| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 主要性状的中英文对照和英文缩写 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-31页 |
| 1.引言 | 第16页 |
| 2.候选基因法及繁殖性状候选基因 | 第16-18页 |
| 2.1 雌激素受体基因(Estrogen receptor,ESR) | 第16-17页 |
| 2.2 促卵泡激素β亚基基因(Follicle-stimulating hormoneβ.FSHβ) | 第17页 |
| 2.3 视黄醇结合蛋白4基因(Retinol-binding protein 4,RBP4)和视黄酸受体γ亚基(Retinoic acid receptorγ,RARG) | 第17-18页 |
| 2.4 骨桥蛋白基因(Osteopontin,OPN) | 第18页 |
| 2.5 催乳素受体基因(Prolactin receptor,PRLR) | 第18页 |
| 3.调节卵泡生长发育的相关因素的研究进展 | 第18-20页 |
| 3.1 促性腺激素 | 第18-19页 |
| 3.2 类固醇激素 | 第19页 |
| 3.3 生长因子 | 第19-20页 |
| 3.4 细胞因子 | 第20页 |
| 4.拟分离候选基因的研究进展 | 第20-26页 |
| 4.1 HSD17B1(17beta-Hydroxysteroid dehydrogenase type 1)基因 | 第20-23页 |
| 4.2 NR4A1(Nuclear receptor subfamily 4,group 4,member 1)基因 | 第23-25页 |
| 4.3 ALAS1(5-aminolevulinate synthase 1)基因 | 第25-26页 |
| 5.启动子的研究 | 第26-29页 |
| 5.1 分离启动子序列的方法 | 第26-29页 |
| 5.2 启动子功能的研究 | 第29页 |
| 6.定点突变的研究方法 | 第29-31页 |
| 第二章 研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第三章 材料与方法 | 第32-51页 |
| 1.材料 | 第32-37页 |
| 1.1 试验样品 | 第32页 |
| 1.1.1 DNA样品 | 第32页 |
| 1.1.2 组织样品 | 第32页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第32-33页 |
| 1.3 主要试剂及溶液 | 第33-36页 |
| 1.3.1 主要试剂 | 第33-36页 |
| 1.3.2 主要溶液 | 第36页 |
| 1.4 主要应用的生物学软件及相关的网站 | 第36-37页 |
| 2 试验方法 | 第37-51页 |
| 2.1 基因组DNA的提取 | 第37-39页 |
| 2.1.1 猪基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.1.2 猪组织总RNA的提取 | 第38页 |
| 2.1.3 cDNA第一链的合成 | 第38-39页 |
| 2.2 猪候选基因序列的克隆、测序及序列分析 | 第39-42页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第39页 |
| 2.2.2 PCR反应 | 第39-41页 |
| 2.2.3 PCR产物的回收、纯化、克隆测序 | 第41-42页 |
| 2.2.4 DNA序列的生物信息学分析 方法请参见1.4 | 第42页 |
| 2.3 候选基因部分SNPs的PCR-RFLP检测 | 第42-43页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第42页 |
| 2.3.2 PCR反应 | 第42-43页 |
| 2.3.3 PCR扩增产物的酶切 | 第43页 |
| 2.3.4 酶切产物的电泳检测方法 | 第43页 |
| 2.4 数据处理分析 | 第43-44页 |
| 2.4.1 统计分析的软件 | 第43-44页 |
| 2.4.2 基因效应统计分析模型 | 第44页 |
| 2.5 候选基因表达模式分析 | 第44-45页 |
| 2.5.1 候选基因组织表达谱分析 | 第44页 |
| 2.5.2 候选基因在猪卵巢颗粒细胞瞬时表达模式分析 | 第44-45页 |
| 2.6 猪HSD17B1基因启动子的研究 | 第45-51页 |
| 2.6.1 启动子序列的克隆测序 | 第45-46页 |
| 2.6.2 构建表达载体的片段的获得 | 第46页 |
| 2.6.3 表达载体的构建 | 第46-49页 |
| 2.6.4 细胞培养 | 第49页 |
| 2.6.5 细胞瞬时转染 | 第49-50页 |
