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拟南芥微丝相关蛋白SCRP1调节气孔运动的功能研究

中文摘要第7-9页
Abstract第9-10页
英文缩略词表第11-14页
第一部分 文献综述第14-37页
    1 微丝骨架第14-15页
    2 微丝骨架动态变化调节气孔运动第15-17页
    3 参与调节微丝骨架动态变化的相关蛋白及信号分子第17-27页
        3.1 微丝结合蛋白第17-26页
        3.2 相关离子第26-27页
        3.3 肌醇磷脂类第27页
    4 磷酸化与微丝骨架动态变化第27-28页
    5 酪蛋白激酶 Ⅰ的功能研究进展第28-30页
        5.1 酪蛋白激酶Ⅰ的结构第28-29页
        5.2 酪蛋白激酶Ⅰ磷酸化底物及生理功能第29-30页
        5.3 酪蛋白激酶Ⅰ的表达调控第30页
    6 微丝骨架动态变化的研究技术第30-35页
        6.1 常用的活细胞微丝标记及显微技术第30-32页
        6.2 微丝骨架动态分类第32-34页
            6.2.1 微丝形成第32页
            6.2.2 微丝随机动态第32-33页
            6.2.3 微丝重组第33-34页
        6.3 微丝性状及动态变化相关参数第34-35页
    7 研究目的第35-36页
    8 研究意义第36-37页
第二部分 实验论文第37-115页
    一、实验材料和方法第37-70页
        1 实验材料第37-49页
            1.1 植物材料第37页
            1.2 常用菌株及质粒载体第37-39页
                1.2.1 组织定位分析载体第37-38页
                1.2.2 亚细胞定位分析载体第38页
                1.2.3 免疫共沉淀分析载体第38页
                1.2.4 过表达转基因株系构建载体第38页
                1.2.5 SCRP1全长互补载体构建第38-39页
                1.2.6 双分子荧光互补实验分析载体构建第39页
                1.2.7 原核蛋白表达载体构建第39页
            1.3 酶及试剂第39-40页
            1.4 实验仪器设备第40-42页
            1.5 引物序列第42-43页
            1.6 常用培养基第43页
            1.7 常用试剂的配制第43-48页
            1.8 常用分析软件第48-49页
        2 实验方法第49-70页
            2.1 植物材料的培养第49页
            2.2 基本分子生物学实验技术第49-70页
                2.2.1 T-DNA插入突变体基因型鉴定第49-50页
                2.2.2 离体叶片失水实验及ABA介导的气孔关闭检测第50-51页
                2.2.3 叶温检测第51页
                2.2.4 拟南芥总RNA小量提取及RT-PCR第51-52页
                2.2.5 荧光实时定量PCR第52-54页
                2.2.6 激光共聚焦显微镜观察目的蛋白的亚细胞定位第54页
                2.2.7 原核蛋白表达与纯化第54-56页
                2.2.8 体外微丝结合分析第56-58页
                2.2.9 体外微丝荧光观察实验第58页
                2.2.10 保卫细胞内微丝稳定性分析及密度粗细相关参数的测定第58-59页
                2.2.11 微丝动态观察及相关参数的计算第59-60页
                2.2.12 原核蛋白共沉淀实验第60页
                2.2.13 萤火虫荧光素酶互补实验第60-61页
                2.2.14 磷酸化实验第61-62页
                2.2.15 农杆菌介导的拟南芥转化及阳性转基因苗的筛选第62-63页
                2.2.16 双向电泳实验第63-65页
                2.2.17 抗体制备第65-66页
                2.2.18 体内微丝染色实验第66-67页
                2.2.19 GUS染色第67-68页
                2.2.20 蛋白浓度的测定(BCA法)第68页
                2.2.21 western鉴定转基因幼苗中目的蛋白的表达水平第68-70页
    二、实验结果与分析第70-109页
        1 scrp1突变体的获得及表型分析第70-79页
            1.1 突变体表型的筛选第70页
            1.2 scrp1突变体失水快第70-71页
            1.3 ABA处理条件下scrp1突变体气孔关闭迟缓第71-72页
            1.4 scrp1突变体叶温低第72-73页
            1.5 scrp1突变体鉴定第73-75页
            1.6 scrp1突变体的表型回补第75-77页
            1.7 SCRP1的表达受ABA的诱导第77-79页
        2 SCRP1的组织分布及亚细胞定位第79-81页
            2.1 SCRP1在植物组织中广泛分布第79-80页
            2.2 SCRP1在细胞内呈丝状分布第80-81页
        3 SCRP1与微丝骨架相关第81-86页
            3.1 SCRP1对微丝药剂LatA敏感第81-82页
            3.2 SCPR1在细胞内与微丝共定位第82-84页
            3.3 SCRP1蛋白体外与微丝蛋白不直接结合第84-85页
            3.4 SCRP1蛋白体外不影响微丝聚合第85-86页
        4 SCRP1在保卫细胞内对微丝的作用第86-90页
            4.1 scrp1突变体保卫细胞内微丝不稳定第86-88页
            4.2 scrp1突变体ABA处理后保卫细胞内微丝重排发生改变第88-89页
            4.3 scrp1突变体保卫细胞内微丝动态变化发生改变第89-90页
        5 SCRP1与微丝解聚因子ADF4的关系第90-104页
            5.1 SCRP1与微丝解聚因子ADF4互作第90-93页
            5.2 SCRP1磷酸化解聚因子ADF4第93-96页
            5.3 磷酸化位点检测第96-97页
            5.4 SCRP1的磷酸化抑制ADF对微丝的解聚活性第97-104页
        6 SCRP1在遗传水平上与ADF4互作第104-109页
            6.1 scrp1adf4双突变体表型分析第104-107页
            6.2 ADF4过表达转基因植株的表型分析第107-109页
    三、讨论第109-115页
参考文献第115-124页
博士期间整理发表的论文第124-125页
致谢第125页

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