| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 低氧诱导因子概述 | 第13-16页 |
| 1.1 低氧诱导因子 | 第13页 |
| 1.2 HIF-1α和HIF-2α结构 | 第13-14页 |
| 1.3 HIF-1α和HIF-2α表达的调节 | 第14-15页 |
| 1.4 HIF-1α和HIF-2α低氧应答中的差异 | 第15-16页 |
| 2 HIF-2α位点变异与环境适应 | 第16页 |
| 3 高原鼢鼠与以色列盲鼹鼠 | 第16-18页 |
| 3.1 高原鼢鼠 | 第16-17页 |
| 3.2 以色列盲鼹鼠 | 第17页 |
| 3.3 不同土壤环境以色列盲鼹鼠差异 | 第17-18页 |
| 4 HIF磷酸化修饰 | 第18-19页 |
| 5 研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第一章 高原鼢鼠HIF-2α变异对环境适应的影响 | 第21-54页 |
| 1 实验材料 | 第21-24页 |
| 1.1 主要材料 | 第21页 |
| 1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第22-23页 |
| 1.4 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-42页 |
| 2.1 高原鼢鼠肝脏总RNA的提取与逆转录 | 第24-25页 |
| 2.2 高原鼢鼠HIF-2α的CDS序列克隆 | 第25-28页 |
| 2.3 高原鼢鼠HIF-2α (420-540)氨基酸序列的克隆 | 第28-29页 |
| 2.4 原核表达载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.5 原核表达载体的定点突变 | 第32-34页 |
| 2.6 原核诱导表达及蛋白纯化 | 第34-35页 |
| 2.7 高原鼢鼠HIF-2α体外磷酸化修饰分析 | 第35-37页 |
| 2.8 高原鼢鼠HIF-2α细胞内磷酸化修饰分析 | 第37-42页 |
| 3 实验结果 | 第42-52页 |
| 3.1 高原鼢鼠HIF-2α的CDS序列克隆 | 第42-43页 |
| 3.2 原核表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.3 TRX-HS480原核表达载体的定点突变 | 第44-45页 |
| 3.4 TRX-HS480及突变体原核诱导表达及纯化 | 第45-46页 |
| 3.5 高原鼢鼠HIF-2α体外磷酸化修饰分析 | 第46-48页 |
| 3.6 高原鼢鼠HIF-2α细胞内磷酸化修饰分析 | 第48-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第二章 不同土壤环境以色列盲鼹鼠HIF-2α表达水平差异分析 | 第54-70页 |
| 1 实验材料 | 第54页 |
| 1.1 主要材料 | 第54页 |
| 1.2 主要试剂 | 第54页 |
| 1.3 主要仪器 | 第54页 |
| 2 试验方法 | 第54-60页 |
| 2.1 以色列盲鼹鼠的HIF及其靶基因基因组序列分析 | 第54-55页 |
| 2.2 以色列盲鼹鼠HIF-2α启动子克隆 | 第55-58页 |
| 2.3 以色列盲鼹鼠报告基因载体的构建与定点突变 | 第58页 |
| 2.4 双荧光素酶报告基因实验 | 第58页 |
| 2.5 以色列盲鼹鼠的基因表达水平差异检测 | 第58-60页 |
| 3 实验结果 | 第60-68页 |
| 3.1 基因组数据分析结果 | 第60页 |
| 3.2 HIF-2α启动子克隆 | 第60-62页 |
| 3.3 HIF-2α启动子报告基因载体构建与定点突变 | 第62-65页 |
| 3.4 HIF-2α启动子位点变异对其转录活性的影响 | 第65-66页 |
| 3.5 实时荧光定量PCR | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 第三章 EMSA分析SNP对特定转录因子识别与结合的影响 | 第70-81页 |
| 1 实验材料 | 第70-71页 |
| 1.1 主要材料 | 第70页 |
| 1.2 主要试剂 | 第70页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第70-71页 |
| 1.4 主要仪器 | 第71页 |
| 2. 试验方法 | 第71-75页 |
| 2.1 转录因子结合位点预测 | 第71页 |
| 2.2 转录因子真核表达 | 第71-73页 |
| 2.3 EMSA分析HIF-2α SNP变异对于特定转录因子结合的影响 | 第73-75页 |
| 3. 实验结果 | 第75-79页 |
| 3.1 转录因子结合位点预测 | 第75页 |
| 3.2 真核表达载体的构建 | 第75-78页 |
| 3.3 EMSA分析HIF-2α SNP变异对HNF4G和B-Myb结合的影响 | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 致谢词 | 第88-90页 |
