| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACTS | 第12-13页 |
| 符号说明 | 第14-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-23页 |
| 1.1 硫酸软骨素 | 第16-18页 |
| 1.1.1 糖胺聚糖 | 第16-17页 |
| 1.1.2 硫酸软骨素的结构 | 第17页 |
| 1.1.3 硫酸软骨素的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 硫酸软骨素降解酶 | 第18-20页 |
| 1.2.1 糖胺聚糖降解酶 | 第18页 |
| 1.2.2 硫酸软骨素降解酶的分类 | 第18页 |
| 1.2.3 硫酸软骨素AC降解酶 | 第18-19页 |
| 1.2.4 硫酸软骨素降解酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.5 硫酸软骨素降解酶的基因克隆和重组表达 | 第20页 |
| 1.3 本实验的研究内容与意义 | 第20-23页 |
| 1.3.1 编码硫酸软骨素降解酶未知基因序列的扩增 | 第20-21页 |
| 1.3.2 新型硫酸软骨素降解酶的异源表达与纯化 | 第21页 |
| 1.3.3 硫酸软骨素AC降解酶催化方向研究 | 第21-22页 |
| 1.3.4 研究意义 | 第22-23页 |
| 第二章 新型硫酸软骨素降解酶编码基因的扩增 | 第23-35页 |
| 2.1 实验仪器、材料与试剂 | 第23页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第23页 |
| 2.1.2 材料与试剂 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 菌株全基因组提取 | 第24页 |
| 2.2.2 设计简并引物扩增部分目的基因 | 第24-25页 |
| 2.2.3 利用反向PCR扩增下游基因序列 | 第25-26页 |
| 2.2.4 应用Genome walking技术克隆剩余基因序列 | 第26-28页 |
| 2.2.5 扩增全部目的基因 | 第28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-33页 |
| 2.3.1 中间部分目的基因的扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.2 下游目的基因的扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.3 上游目的基因的扩增 | 第31页 |
| 2.3.4 克隆全部目的基因 | 第31-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 新型硫酸软骨素降解酶的异源表达及性质研究 | 第35-52页 |
| 3.1 实验仪器、材料与试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.1 仪器 | 第35页 |
| 3.1.2 试剂 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-42页 |
| 3.2.1 目的基因的制备 | 第36页 |
| 3.2.2 重组表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 3.2.3 重组蛋白的表达 | 第38页 |
| 3.2.4 重组蛋白的纯化 | 第38-40页 |
| 3.2.5 重组蛋白的活性验证 | 第40页 |
| 3.2.6 重组蛋白的性质研究 | 第40-42页 |
| 3.3 实验结果 | 第42-49页 |
| 3.3.1 重组表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.3.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第44页 |
| 3.3.3 重组蛋白的活性验证 | 第44-46页 |
| 3.3.4 重组蛋白的性质研究 | 第46-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-52页 |
| 3.4.1 基因工程菌的构建与筛选 | 第49-50页 |
| 3.4.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第50-51页 |
| 3.4.3 AsChnAC底物适应性的分析及酶学性质研究 | 第51-52页 |
| 第四章 催化方向的研究 | 第52-67页 |
| 4.1 实验仪器、材料与试剂 | 第52页 |
| 4.1.1 仪器 | 第52页 |
| 4.1.2 试剂 | 第52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 4.2.1 模式底物合成 | 第52-54页 |
| 4.2.2 模式寡糖底物的降解 | 第54页 |
| 4.3 实验结果 | 第54-65页 |
| 4.3.1 三糖底物合成 | 第54-56页 |
| 4.3.2 AsChnAC降解三糖产物分析 | 第56-57页 |
| 4.3.3 HP-CS-六糖合成及AsChnAC降解六糖底物分析 | 第57-60页 |
| 4.3.4 CS-HP-六糖合成及AsChnAC降解六糖底物分析 | 第60-62页 |
| 4.3.5 总结 | 第62-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-67页 |
| 总结 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-82页 |
| 附录1 目的基因AsChnAC序列 | 第77-79页 |
| 附录2 AsChnAC氨基酸残基序列 | 第79-82页 |
| 附件 | 第82-90页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第90页 |