| 2.6.6 双荧光素酶活性测定与分析 | 第50-51页 |
| 第四 章结果与分析 | 第51-79页 |
| 1 猪基因组DNA以及总RNA的提取与质量检测结果 | 第51页 |
| 2 猪HSD17B1基因 | 第51-64页 |
| 2.1 猪HSD17B1基因基因组序列的克隆及序列分析 | 第51-54页 |
| 2.1.1 猪HSD17B1基因基因组序列的克隆 | 第51-52页 |
| 2.1.2 猪HSD17B1基因DNA序列分析 | 第52-54页 |
| 2.2 猪HSD17B1基因表达模式的分析 | 第54-55页 |
| 2.2.1 猪HSD17B1基因组织表达谱分析 | 第54-55页 |
| 2.2.2 猪HSD17B1基因在猪卵巢颗粒细胞表达情况分析 | 第55页 |
| 2.3 猪HSD17B1基因多态位点的检测及与猪繁殖性状的关联分析 | 第55-58页 |
| 2.3.1 猪HSD17B1基因多态位点的检测 | 第55-56页 |
| 2.3.2 猪HSD17B1基因MvaI多态位点基因型与猪繁殖性状的关联分析 | 第56-58页 |
| 2.4 猪HSD17B1基因启动子功能的初步分析 | 第58-64页 |
| 2.4.1 猪HSD17B1基因启动子序列的获得及生物信息学分析 | 第58-59页 |
| 2.4.2 猪HSD17B1基因的启动子缺失片段和定点突变片段的获得 | 第59-61页 |
| 2.4.3 猪HSD17B1基因的荧光素酶报告基因表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 2.4.4 猪HSD17B1基因的不同表达载体的荧光素酶的相对活性 | 第62页 |
| 2.4.5 猪雌激素受体基因DBD区域(ER DNA-binding domain)的克隆和表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 2.4.6 猪ER DBD区域的表达载体与猪HSD17B1基因的启动子的真核表达载体之间的相互作用分析 | 第63-64页 |
| 3 猪NR4A1基因 | 第64-71页 |
| 3.1 猪NR4A1基因基因组序列的克隆及序列分析 | 第64-68页 |
| 3.1.1 猪NR4A1基因基因组序列的克隆 | 第64-65页 |
| 3.1.2 猪NR4A1基因DNA序列分析 | 第65-68页 |
| 3.2 猪NR4A1基因表达模式的分析 | 第68-69页 |
| 3.2.1 猪NR4A1基因组织表达谱分析 | 第68页 |
| 3.2.2 猪NR4A1基因在猪卵巢颗粒细胞表达情况分析 | 第68-69页 |
| 3.3 猪NR4A1基因多态位点的检测及与猪繁殖性状的关联分析 | 第69-71页 |
| 3.3.1 猪NR4A1基因多态位点的检测 | 第69-70页 |
| 3.3.2 猪NR4A1基因DdeI多态位点基因型与猪繁殖性状的关联分析 | 第70-71页 |
| 4 猪ALAS1基因 | 第71-79页 |
| 4.1 猪ALAS1基因基因组序列的克隆及序列分析 | 第71-75页 |
| 4.1.1 猪ALAS1基因基因组序列的克隆 | 第71-72页 |
| 4.1.2 猪ALAS1基因DNA序列分析 | 第72-75页 |
| 4.2 猪ALAS1基因表达模式的分析 | 第75-76页 |
| 4.2.1 猪ALAS1基因组织表达谱分析 | 第75-76页 |
| 4.2.2 猪ALAS1基因在猪卵巢颗粒细胞表达情况分析 | 第76页 |
| 4.3 猪ALAS1基因多态位点的检测及与猪繁殖性状的关联分析 | 第76-79页 |
| 4.3.1 猪ALAS1基因多态位点的检测 | 第76-77页 |
| 4.3.2 猪ALAS1基因MspI多态位点基因型与猪繁殖性状的关联分析 | 第77-79页 |
| 第四章 讨论 | 第79-87页 |
| 1 关于候选基因法筛选候选基因 | 第79页 |
| 2 关于TAIL-PCR技术 | 第79-80页 |
| 3 关于猪HSD17B1基因 | 第80-82页 |
| 4 关于NR4A1基因 | 第82-83页 |
| 5 关于猪ALAS1基因 | 第83-84页 |
| 6 关于内含子SNPs的生物学效应 | 第84-85页 |
| 7 关于启动子功能的研究 | 第85页 |
| 8 下一步工作计划 | 第85-87页 |
| 小结 | 第87-88页 |
| 主要参考文献 | 第88-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 附录1 所获得的猪HSD17B1基因序列 | 第101-103页 |
| 附录2 所获得的猪NR4A1基因序列 | 第103-106页 |
| 附录3 所获得的猪ALAS1基因序列 | 第106-110页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第110页 |
