| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 手性药物 | 第11-12页 |
| 1.2 手性药物的合成方法 | 第12-17页 |
| 1.2.1 手性源法 | 第12-13页 |
| 1.2.2 外消旋体拆分法 | 第13-15页 |
| 1.2.2.1 物理拆分法 | 第13页 |
| 1.2.2.2 化学拆分法 | 第13-14页 |
| 1.2.2.3 生物拆分法 | 第14-15页 |
| 1.2.3 不对称合成法 | 第15-17页 |
| 1.2.3.1 化学法羰基不对称还原 | 第16页 |
| 1.2.3.2 生物法羰基不对称还原 | 第16-17页 |
| 1.3 手性药物中间体——(R)-(-)-1,3-丁二醇 | 第17-20页 |
| 1.3.1 (R)-1,3-丁二醇的合成方法 | 第18-20页 |
| 1.3.1.1 化学合成法 | 第18-19页 |
| 1.3.1.2 生物催化法 | 第19-20页 |
| 1.4 本论文的研究内容 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-23页 |
| 第二章 羰基还原酶产生菌的筛选与鉴定 | 第23-36页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 菌种筛选 | 第23-28页 |
| 2.2.1 土样 | 第23页 |
| 2.2.2 化学试剂与主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.3 培养基 | 第24-25页 |
| 2.2.3.1 富集培养基 | 第24页 |
| 2.2.3.2 斜面培养基 | 第24页 |
| 2.2.3.3 种子培养基 | 第24-25页 |
| 2.2.3.4 发酵培养基 | 第25页 |
| 2.2.4 菌种筛选过程 | 第25-26页 |
| 2.2.4.1 菌体的培养 | 第25页 |
| 2.2.4.2 菌体的转化 | 第25页 |
| 2.2.4.3 反应产物光学纯度及产率的测定 | 第25-26页 |
| 2.2.5 菌种鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.5.1 菌株形态学研究 | 第26页 |
| 2.2.5.2 生理生化鉴定 | 第26页 |
| 2.2.5.3 18S rDNA的扩增 | 第26-28页 |
| 2.2.5.4 系统发育学分析 | 第28页 |
| 2.2.5.5 假菌丝的观察 | 第28页 |
| 2.2.6 羰基还原酶粗酶的制备 | 第28页 |
| 2.2.7 菌株ZJB-09162羰基还原酶粗酶辅酶依赖型的确定 | 第28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-34页 |
| 2.3.1 产物鉴定 | 第28-30页 |
| 2.3.1.1 产物GC-MS分析 | 第28-29页 |
| 2.3.1.2 1,3-丁二醇的手性分析 | 第29-30页 |
| 2.3.1.3 产物构型分析 | 第30页 |
| 2.3.2 菌株ZJB-09162的鉴定 | 第30-34页 |
| 2.3.2.1 形态学观察 | 第30-31页 |
| 2.3.2.2 生理生化鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.2.3 18S rDNA序列测序结果分析 | 第32-33页 |
| 2.3.2.4 假菌丝的观察 | 第33-34页 |
| 2.3.3 C.krusei ZJB-09162羰基还原酶粗酶的辅酶依赖型 | 第34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-36页 |
| 第三章 C.KRUSEI ZJB-09162羧基还原酶产酶条件的研究 | 第36-52页 |
| 3.1 前言 | 第36页 |
| 3.2 材料与方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 菌株 | 第36页 |
| 3.2.2 培养基 | 第36-37页 |
| 3.2.3 菌体培养 | 第37页 |
| 3.2.4 生物量测定 | 第37页 |
| 3.2.5 羰基还原酶酶活的测定 | 第37页 |
| 3.2.5.1 羰基还原酶酶活的定义 | 第37页 |
| 3.2.5.2 羰基还原酶酶活的测定方法 | 第37页 |
| 3.2.6 气相色谱分析方法 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第38-50页 |
| 3.3.1 培养基组分的优化 | 第38-45页 |
| 3.3.1.1 发酵培养基碳源的选择及浓度的确定 | 第38-40页 |
| 3.3.1.2 氮源的选择及浓度的确定 | 第40-41页 |
| 3.3.1.3 磷源的选择 | 第41-42页 |
| 3.3.1.4 金属离子的选择 | 第42-43页 |
| 3.3.1.5 添加不同种类氨基酸对菌株生长及酶活的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.1.6 不同挡板对菌株生长及酶活的影响 | 第44页 |
| 3.3.1.7 培养基中添加不同浓度的底物和产物对菌株生长及酶活的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.2 不同培养条件的优化 | 第45-48页 |
| 3.3.2.1 培养基初始pH的确定 | 第45-46页 |
| 3.3.2.2 培养基装液量 | 第46-47页 |
| 3.3.2.3 培养基接种量 | 第47-48页 |
| 3.3.3 C.krusei ZJB-09 162生长及发酵产酶过程 | 第48-49页 |
| 3.3.4 C.krusei ZJB-09162不对称还原4-羟基-2-丁酮合成(R)-1,3-丁二醇 | 第49-50页 |
| 3.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-52页 |
| 第四章 C.KRUSEI ZJB-09162全细胞不对称催化体系反应条件的研究 | 第52-61页 |
| 4.1 前言 | 第52-53页 |
| 4.2 材料与方法 | 第53页 |
| 4.2.1 菌株 | 第53页 |
| 4.2.2 培养基 | 第53页 |
| 4.2.3 菌体培养 | 第53页 |
| 4.2.4 反应产率的测定 | 第53页 |
| 4.2.5 气相色谱分析方法 | 第53页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第53-59页 |
| 4.3.1 反应体系pH的选择 | 第53-55页 |
| 4.3.2 反应体系温度的选择 | 第55页 |
| 4.3.3 不同辅助底物对反应的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.4 辅助底物的浓度对不对称还原反应的影响 | 第56-57页 |
| 4.3.5 不同底物浓度对不对称还原反应的影响 | 第57-58页 |
| 4.3.6 相同S/C下不同底物浓度对不对称还原反应的影响 | 第58-59页 |
| 4.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 5.1 结论 | 第61-62页 |
| 5.2 展望 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65页 |
