| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第15-33页 |
| 1.1 宽体金线蛭、东亚钳蝎抗凝血研究现状 | 第15-16页 |
| 1.1.1 宽体金线蛭 | 第15-16页 |
| 1.1.2 东亚钳蝎 | 第16页 |
| 1.2 生物活性肽 | 第16-21页 |
| 1.2.1 生物活性肽的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.2 生物活性肽的制备分离及鉴定 | 第17-21页 |
| 1.2.2.1 活性肽制备方法 | 第17-19页 |
| 1.2.2.2 国内外酶法制备活性肽现状 | 第19-20页 |
| 1.2.2.3 生物活性肽的分离纯化 | 第20页 |
| 1.2.2.4 生物活性肽的鉴定研究 | 第20-21页 |
| 1.3 凝血及抗凝机制 | 第21-23页 |
| 1.4 抗凝血活性肽的研究现状 | 第23-26页 |
| 1.5 抗疲劳的研究 | 第26-30页 |
| 1.5.1 抗疲劳的研究现状 | 第26-27页 |
| 1.5.2 疲劳的产生机理 | 第27-28页 |
| 1.5.3 抗疲劳肽机理 | 第28-29页 |
| 1.5.4 活性肽体外抗氧化与体内抗疲劳之间的关联 | 第29-30页 |
| 1.6 本课题研究的立题依据和主要研究内容 | 第30-33页 |
| 1.6.1 本课题的立题依据 | 第30-31页 |
| 1.6.2 主要研究内容 | 第31-33页 |
| 第二章 宽体金线蛭、东亚钳蝎分离蛋白的提取及理化性质 | 第33-43页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第33-34页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 2.3.1 基本成分的测定 | 第34-35页 |
| 2.3.2 宽体金线蛭分离蛋白(WPI)和东亚钳蝎分离蛋白(HPI)的制备 | 第35页 |
| 2.3.3 碱溶酸沉pH值确定 | 第35页 |
| 2.3.4 分离蛋白提取率的计算 | 第35页 |
| 2.3.5 分离蛋白的相对分子量分布 | 第35-36页 |
| 2.3.6 分离蛋白的氨基酸组成分析 | 第36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-42页 |
| 2.4.1 两种原料的主要成分 | 第36-37页 |
| 2.4.2 碱溶酸沉过程中pH值的确定 | 第37-39页 |
| 2.4.3 两种分离蛋白的相对分子量分布 | 第39页 |
| 2.4.4 两种分离蛋白的氨基酸组成分析 | 第39-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 宽体金线蛭、东亚钳蝎分离蛋白的酶解工艺研究 | 第43-58页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第44页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第44页 |
| 3.2.2 主要仪器设备 | 第44页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.3.1 酶解工艺过程 | 第44-45页 |
| 3.3.2 Alcalase催化分离蛋白水解工艺优化 | 第45页 |
| 3.3.3 不同酶催化下分离蛋白转化为可溶性肽得率 | 第45-46页 |
| 3.3.3.1 标准曲线绘制 | 第45-46页 |
| 3.3.3.2 可溶性肽含量测定 | 第46页 |
| 3.3.4 酶解分离蛋白产物的相对分子量测定 | 第46页 |
| 3.3.5 氨基酸组成测定 | 第46页 |
| 3.3.6 酶标仪测定抗凝血活性 | 第46-47页 |
| 3.3.6.1 试剂配制 | 第46-47页 |
| 3.3.6.2 抗凝血活性的测定 | 第47页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第47-51页 |
| 3.4.1 蛋白酶种类对两种分离蛋白WPI和HPI水解反应的影响 | 第47-51页 |
| 3.4.1.1 加酶量对两种分离蛋白水解反应的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.1.2 底物浓度对两种分离蛋白水解反应的影响 | 第50页 |
| 3.4.1.3 水解时间对两种分离蛋白水解反应的影响 | 第50-51页 |
| 3.5 六种酶水解底物蛋白转化为可溶性肽的得率 | 第51-52页 |
| 3.6 酶解产物WA和HA的相对分子量分布 | 第52-55页 |
| 3.7 酶解产物的氨基酸组成 | 第55-57页 |
| 3.8 本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 两种产物多肽的体内抗血栓活性评价 | 第58-65页 |
| 4.1 引言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第58-59页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第58页 |
| 4.2.2 主要仪器设备 | 第58-59页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-60页 |
| 4.3.1 小鼠分组饲养 | 第59页 |
| 4.3.2 小鼠造模 | 第59-60页 |
| 4.3.3 抗凝血四项基本指标 (APTT, PT, TT, FIB) | 第60页 |
| 4.3.3.1 APTT测定 | 第60页 |
| 4.3.3.2 TT测定 | 第60页 |
| 4.3.3.3 PT测定 | 第60页 |
| 4.3.3.4 FIB测定 | 第60页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第60-64页 |
| 4.4.1 各组小鼠的黑尾出现率 | 第60-61页 |
| 4.4.2 各组小鼠的黑尾比 | 第61-63页 |
