| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-49页 |
| 1.1 基因治疗 | 第22-23页 |
| 1.2 基因输送技术 | 第23-27页 |
| 1.2.1 物理转染技术 | 第23页 |
| 1.2.2 病毒载药系统 | 第23-24页 |
| 1.2.3 非病毒载药系统 | 第24-27页 |
| 1.2.3.1 阳离子脂质体 | 第24-25页 |
| 1.2.3.2 阳离子聚合物 | 第25-27页 |
| 1.3 基因输送的屏障 | 第27-33页 |
| 1.3.1 体内输送的稳定性 | 第27-28页 |
| 1.3.2 EPR效应 | 第28页 |
| 1.3.3 细胞摄取 | 第28-30页 |
| 1.3.4 溶酶体逃逸 | 第30-32页 |
| 1.3.5 细胞核摄取 | 第32-33页 |
| 1.4 刺激响应性纳米载药系统 | 第33-43页 |
| 1.4.1 pH响应的纳米载药体系 | 第34-37页 |
| 1.4.2 还原响应的纳米载药体系 | 第37-39页 |
| 1.4.3 氧化响应的纳米载药体系 | 第39-40页 |
| 1.4.4 酶响应的纳米载药体系 | 第40-41页 |
| 1.4.5 光响应的纳米载药体系 | 第41-43页 |
| 1.4.6 温度响应的纳米载药体系 | 第43页 |
| 1.5 含苯硼酸/酯聚合物的氧化响应及其应用 | 第43-45页 |
| 1.6 课题的提出 | 第45-49页 |
| 第二章 氧化响应的电荷反转型阳离子聚合物B-PDEAEA的合成表征及应用 | 第49-88页 |
| 2.1 引言 | 第49-50页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第50-54页 |
| 2.2.1 实验药品及试剂 | 第50-52页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第52-53页 |
| 2.2.3 细胞系及实验动物 | 第53页 |
| 2.2.4 工作溶液 | 第53-54页 |
| 2.3 实验方法 | 第54-64页 |
| 2.3.1 质粒的扩增与提取 | 第54页 |
| 2.3.1.1 大肠杆菌DH5a的培养 | 第54页 |
| 2.3.1.2 质粒的提取 | 第54页 |
| 2.3.2 B-PDEAEA的合成 | 第54-55页 |
| 2.3.3 荧光标记的B-PDEAEA(F-B-PDEAEA)的合成 | 第55-57页 |
| 2.3.3.1 N-Boc-氨乙基丙烯酰胺的合成 | 第55页 |
| 2.3.3.2 含有N-Boc-氨乙基丙烯酰胺和DEAEA的共聚物(PDEAEA-NHBoc)的合成 | 第55-56页 |
| 2.3.3.3 含有一级胺的PDEAEA(PDEAEA-NH_2)的合成 | 第56页 |
| 2.3.3.4 荧光标记的B-PDEAEA(F-B-PDEAEA)的合成 | 第56-57页 |
| 2.3.4 B-PDEAEA的氧化响应 | 第57-58页 |
| 2.3.5 B-PDEAEA在氧化条件下发生的电荷反转 | 第58页 |
| 2.3.6 B-PDEAEA/DNA纳米复合物的制备 | 第58页 |
| 2.3.7 纳米复合物的粒径分布和Zeta电位测定 | 第58-59页 |
| 2.3.8 透射电镜观察纳米复合物的形态 | 第59页 |
| 2.3.9 纳米复合物的凝胶阻滞电泳实验 | 第59页 |
| 2.3.10 纳米复合物氧化条件下的凝胶阻滞电泳实验 | 第59页 |
| 2.3.11 细胞毒性实验 | 第59-60页 |
| 2.3.12 纳米复合物的体外细胞转染 | 第60-61页 |
| 2.3.13 纳米复合物在活性氧自由基抑制剂(DPI)作用下的细胞转染 | 第61页 |
| 2.3.14 激光共聚焦显微镜观察纳米复合物的亚细胞分布 | 第61-62页 |
| 2.3.15 细胞内吞抑制剂对纳米复合物细胞摄取和转染的影响 | 第62-63页 |
| 2.3.16 B-PDEAEA的溶血能力检测 | 第63页 |
| 2.3.17 纳米复合物的细胞外排实验 | 第63-64页 |
| 2.3.18 纳米复合物的瘤内注射体内转染实验 | 第64页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第64-87页 |
| 2.4.1 B-PDEAEA的化学表征 | 第64-67页 |
