中文摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
英文缩略词表 | 第11-14页 |
第一部分 文献综述 | 第14-37页 |
1 微丝骨架 | 第14-15页 |
2 微丝骨架动态变化调节气孔运动 | 第15-17页 |
3 参与调节微丝骨架动态变化的相关蛋白及信号分子 | 第17-27页 |
3.1 微丝结合蛋白 | 第17-26页 |
3.2 相关离子 | 第26-27页 |
3.3 肌醇磷脂类 | 第27页 |
4 磷酸化与微丝骨架动态变化 | 第27-28页 |
5 酪蛋白激酶 Ⅰ的功能研究进展 | 第28-30页 |
5.1 酪蛋白激酶Ⅰ的结构 | 第28-29页 |
5.2 酪蛋白激酶Ⅰ磷酸化底物及生理功能 | 第29-30页 |
5.3 酪蛋白激酶Ⅰ的表达调控 | 第30页 |
6 微丝骨架动态变化的研究技术 | 第30-35页 |
6.1 常用的活细胞微丝标记及显微技术 | 第30-32页 |
6.2 微丝骨架动态分类 | 第32-34页 |
6.2.1 微丝形成 | 第32页 |
6.2.2 微丝随机动态 | 第32-33页 |
6.2.3 微丝重组 | 第33-34页 |
6.3 微丝性状及动态变化相关参数 | 第34-35页 |
7 研究目的 | 第35-36页 |
8 研究意义 | 第36-37页 |
第二部分 实验论文 | 第37-115页 |
一、实验材料和方法 | 第37-70页 |
1 实验材料 | 第37-49页 |
1.1 植物材料 | 第37页 |
1.2 常用菌株及质粒载体 | 第37-39页 |
1.2.1 组织定位分析载体 | 第37-38页 |
1.2.2 亚细胞定位分析载体 | 第38页 |
1.2.3 免疫共沉淀分析载体 | 第38页 |
1.2.4 过表达转基因株系构建载体 | 第38页 |
1.2.5 SCRP1全长互补载体构建 | 第38-39页 |
1.2.6 双分子荧光互补实验分析载体构建 | 第39页 |
1.2.7 原核蛋白表达载体构建 | 第39页 |
1.3 酶及试剂 | 第39-40页 |
1.4 实验仪器设备 | 第40-42页 |
1.5 引物序列 | 第42-43页 |
1.6 常用培养基 | 第43页 |
1.7 常用试剂的配制 | 第43-48页 |
1.8 常用分析软件 | 第48-49页 |
2 实验方法 | 第49-70页 |
2.1 植物材料的培养 | 第49页 |
2.2 基本分子生物学实验技术 | 第49-70页 |
2.2.1 T-DNA插入突变体基因型鉴定 | 第49-50页 |
2.2.2 离体叶片失水实验及ABA介导的气孔关闭检测 | 第50-51页 |
2.2.3 叶温检测 | 第51页 |
2.2.4 拟南芥总RNA小量提取及RT-PCR | 第51-52页 |
2.2.5 荧光实时定量PCR | 第52-54页 |
2.2.6 激光共聚焦显微镜观察目的蛋白的亚细胞定位 | 第54页 |
2.2.7 原核蛋白表达与纯化 | 第54-56页 |
2.2.8 体外微丝结合分析 | 第56-58页 |
2.2.9 体外微丝荧光观察实验 | 第58页 |
2.2.10 保卫细胞内微丝稳定性分析及密度粗细相关参数的测定 | 第58-59页 |
2.2.11 微丝动态观察及相关参数的计算 | 第59-60页 |
2.2.12 原核蛋白共沉淀实验 | 第60页 |
2.2.13 萤火虫荧光素酶互补实验 | 第60-61页 |
2.2.14 磷酸化实验 | 第61-62页 |
2.2.15 农杆菌介导的拟南芥转化及阳性转基因苗的筛选 | 第62-63页 |
2.2.16 双向电泳实验 | 第63-65页 |
2.2.17 抗体制备 | 第65-66页 |
2.2.18 体内微丝染色实验 | 第66-67页 |
2.2.19 GUS染色 | 第67-68页 |
2.2.20 蛋白浓度的测定(BCA法) | 第68页 |
2.2.21 western鉴定转基因幼苗中目的蛋白的表达水平 | 第68-70页 |
二、实验结果与分析 | 第70-109页 |
1 scrp1突变体的获得及表型分析 | 第70-79页 |
1.1 突变体表型的筛选 | 第70页 |
1.2 scrp1突变体失水快 | 第70-71页 |
1.3 ABA处理条件下scrp1突变体气孔关闭迟缓 | 第71-72页 |
1.4 scrp1突变体叶温低 | 第72-73页 |
1.5 scrp1突变体鉴定 | 第73-75页 |
1.6 scrp1突变体的表型回补 | 第75-77页 |
1.7 SCRP1的表达受ABA的诱导 | 第77-79页 |
2 SCRP1的组织分布及亚细胞定位 | 第79-81页 |
2.1 SCRP1在植物组织中广泛分布 | 第79-80页 |
2.2 SCRP1在细胞内呈丝状分布 | 第80-81页 |
3 SCRP1与微丝骨架相关 | 第81-86页 |
3.1 SCRP1对微丝药剂LatA敏感 | 第81-82页 |
3.2 SCPR1在细胞内与微丝共定位 | 第82-84页 |
3.3 SCRP1蛋白体外与微丝蛋白不直接结合 | 第84-85页 |
3.4 SCRP1蛋白体外不影响微丝聚合 | 第85-86页 |
4 SCRP1在保卫细胞内对微丝的作用 | 第86-90页 |
4.1 scrp1突变体保卫细胞内微丝不稳定 | 第86-88页 |
4.2 scrp1突变体ABA处理后保卫细胞内微丝重排发生改变 | 第88-89页 |
4.3 scrp1突变体保卫细胞内微丝动态变化发生改变 | 第89-90页 |
5 SCRP1与微丝解聚因子ADF4的关系 | 第90-104页 |
5.1 SCRP1与微丝解聚因子ADF4互作 | 第90-93页 |
5.2 SCRP1磷酸化解聚因子ADF4 | 第93-96页 |
5.3 磷酸化位点检测 | 第96-97页 |
5.4 SCRP1的磷酸化抑制ADF对微丝的解聚活性 | 第97-104页 |
6 SCRP1在遗传水平上与ADF4互作 | 第104-109页 |
6.1 scrp1adf4双突变体表型分析 | 第104-107页 |
6.2 ADF4过表达转基因植株的表型分析 | 第107-109页 |
三、讨论 | 第109-115页 |
参考文献 | 第115-124页 |
博士期间整理发表的论文 | 第124-125页 |
致谢 | 第125页 |