纯化 | 第56-57页 |
| 附录3 重组载体热击转化大肠杆菌 | 第57-58页 |
| 附录4 dsred2 基因测序结果 | 第58-59页 |
| 附录5 amy 基因测序结果 | 第59-60页 |
| 在校期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