| 2.4.1.1 PDEAEA的核磁表征 | 第64-65页 |
| 2.4.1.2 PDEAEA的GPC表征 | 第65-66页 |
| 2.4.1.3 B-PDEAEA的核磁表征 | 第66-67页 |
| 2.4.2 F-B-PDEAEA的化学表征 | 第67-69页 |
| 2.4.2.1 N-Boc-氨乙基丙烯酰胺的核磁表征 | 第67页 |
| 2.4.2.2 PDEAEA-NHBoc的核磁表征 | 第67-68页 |
| 2.4.2.3 PDEAEA-NH_2的核磁表征 | 第68-69页 |
| 2.4.3 B-PDEAEA的氧化条件下释放的HMP的表征 | 第69页 |
| 2.4.4 B-PDEAEA氧化和自催化水解过程的核磁表征 | 第69-71页 |
| 2.4.5 B-PDEAEA在氧化条件下发生的电荷反转 | 第71页 |
| 2.4.6 纳米复合物的粒径分布和Zeta电位 | 第71-72页 |
| 2.4.7 透射电镜(TEM)观察纳米复合物的形态 | 第72-73页 |
| 2.4.8 纳米复合物的凝胶阻滞电泳实验 | 第73页 |
| 2.4.9 纳米复合物氧化条件下的凝胶阻滞电泳实验 | 第73-74页 |
| 2.4.10 细胞毒性实验 | 第74-76页 |
| 2.4.11 纳米复合物的体外细胞转染 | 第76-79页 |
| 2.4.12 活性氧自由基抑制剂(DPI)对纳米复合物细胞转染的影响 | 第79-80页 |
| 2.4.13 纳米复合物的亚细胞分布 | 第80-84页 |
| 2.4.14 细胞内吞抑制剂对纳米复合物细胞摄取和转染的影响 | 第84页 |
| 2.4.15 B-PDEAEA的溶血能力检测 | 第84-85页 |
| 2.4.16 纳米复合物的细胞外排实验 | 第85-86页 |
| 2.4.17 纳米复合物的瘤内注射体内转染实验 | 第86-87页 |
| 2.5 本章小结 | 第87-88页 |
| 第三章 膜融合型基因输送体系的研究 | 第88-125页 |
| 3.1 引言 | 第88-89页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第89-93页 |
| 3.2.1 实验药品及试剂 | 第89-91页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第91-92页 |
| 3.2.3 细胞系及实验动物 | 第92页 |
| 3.2.4 工作溶液 | 第92-93页 |
| 3.3 实验方法 | 第93-100页 |
| 3.3.1 PEG-DA的合成 | 第93页 |
| 3.3.2 HA-DA的合成 | 第93-94页 |
| 3.3.3 PEG-DA/B-PDEAEA/DNA纳米复合物的制备 | 第94页 |
| 3.3.4 HA-DA/B-PDEAEA/DNA纳米复合物的制备 | 第94页 |
| 3.3.5 PolyE-mRGD/B-PDEAEA/DNA纳米复合物的制备 | 第94页 |
| 3.3.6 FLPP的制备 | 第94-95页 |
| 3.3.7 FLPP的粒径分布和Zeta电位测定 | 第95页 |
| 3.3.8 透射电镜观察纳米复合物的形态 | 第95页 |
| 3.3.9 FLPP的体外细胞转染 | 第95-96页 |
| 3.3.10 激光共聚焦显微镜观察FLPP的亚细胞分布 | 第96页 |
| 3.3.11 细胞内吞抑制剂对FLPP细胞摄取和转染的影响 | 第96-97页 |
| 3.3.12 观察FLPP与细胞膜的膜融合 | 第97-98页 |
| 3.3.13 FLPP的血浆清除和血液稳定性 | 第98页 |
| 3.3.14 制备带靶向基团CRGDK修饰的FLPP | 第98页 |
| 3.3.15 FLPP的体内转染实验 | 第98-99页 |
| 3.3.16 观察RGDK-FLPP在肿瘤组织中的渗透 | 第99页 |
| 3.3.17 体内抑瘤实验 | 第99页 |
| 3.3.18 蛋白质免疫印迹(Western blot)实验 | 第99-100页 |
| 3.3.19 肿瘤和心脏组织病理切片 | 第100页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第100-124页 |
| 3.4.1 PEG-DA的核磁表征 | 第100-101页 |
| 3.4.2 HA-DA的核磁表征 | 第101-102页 |
