| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 主要符号表 | 第16-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-38页 |
| 1.1 氨肽酶简介 | 第18-21页 |
| 1.1.1 氨肽酶的来源 | 第19-20页 |
| 1.1.1.1 植物 | 第19页 |
| 1.1.1.2 动物 | 第19页 |
| 1.1.1.3 微生物 | 第19-20页 |
| 1.1.2 氨肽酶的分类及酶学性质 | 第20-21页 |
| 1.1.3 氨肽酶的结构 | 第21页 |
| 1.2 氨肽酶的研究开发现状 | 第21-25页 |
| 1.2.1 产氨肽酶微生物的选育、目的基因的克隆与表达 | 第22页 |
| 1.2.2 微生物与动植物组织中氨肽酶的分离纯化与性质研究 | 第22-23页 |
| 1.2.3 氨肽酶的应用研究 | 第23-25页 |
| 1.2.3.1 内源氨肽酶对食品风味的影响 | 第23页 |
| 1.2.3.2 蛋白质深度水解及脱苦 | 第23-24页 |
| 1.2.3.3 制备生物活性肽 | 第24-25页 |
| 1.3 氨肽酶的发酵生产 | 第25-27页 |
| 1.3.1 摇瓶发酵调控 | 第25-26页 |
| 1.3.2 发酵罐发酵调控 | 第26-27页 |
| 1.4 氨肽酶的特异性 | 第27-28页 |
| 1.5 本课题的立题依据和主要研究内容 | 第28-29页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第28页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-38页 |
| 第二章 产氨肽酶细菌的筛选鉴定及发酵条件初步优化 | 第38-54页 |
| 2.1 前言 | 第38页 |
| 2.2 材料与方法 | 第38-43页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第38-40页 |
| 2.2.1.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 2.2.1.2 菌种 | 第39页 |
| 2.2.1.3 试剂与培养基 | 第39页 |
| 2.2.1.4 主要仪器设备 | 第39-40页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 2.2.2.1 蛋白酶活力的测定 | 第40页 |
| 2.2.2.2 氨肽酶活力的测定 | 第40-41页 |
| 2.2.2.3 深海细菌的富集与产蛋白酶菌种的初筛 | 第41页 |
| 2.2.2.4 产氨肽酶菌种的筛选 | 第41-42页 |
| 2.2.2.5 产氨肽酶菌种的鉴定 | 第42页 |
| 2.2.2.6 菌种所产氨肽酶的初步应用评价 | 第42-43页 |
| 2.2.2.7 发酵条件的初步优化 | 第43页 |
| 2.2.2.8 遗传稳定性 | 第43页 |
| 2.2.3 数据分析 | 第43页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第43-51页 |
| 2.3.1 菌种筛选结果 | 第43-44页 |
| 2.3.2 菌种鉴定 | 第44-46页 |
| 2.3.3 菌种所产氨肽酶的初步应用评价 | 第46-47页 |
| 2.3.4 Bacillus licheniformis SWJS33发酵产氨肽酶条件优化 | 第47-51页 |
| 2.3.5 菌种的遗传稳定性 | 第51页 |
| 2.4 本章小结 | 第51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 第三章 SWJS33以大豆粕为底物发酵产氨肽酶的研究 | 第54-74页 |
| 3.1 前言 | 第54-55页 |
| 3.2 材料与方法 | 第55-58页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 3.2.1.1 菌种 | 第55页 |
| 3.2.1.2 试剂与培养基 | 第55页 |
| 3.2.1.3 主要仪器设备 | 第55-56页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第56-58页 |
| 3.2.2.1 生物量的测定 | 第56页 |
| 3.2.2.2 蛋白酶活力的测定 | 第56页 |
| 3.2.2.3 氨肽酶活力的测定 | 第56页 |
| 3.2.2.4 还原糖的测定 | 第56页 |
