| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 中英文缩略词 | 第8-13页 |
| 1 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 药用植物银杏研究概况 | 第14-15页 |
| 1.1.1 药用植物银杏概况 | 第14页 |
| 1.1.2 药用植物银杏生药学评价 | 第14页 |
| 1.1.3 药用植物银杏药理作用 | 第14-15页 |
| 1.1.4 药用植物银杏有效成分 | 第15页 |
| 1.2 有效成分银杏内酯B概述 | 第15-18页 |
| 1.2.1 研究概况 | 第15-16页 |
| 1.2.2 化学结构及理化性质 | 第16页 |
| 1.2.3 药理作用 | 第16页 |
| 1.2.4 药源途径 | 第16-18页 |
| 1.3 PCR技术概述 | 第18-20页 |
| 1.3.1 原理 | 第18页 |
| 1.3.2 特点 | 第18-19页 |
| 1.3.3 应用 | 第19-20页 |
| 1.4 低能离子注入技术概况 | 第20-22页 |
| 1.4.1 原理 | 第20页 |
| 1.4.2 特点 | 第20-21页 |
| 1.4.3 生物育种领域的应用 | 第21-22页 |
| 1.5 H.polymorpha的研究 | 第22-23页 |
| 1.5.1 H.polymorpha生物学特性 | 第22-23页 |
| 1.5.2 H.polymorpha应用 | 第23页 |
| 1.6 本研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 1.6.1 目的 | 第23页 |
| 1.6.2 意义 | 第23-24页 |
| 1.7 研究基础 | 第24页 |
| 1.8 研究内容 | 第24页 |
| 1.9 原理及技术路线 | 第24-27页 |
| 1.9.1 原理 | 第24页 |
| 1.9.2 技术路线 | 第24-26页 |
| 1.9.3 难点及应对方法 | 第26-27页 |
| 2 银杏基因组DNA提取方法的研究 | 第27-35页 |
| 2.1 材料及仪器 | 第27-29页 |
| 2.1.1 材料 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 | 第27-29页 |
| 2.2 方法 | 第29页 |
| 2.2.1 银杏基因组DNA提取方法 | 第29页 |
| 2.2.2 检测方法 | 第29页 |
| 2.3 研究内容 | 第29-31页 |
| 2.3.1 银杏基因组DNA提取 | 第29-30页 |
| 2.3.2 银杏基因组DNA检测 | 第30-31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-34页 |
| 2.4.1 电泳检测结果分析 | 第31页 |
| 2.4.2 DNA纯度检测 | 第31-32页 |
| 2.4.3 DNA浓度检测 | 第32-33页 |
| 2.4.4 PCR检测 | 第33-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 3 基于PCR技术对目标工程菌筛选体系的建立 | 第35-46页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第35-37页 |
| 3.1.1 材料 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 | 第35-37页 |
| 3.2 方法 | 第37页 |
| 3.2.1 酵母基因组DNA提取 | 第37页 |
| 3.2.2 银杏内酯生物合成途径及关键酶的确定 | 第37页 |
| 3.2.3 关键酶的序列比对及其简并引物的设计 | 第37页 |
| 3.2.4 PCR筛选体系的建立 | 第37页 |
| 3.3 研究内容 | 第37-41页 |
| 3.3.1 酵母基因组DNA提取 | 第37-38页 |
| 3.3.2 银杏内酯生物合成途径 | 第38-40页 |
| 3.3.3 关键酶序列比对及简并引物设计 | 第40-41页 |
| 3.3.4 PCR筛选体系的建立 | 第41页 |
| 3.4 结果与分析 | 第41-45页 |
| 3.4.1 酵母基因组DNA提取 | 第41-43页 |
| 3.4.2 GGPPS基因筛选体系建立 | 第43页 |
| 3.4.3 MECPS基因筛选体系建立 | 第43-44页 |
| 3.4.4 MECT基因筛选体系建立 | 第44-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-46页 |
| 4 低能N~+注入介导银杏基因组DNA转化H.polymorpha研究 | 第46-66页 |
| 4.1 材料及试剂设备 | 第46-48页 |
| 4.1.1 材料 | 第46页 |
| 4.1.2 试剂与设备 | 第46-48页 |
| 4.2 研究方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 银杏中有效成分的定性检测 | 第48-49页 |
| 4.2.2 银杏内酯的定性定量检测 | 第49页 |
| 4.2.3 银杏基因组DNA的提取 | 第49页 |
| 4.2.4 低能离子介导银杏基因组DNA转化酵母 | 第49页 |
| 4.2.5 目标工程菌的初步筛选 | 第49页 |
| 4.2.6 目标工程菌的再次筛选 | 第49页 |
| 4.2.7 工程菌遗传稳定性的研究 | 第49-50页 |
| 4.3 研究内容 | 第50-54页 |
| 4.3.1 银杏内酯的定性定量方法学研究 | 第50-51页 |
| 4.3.2 银杏基因组DNA提取 | 第51页 |
| 4.3.3 低能离子介导银杏基因组DNA的转化酵母 | 第51-53页 |
| 4.3.4 转化酵母基因组DNA提取 | 第53页 |
| 4.3.5 PCR法初筛 | 第53-54页 |
| 4.3.6 工酵母程菌的复筛 | 第54页 |
| 4.3.7 遗传稳定性的研究 | 第54页 |
| 4.4 结果与分析 | 第54-64页 |
| 4.4.1 颜色反应初步检测银杏中主要有效成分 | 第54-55页 |
| 4.4.2 TLC法初步检测银杏内酯 | 第55-56页 |
| 4.4.3 HPLC法检测银杏内酯的方法研究 | 第56-58页 |
| 4.4.4 汉逊酵母离子注入参数条件的考察 | 第58-59页 |
| 4.4.5 转化酵母的培养及计数 | 第59-60页 |
| 4.4.6 目标工程菌的初步筛选 | 第60-61页 |
| 4.4.7 目标工程菌的复筛 | 第61-64页 |
| 4.4.8 目标工程菌遗传稳定性研究 | 第64页 |
| 4.5 小结 | 第64-66页 |
| 5 结论与展望 | 第66-68页 |
| 5.1 结论 | 第66页 |
| 5.2 展望 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第76-77页 |