| 3.4.3 PEG-DA/B-PDEAEA/DNA纳米复合物的粒径分布和Zeta电位 | 第102页 |
| 3.4.4 HA-DA/B-PDEAEA/DNA纳米复合物的粒径分布和Zeta电位 | 第102-103页 |
| 3.4.5 PolyE-mRGD/B-PDEAEA/DNA纳米复合物的粒径分布和Zeta电位 | 第103-104页 |
| 3.4.6 遮蔽层对纳米复合物的体外细胞转染的影响 | 第104-105页 |
| 3.4.7 包覆遮蔽层的纳米复合物的体内转染 | 第105页 |
| 3.4.8 FLPP的粒径分布和Zeta电位测定 | 第105-107页 |
| 3.4.9 透射电镜观察FLPP的形态 | 第107页 |
| 3.4.10 FLPP的体外细胞转染 | 第107-109页 |
| 3.4.11 FLPP的亚细胞分布 | 第109-112页 |
| 3.4.12 FLPP入胞途径的研究 | 第112-117页 |
| 3.4.13 FRET法研究FLPP与细胞膜的膜融合 | 第117-118页 |
| 3.4.14 FLPP的血浆清除和血液稳定性 | 第118-119页 |
| 3.4.15 DSPE-PEG-RGDK的MALDI-TOF MS表征 | 第119页 |
| 3.4.16 FLPP的体内转染实验 | 第119-120页 |
| 3.4.17 RGDK-FLPP在肿瘤组织中的渗透 | 第120-121页 |
| 3.4.18 体内抑瘤实验 | 第121-122页 |
| 3.4.19 蛋白质免疫印迹(Western blot)实验 | 第122-123页 |
| 3.4.20 肿瘤和心脏组织病理切片 | 第123-124页 |
| 3.5 本章小结 | 第124-125页 |
| 第四章 抗血清型基因输送体系的研究 | 第125-159页 |
| 4.1 引言 | 第125页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第125-128页 |
| 4.2.1 实验药品及试剂 | 第125-127页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第127页 |
| 4.2.3 细胞系及实验动物 | 第127-128页 |
| 4.2.4 工作溶液 | 第128页 |
| 4.3 实验方法 | 第128-134页 |
| 4.3.1 阳离子脂质体的制备 | 第128-129页 |
| 4.3.2 DOTAP/Chol与DC-Chol/DOPE脂质体纳米复合物的制备 | 第129页 |
| 4.3.3 DOTAP/Chol与DC-Chol/DOPE脂质体纳米复合物的粒径分布和Zeta电位测定 | 第129页 |
| 4.3.4 透射电镜观察DOTAP/Chol与DC-Chol/DOPE脂质体纳米复合物的形态 | 第129页 |
| 4.3.5 细胞毒性实验 | 第129-130页 |
| 4.3.6 体外细胞转染 | 第130-131页 |
| 4.3.7 激光共聚焦显微镜观察DOTAP/Chol与DC-Chol/DOPE脂质体纳米复合物的亚细胞分布 | 第131页 |
| 4.3.8 细胞内吞抑制剂对DOTAP/Chol与DC-Chol/DOPE脂质体纳米复合物细胞摄取和转染的影响 | 第131-132页 |
| 4.3.9 腹腔移植瘤体内转染实验 | 第132-133页 |
| 4.3.10 腹腔移植瘤体内抑瘤实验 | 第133页 |
| 4.3.11 蛋白质免疫印迹(Western blot)实验 | 第133页 |
| 4.3.12 肿瘤组织病理切片 | 第133-134页 |
| 4.3.13 抑制转移瘤实验 | 第134页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第134-158页 |
| 4.4.1 DOTAP/Chol与DC-Chol/DOPE脂质体纳米复合物的粒径分布和Zeta电位测定 | 第134-135页 |
| 4.4.2 透射电镜观察DOTAP/Chol与DC-Chol/DOPE脂质体纳米复合物的形态 | 第135-136页 |
| 4.4.3 细胞毒性实验 | 第136-137页 |
| 4.4.4 体外细胞转染 | 第137-142页 |
| 4.4.5 DOTAP/Chol与DC-Chol/DOPE脂质体纳米复合物的亚细胞分布 | 第142-146页 |
| 4.4.6 细胞内吞抑制剂对DOTAP/Chol与DC-Chol/DOPE脂质体纳米复合物细胞摄取和转染的影响 | 第146-148页 |
