| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第9-18页 |
| 1.1 溶菌酶简介 | 第9-13页 |
| 1.1.1 溶菌酶的结构、理化性质 | 第9-10页 |
| 1.1.2 溶菌酶的分类 | 第10-12页 |
| 1.1.3 溶菌酶的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.4 海参溶菌酶的研究前景 | 第13页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌及其表达系统简介 | 第13-16页 |
| 1.2.1 枯草芽孢杆菌表达系统的相关组成 | 第14-15页 |
| 1.2.2 枯草芽孢杆菌表达系统的优点 | 第15页 |
| 1.2.3 整合型表达载体 | 第15-16页 |
| 1.2.4 宿主菌枯草芽孢杆菌WB600 | 第16页 |
| 1.3 研究的主要内容、目的、意义和技术路线 | 第16-18页 |
| 1.3.1 研究的主要内容 | 第16页 |
| 1.3.2 研究的主要目的 | 第16页 |
| 1.3.3 研究的主要意义 | 第16-17页 |
| 1.3.4 研究的技术路线 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-36页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.2 酶与试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.3 特异引物 | 第19页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第19页 |
| 2.1.5 培养基的制备 | 第19-20页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 P43启动子基因片段的扩增 | 第21-24页 |
| 2.2.1 提取BS168基因组DNA | 第21-22页 |
| 2.2.2 设计合成特异性引物 | 第22页 |
| 2.2.3 PCR法扩增P43启动子片段 | 第22-24页 |
| 2.3 P43启动子基因的亚克隆 | 第24-27页 |
| 2.3.1 构建重组克隆质粒pMD18-P43并转化E.coli DH5α | 第24-25页 |
| 2.3.2 菌落PCR法鉴定阳性菌株 | 第25-26页 |
| 2.3.3 质粒提取与双酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 2.4 海参溶菌酶基因的亚克隆 | 第27页 |
| 2.5 P43启动子基因与海参溶菌酶基因的连接 | 第27-30页 |
| 2.5.1 P43启动子与海参溶菌酶基因的酶切与回收 | 第27-29页 |
| 2.5.2 连接与转化 | 第29页 |
| 2.5.3 菌落PCR验证 | 第29页 |
| 2.5.4 质粒提取与双酶切验证 | 第29-30页 |
| 2.6 重组整合载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.6.1 整合载体pDG1730与目的基因的酶切与回收 | 第30-31页 |
| 2.6.2 连接与转化 | 第31页 |
| 2.6.3 质粒提取与双酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 2.7 感受态细胞的制备与转化 | 第32-33页 |
| 2.7.1 感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.7.2 感受态细胞的转化 | 第33页 |
| 2.7.3 菌落PCR验证 | 第33页 |
| 2.7.4 淀粉平板检测 | 第33页 |
| 2.8 SjLys蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达研究 | 第33-34页 |
| 2.8.1 SjLys蛋白表达条件 | 第33页 |
| 2.8.2 SDS-PAGE电泳技术 | 第33-34页 |
| 2.9 重组蛋白的抑菌活性检测 | 第34-36页 |
| 2.9.1 菌种 | 第34-35页 |
| 2.9.2 重组蛋白的活性测定 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-49页 |
| 3.1 P43启动子基因的克隆与分析 | 第36-40页 |
| 3.1.1 PCR扩增P43启动子片段 | 第36-37页 |
| 3.1.2 P43启动子基因的回收和纯化 | 第37-38页 |
| 3.1.3 重组质粒的菌落PCR验证 | 第38页 |
| 3.1.4 重组质粒双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.5 重组克隆质粒测序鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2 P43启动子与海参溶菌酶基因的连接结果分析 | 第40-42页 |
| 3.2.1 pMD18-SjLys质粒的双酶切回收 | 第40页 |
| 3.2.2 重组质粒pMD18-P43 -SjLys的菌落PCR验证 | 第40-41页 |
| 3.2.3 质粒pMD18-P43-SjLys的双酶切验证 | 第41-42页 |
| 3.3 重组整合载体的构建分析 | 第42-45页 |
| 3.3.1 整合载体pDG1730双酶切验证分析 | 第42-43页 |
| 3.3.2 重组整合载体菌落PCR验证分析 | 第43页 |
| 3.3.3 整合载体pDG-P43-SjLys双酶切验证分析 | 第43-45页 |
| 3.4 感受态细胞的制备与转化验证 | 第45-46页 |
| 3.4.1 感受态细胞转化的菌落PCR验证 | 第45页 |
| 3.4.2 淀粉平板验证分析 | 第45-46页 |
| 3.5 SjLys蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达研究 | 第46-47页 |
| 3.5.1 生长曲线的测定 | 第46页 |
| 3.5.2 SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
| 3.6 重组蛋白的抑菌活性检测 | 第47-49页 |
| 第四章 结论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