| 4.4.3 各剂量多肽对小鼠凝血功能的影响 | 第63-64页 |
| 4.5 本章小结 | 第64-65页 |
| 第五章 两种产物多肽的抗氧化及抗疲劳活性评价 | 第65-82页 |
| 5.1 引言 | 第65页 |
| 5.2 实验材料与设备 | 第65-66页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第65页 |
| 5.2.2 主要仪器设备 | 第65-66页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第66页 |
| 5.3 实验方法 | 第66-69页 |
| 5.3.1 产物多肽的抗氧化活性测定 | 第66-68页 |
| 5.3.1.1 清除二苯代苦味酰基(DPPH·)能力的测定 | 第66-67页 |
| 5.3.1.2 清除羟基自由基(·OH)能力的测定 | 第67页 |
| 5.3.1.3 还原能力的测定 | 第67-68页 |
| 5.3.1.4 对AAPH诱导红细胞氧化性溶血的抑制率测定 | 第68页 |
| 5.3.2 小鼠体内抗疲劳实验 | 第68-69页 |
| 5.3.2.1 小鼠分组饲养 | 第68页 |
| 5.3.2.2 小鼠游泳训练 | 第68-69页 |
| 5.3.2.3 小鼠力竭游泳实验 | 第69页 |
| 5.3.2.4 小鼠体内各生化指标的测定 | 第69页 |
| 5.3.2.5 数据的统计学处理 | 第69页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第69-80页 |
| 5.4.1 活性肽体外抗氧化指标评价 | 第69-74页 |
| 5.4.1.1 两种酶解产物抑制自由基DPPH·的能力 | 第69-70页 |
| 5.4.1.2 两种酶解产物抑制自由基·OH的能力 | 第70-72页 |
| 5.4.1.3 两种酶解产物的还原能力 | 第72-73页 |
| 5.4.1.4 两种酶解产物抑制AAPH诱导红细胞氧化性溶血的能力 | 第73-74页 |
| 5.4.2 动物体内抗疲劳实验 | 第74-80页 |
| 5.4.2.1 小鼠的体重变化 | 第74页 |
| 5.4.2.2 灌胃物对小鼠力竭游泳时间的影响 | 第74-75页 |
| 5.4.2.3 灌胃物对小鼠肝、肌糖原的影响 | 第75-77页 |
| 5.4.2.4 灌胃物对小鼠体内血清乳酸(LD)形成的影响 | 第77页 |
| 5.4.2.5 灌胃物对小鼠体内血清尿素氮(BUN)的影响 | 第77-78页 |
| 5.4.2.6 灌胃物对小鼠体内血清肌酸激酶(CK)含量的影响 | 第78-79页 |
| 5.4.2.7 灌胃物对小鼠体内超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响 | 第79-80页 |
| 5.5 本章小结 | 第80-82页 |
| 第六章 抗凝血多肽的分离纯化及结构鉴定 | 第82-103页 |
| 6.1 引言 | 第82-83页 |
| 6.2 实验材料与设备 | 第83-84页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第83页 |
| 6.2.2 主要仪器设备 | 第83页 |
| 6.2.3 主要试剂 | 第83-84页 |
| 6.3 实验方法 | 第84-88页 |
| 6.3.1 DEAE sepharose FF阴离子交换柱的分离纯化 | 第84页 |
| 6.3.2 水解物的疏水值计算 | 第84页 |
| 6.3.3 凝胶Sephadex G-15 层析分离 | 第84-85页 |
| 6.3.4 制备型RP-HPLC柱分离活性肽 | 第85页 |
| 6.3.5 溶血栓活性实验 | 第85-86页 |
| 6.3.6 分离纯化肽的氨基酸组成及疏水值测定 | 第86页 |
| 6.3.7 多肽的MALDI-TOF-TOF MS序列测定 | 第86页 |
| 6.3.8 模拟胃肠道消化实验 | 第86-88页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第88-101页 |
| 6.4.1 酶解产物HA的分离纯化 | 第88-91页 |
| 6.4.2 酶解产物WA的分离纯化 | 第91-93页 |
| 6.4.3 组分WA_(3-1)的体外溶栓活性 | 第93-94页 |
| 6.4.4 分离过程中各产物的氨基酸组成比较 | 第94页 |
| 6.4.5 分离纯化多肽组分WA_(3-1)和HA_(183B-8)的结构鉴定 | 第94-100页 |
| 6.4.6 模拟胃肠道消化对WA_(3-1), HA_(183B-8)的生物活性的影响 | 第100-101页 |
| 6.5 本章小结 | 第101-103页 |
| 第七章 合成活性肽的体外模拟小肠吸收研究 | 第103-112页 |
| 7.1 引言 | 第103页 |
| 7.2 实验材料与设备 | 第103-105页 |
| 7.2.1 实验材料 | 第103-104页 |
| 7.2.2 主要仪器设备 | 第104页 |
| 7.2.3 主要试剂 | 第104-105页 |
| 7.3 实验方法 | 第105-106页 |
| 7.3.1 合成肽的纯化及鉴定 | 第105页 |
| 7.3.2 Caco-2 细胞模型的建立 | 第105页 |
| 7.3.3 合成肽在Caco-2 细胞模型中的吸收实验 | 第105-106页 |
| 7.4 结果与讨论 | 第106-111页 |
| 7.4.1 两种合成肽的纯化及鉴定 | 第106页 |
| 7.4.2 合成肽在Caco-2 细胞模型中的转运 | 第106-111页 |
| 7.5 本章小结 | 第111-112页 |
| 结论与展望 | 第112-115页 |
| 一 结论 | 第112-114页 |
| 二 主要创新点 | 第114页 |
| 三 展望 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-127页 |
| 附录 | 第127-128页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第128-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 附件 | 第131页 |