| 3.2.2.5 可溶性蛋白的测定 | 第56页 |
| 3.2.2.6 菌体比生长速率和产物比合成速率的测定 | 第56-57页 |
| 3.2.2.7 以大豆粕为底物发酵产氨肽酶的摇瓶发酵优化 | 第57页 |
| 3.2.2.8 生物发酵罐的扩大培养 | 第57-58页 |
| 3.2.2.9 2.5L发酵罐发酵条件的优化 | 第58页 |
| 3.2.3 数据分析 | 第58页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第58-71页 |
| 3.3.1 以大豆粕为底物发酵产氨肽酶的摇瓶发酵优化 | 第58-62页 |
| 3.3.1.1 大豆粕粉碎粒径对SWJS33产氨肽酶的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.1.2 大豆粕浓度对SWJS33产氨肽酶的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.1.3 NaCl浓度对SWJS33产氨肽酶的影响 | 第60页 |
| 3.3.1.4 补充氮源或碳源对SWJS33产氨肽酶的影响 | 第60-62页 |
| 3.3.2 2.5L发酵罐中菌体生长和代谢特性分析 | 第62-67页 |
| 3.3.2.1 补充氮源或碳源对SWJS33生长的影响 | 第62-63页 |
| 3.3.2.2 补充氮源或碳源对SWJS33产氨肽酶的影响 | 第63-64页 |
| 3.3.2.3 补充氮源或碳源对发酵过程中还原糖、可溶性蛋白及蛋白酶的影响 | 第64-65页 |
| 3.3.2.4 补充氮源或碳源对发酵过程中pH和溶氧的影响 | 第65-67页 |
| 3.3.2.5 不同的碳源、氮源补充方案下菌株氨肽酶的产量 | 第67页 |
| 3.3.3 2.5L发酵罐发酵条件的优化 | 第67-70页 |
| 3.3.3.1 搅拌速度的优化 | 第67-68页 |
| 3.3.3.2 通气量的优化 | 第68页 |
| 3.3.3.3 pH的优化 | 第68-69页 |
| 3.3.3.4 接种量的优化 | 第69-70页 |
| 3.3.4 20L发酵罐分批发酵 | 第70-71页 |
| 3.4 本章小结 | 第71页 |
| 参考文献 | 第71-74页 |
| 第四章 SWJS33所产氨肽酶的分离纯化与酶学性质研究 | 第74-88页 |
| 4.1 前言 | 第74-75页 |
| 4.2 材料与方法 | 第75-78页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第75-76页 |
| 4.2.1.1 菌种 | 第75页 |
| 4.2.1.2 主要试剂与培养基 | 第75页 |
| 4.2.1.3 主要仪器设备 | 第75-76页 |
| 4.2.1.4 主要试剂 | 第76页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第76-78页 |
| 4.2.2.1 氨肽酶含量的测定 | 第76页 |
| 4.2.2.2 蛋白含量测定 | 第76页 |
| 4.2.2.3 粗氨肽酶的制备 | 第76页 |
| 4.2.2.4 氨肽酶的分离纯化 | 第76页 |
| 4.2.2.5 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第76-77页 |
| 4.2.2.6 串联质谱的鉴定 | 第77页 |
| 4.2.2.7 温度对氨肽酶活性和稳定性的影响 | 第77页 |
| 4.2.2.8 pH对氨肽酶活性和稳定性的影响 | 第77页 |
| 4.2.2.9 NaCl对氨肽酶活性的影响 | 第77页 |
| 4.2.2.10 金属离子对氨肽酶活性的影响 | 第77-78页 |
| 4.2.2.11 抑制剂对氨肽酶活性的影响 | 第78页 |
| 4.2.2.12 氨肽酶的底物特异性与动力学研究 | 第78页 |
| 4.2.3 数据分析 | 第78页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第78-85页 |
| 4.3.1 氨肽酶的分离纯化与鉴定 | 第78-80页 |
| 4.3.2 氨肽酶酶学性质的研究 | 第80-85页 |
| 4.3.2.1 温度对氨肽酶活性和稳定性的影响 | 第80-81页 |
| 4.3.2.2 pH对氨肽酶活性和稳定性的影响 | 第81-82页 |
| 4.3.2.3 NaCl对氨肽酶活性的影响 | 第82-83页 |
| 4.3.2.4 金属离子对氨肽酶活性的影响 | 第83页 |
| 4.3.2.5 还原剂和抑制剂对氨肽酶活性的影响 | 第83-84页 |