| 4.4.7 腹腔移植瘤的体内转染实验 | 第148-149页 |
| 4.4.8 腹腔移植瘤体内抑瘤实验 | 第149-153页 |
| 4.4.9 蛋白质免疫印迹(Western blot)实验 | 第153-154页 |
| 4.4.10 肿瘤组织病理切片 | 第154页 |
| 4.4.11 抑制转移瘤实验 | 第154-157页 |
| 4.4.12 肺组织病理切片 | 第157-158页 |
| 4.5 本章小结 | 第158-159页 |
| 第五章 其他氧化响应的电荷反转型阳离子聚合物的合成表征及应用 | 第159-188页 |
| 5.1 引言 | 第159页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第159-162页 |
| 5.2.1 实验药品及试剂 | 第159-161页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第161-162页 |
| 5.2.3 细胞系及实验动物 | 第162页 |
| 5.2.4 工作溶液 | 第162页 |
| 5.3 实验方法 | 第162-170页 |
| 5.3.1 B-PDEAEMA的合成 | 第162-163页 |
| 5.3.2 溴代(2-丙烯酰氧)乙基(p-硼酸苄基)二乙铵(B-DEAEA)的合成 | 第163-164页 |
| 5.3.3 B-PEI_(10K)的合成 | 第164页 |
| 5.3.4 B-PAMAM的合成 | 第164-165页 |
| 5.3.5 B-PDEAEMA的氧化响应 | 第165-166页 |
| 5.3.6 B-PDEAEMA/DNA,B-PEI_(10K)/DNA,B-PAMAM/DNA纳米复合物的制备 | 第166页 |
| 5.3.7 纳米复合物的粒径分布和Zeta电位测定 | 第166页 |
| 5.3.8 纳米复合物的凝胶阻滞电泳实验 | 第166页 |
| 5.3.9 细胞毒性实验 | 第166-167页 |
| 5.3.10 纳米复合物的体外细胞转染 | 第167页 |
| 5.3.11 B-PDEAEMA的溶血能力检测 | 第167-168页 |
| 5.3.12 RGDK-FLPP_M的制备 | 第168页 |
| 5.3.13 RGDK-FLPP_M的体内转染实验 | 第168页 |
| 5.3.14 体内抑瘤实验 | 第168-169页 |
| 5.3.15 蛋白质免疫印迹(Western blot)实验 | 第169页 |
| 5.3.16 肿瘤组织病理切片 | 第169-170页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第170-187页 |
| 5.4.1 B-PDEAEMA的化学表征 | 第170-172页 |
| 5.4.1.1 PDEAEMA的核磁表征 | 第170页 |
| 5.4.1.2 PDEAEMA的GPC表征 | 第170-171页 |
| 5.4.1.3 B-PDEAEMA的核磁表征 | 第171-172页 |
| 5.4.2 B-DEAEA的核磁表征 | 第172页 |
| 5.4.3 B-PEI_(10K)的核磁表征 | 第172-173页 |
| 5.4.4 B-PAMAM的核磁表征 | 第173-175页 |
| 5.4.5 B-PDEAEMA的氧化条件下释放的HMP的表征 | 第175-176页 |
| 5.4.6 纳米复合物的粒径分布和Zeta电位 | 第176-177页 |
| 5.4.7 纳米复合物的凝胶阻滞电泳实验 | 第177-178页 |
| 5.4.8 B-PDEAEMA细胞毒性实验 | 第178-179页 |
| 5.4.9 纳米复合物的体外细胞转染 | 第179-183页 |
| 5.4.10 B-PDEAEMA的溶血能力检测 | 第183-184页 |
| 5.4.11 RGDK-FLPPM的体内转染实验 | 第184页 |
| 5.4.12 RGDK-FLPPM体内抑瘤实验 | 第184-185页 |
| 5.4.13 蛋白质免疫印迹(Western blot)实验 | 第185-186页 |
| 5.4.14 肿瘤组织病理切片 | 第186-187页 |
| 5.5 本章小结 | 第187-188页 |
| 第六章 结论与展望 | 第188-190页 |
| 参考文献 | 第190-199页 |
| 作者简历及在校期间所取得的科研成果 | 第199页 |
