| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 工业微生物酸胁迫应激机制 | 第11-15页 |
| 1.1.1 酸胁迫 | 第11-12页 |
| 1.1.2 细胞对酸胁迫的应激反应 | 第12-14页 |
| 1.1.3 提高抗酸胁迫策略 | 第14页 |
| 1.1.4 产甘油假丝酵母酸耐受性研究 | 第14-15页 |
| 1.2 启动子研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 启动子结构及功能 | 第15-17页 |
| 1.2.2 常用酵母启动子研究 | 第17页 |
| 1.2.3 诱导启动子动态调控 | 第17-18页 |
| 1.3 发酵法生产乳酸 | 第18-20页 |
| 1.3.1 微生物发酵生产乳酸 | 第18-19页 |
| 1.3.2 基因工程法改良乳酸生产菌株 | 第19-20页 |
| 1.4 本课题研究意义及主要内容 | 第20-23页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第20页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第20-23页 |
| 第2章 产甘油假丝酵母酸调控启动子的筛选 | 第23-39页 |
| 2.1 材料与仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 产甘油假丝酵母与酿酒酵母酸耐受性测定 | 第24-25页 |
| 2.2.2 酵母总RNA的提取和反转录 | 第25-26页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第26-27页 |
| 2.2.4 目的基因的扩增 | 第27-29页 |
| 2.2.5 PCR产物的回收及连接 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-37页 |
| 2.3.1 产甘油假丝酵母与酿酒酵母酸耐受性差异分析 | 第30-32页 |
| 2.3.2 酸胁迫应答基因及其调控启动子的获得 | 第32-35页 |
| 2.3.3 酸调控启动子生物信息学分析 | 第35-37页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第37-39页 |
| 第3章 酸调控启动子性能分析 | 第39-55页 |
| 3.1 材料与实验仪器 | 第39-41页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第39-40页 |
| 3.1.2 培养基 | 第40页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第40页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 3.2 方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 酵母染色体DNA的提取 | 第41页 |
| 3.2.2 大肠杆菌感受态的制备、转化与质粒提取 | 第41-42页 |
| 3.2.3 绿色荧光蛋白检测及分析 | 第42页 |
| 3.2.4 C.glycerinogenes转化方法 | 第42-43页 |
| 3.2.5 整合表达载体pURGFP构建验证 | 第43页 |
| 3.2.6 酸诱导启动子整合表达载体构建验证 | 第43页 |
| 3.2.7 S.cerevisiae表达载体构建验证 | 第43-44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-53页 |
| 3.3.1 酸调控启动子验证载体构建 | 第44-48页 |
| 3.3.2 GFP在酸调控启动子下的诱导表达 | 第48-52页 |
| 3.3.3 酸调控启动子诱导条件分析 | 第52-53页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第53-55页 |
| 第4章 利用PCGGMT调控乳酸合成关键基因 | 第55-67页 |
| 4.1 材料与仪器设备 | 第55-56页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第55页 |
| 4.1.2 培养基 | 第55页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第55-56页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第56页 |
| 4.2 方法 | 第56-59页 |
| 4.2.1 乳酸合成关键酶基因克隆 | 第56页 |
| 4.2.2 质粒构建 | 第56-57页 |
| 4.2.3 乳酸脱氢酶比酶活测定 | 第57-58页 |
| 4.2.4 产物测定方法 | 第58-59页 |
| 4.3 结果分析 | 第59-65页 |
| 4.3.1 乳酸合成关键基因的克隆分析及质粒构建 | 第59-62页 |
| 4.3.2 利用PCgGMT调控C.glycerinogenes合成乳酸 | 第62-65页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录 | 第75-81页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