| 4.3.2.6 氨肽酶的底物特异性和酶促动力学研究 | 第84-85页 |
| 4.4 本章小结 | 第85页 |
| 参考文献 | 第85-88页 |
| 第五章 SWJS33所产氨肽酶酶解特异性的研究 | 第88-107页 |
| 5.1 前言 | 第88页 |
| 5.2 材料与方法 | 第88-92页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第88-89页 |
| 5.2.1.1 菌种 | 第88-89页 |
| 5.2.1.2 主要试剂 | 第89页 |
| 5.2.1.3 主要仪器设备 | 第89页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第89-92页 |
| 5.2.2.1 BLAP的发酵 | 第89页 |
| 5.2.2.2 BLAP的分离纯化 | 第89页 |
| 5.2.2.3 合成肽的酶解 | 第89-90页 |
| 5.2.2.4 BLAP酶解大豆蛋白酶解物 | 第90页 |
| 5.2.2.5 合成肽酶解物中游离氨基酸的测定 | 第90-91页 |
| 5.2.2.6 混合二肽酶解物及AB-SPHs中FAA的测定 | 第91页 |
| 5.2.2.7 高效液相色谱-电喷雾-超高分辨飞行时间串联质谱法鉴定酶解物中的肽 | 第91页 |
| 5.2.2.8 不同氨基酸在N端出现的频率及切割比例 | 第91-92页 |
| 5.2.3 数据分析 | 第92页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第92-104页 |
| 5.3.1 BLAP对单一Leu-AA和AA-Tyr的水解特异性 | 第92-94页 |
| 5.3.2 BLAP对部分三肽的酶解特异性 | 第94-95页 |
| 5.3.3 BLAP对混合二肽的酶解特异性 | 第95-96页 |
| 5.3.4 BLAP在酶解大豆分离蛋白时的酶解特异性 | 第96-104页 |
| 5.3.4.1 游离氨基酸分析 | 第96-97页 |
| 5.3.4.2 肽的鉴定 | 第97-104页 |
| 5.4 本章小结 | 第104页 |
| 参考文献 | 第104-107页 |
| 第六章 BLAP在酶解花生分离蛋白与玉米醇溶蛋白中的特性研究 | 第107-126页 |
| 6.1 前言 | 第107-108页 |
| 6.2 材料与方法 | 第108-113页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第108-109页 |
| 6.2.1.1 实验原料 | 第108页 |
| 6.2.1.2 主要试剂 | 第108-109页 |
| 6.2.1.3 主要仪器设备 | 第109页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第109-112页 |
| 6.2.2.1 氨肽酶BLAP的制备与纯化 | 第109页 |
| 6.2.2.2 蛋白质的酶解 | 第109-110页 |
| 6.2.2.3 小分子肽的制备 | 第110页 |
| 6.2.2.4 水解度的测定 | 第110页 |
| 6.2.2.5 游离与水解氨基酸的测定 | 第110-111页 |
| 6.2.2.6 ABTS法 | 第111页 |
| 6.2.2.7 ORAC法 | 第111-112页 |
| 6.2.2.8 ACE抑制活性测定 | 第112页 |
| 6.2.2.9 UPLC-ESI-MS/MS分析 | 第112页 |
| 6.2.3 数据分析 | 第112-113页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第113-122页 |
| 6.3.1 酶解过程中水解度的变化 | 第113-114页 |
| 6.3.2 酶解过程中游离氨基酸（FAA）的变化 | 第114-117页 |
| 6.3.3 不同酶解物的抗氧化活性与ACE抑制活性 | 第117-118页 |
| 6.3.4 超滤后MW<3 kDa组分的氨基酸组成 | 第118-119页 |
| 6.3.5 不同酶解物肽的组成的研究 | 第119-122页 |
| 6.4 本章小结 | 第122页 |
| 参考文献 | 第122-126页 |
| 结论与展望 | 第126-129页 |
| 1 结论 | 第126-127页 |
| 2 论文创新点 | 第127-128页 |
| 3 展望 | 第128-129页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第129-131页 |
| 致谢 | 第131-133页 |
| 附件 | 第133页 |
