| 摘要 | 第7-8页 |
| 关键词 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| Keywords | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 火菇素研究背景与立题依据 | 第13-16页 |
| 1.1.1 火菇素的制备及抗癌性质研究 | 第13-14页 |
| 1.1.2 火菇素cDNA文库的构建 | 第14-15页 |
| 1.1.3 本论文的立题依据 | 第15-16页 |
| 1.2 利用大肠杆菌表达火菇素cDNA基因 | 第16-21页 |
| 1.2.1 大肠杆菌原核表达体系 | 第16-19页 |
| 1.2.2 常用的原核启动子和诱导调控表达系统 | 第19-20页 |
| 1.2.3 利用大肠杆菌表达火菇素cDNA基因 | 第20-21页 |
| 1.3 包涵体的复性 | 第21-24页 |
| 1.3.1 包涵体的沈涤与溶解 | 第21-22页 |
| 1.3.2 包涵体的复性 | 第22页 |
| 1.3.3 辅助复性的几种方法 | 第22-24页 |
| 1.4 活性蛋白的研究进展 | 第24-26页 |
| 2 火菇素cDNA基因的原核载体表达与重组蛋白的纯化 | 第26-44页 |
| 2.1 材料、试剂与设备 | 第26-27页 |
| 2.1.1 材料 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂与试剂盒 | 第26-27页 |
| 2.1.3 设备 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.2.1 火菇素cDNA基因的PCR扩增 | 第27-29页 |
| 2.2.2 原核表达质粒的构建与鉴定 | 第29-31页 |
| 2.2.2.1 质粒载体与目的基因的双酶切反应 | 第29-30页 |
| 2.2.2.2 目的基因插入载体 | 第30页 |
| 2.2.2.3 重组质粒pET32a(+)-flammulin的鉴定与测序 | 第30-31页 |
| 2.2.3 火菇素重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第31页 |
| 2.2.4 火菇素重组蛋白的表达分布 | 第31-32页 |
| 2.2.5 火菇素重组蛋白诱导表达优化 | 第32-33页 |
| 2.2.6 重组蛋白的分离纯化 | 第33页 |
| 2.2.7 Western-blot免疫印迹检测 | 第33-34页 |
| 2.3 实验结果 | 第34-41页 |
| 2.3.1 火菇素cDNA基因的PCR扩增 | 第34页 |
| 2.3.2 原核表达质粒的构建与鉴定 | 第34-38页 |
| 2.3.2.1 pBK-CMV-flammulin质粒与pET32a(+)质粒图谱 | 第34-36页 |
| 2.3.2.2 重组质粒pET32a(+)-flammulin的鉴定与测序 | 第36-38页 |
| 2.3.3 火菇素重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第38页 |
| 2.3.4 火菇素重组蛋白的表达分布 | 第38-39页 |
| 2.3.5 火菇素重组蛋白诱导表达优化 | 第39-40页 |
| 2.3.6 重组蛋白的分离纯化 | 第40页 |
| 2.3.7 Western-blot免疫印迹检测 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论与分析 | 第41-44页 |
| 3 火菇素重组包涵体蛋白的复性研究 | 第44-51页 |
| 3.1 材料、试剂与设备 | 第44-45页 |
| 3.1.1 材料 | 第44页 |
| 3.1.2 试剂与试剂盒 | 第44-45页 |
| 3.1.3 设备 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.2.1 火菇素包涵体蛋白的获得 | 第45-46页 |
| 3.2.1.1 包涵体蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 3.2.1.2 包涵体蛋白的提取 | 第46页 |
| 3.2.1.3 包涵体蛋白的洗涤 | 第46页 |
| 3.2.1.4 包涵体蛋白的溶解 | 第46页 |
| 3.2.2 火菇素包涵体蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 3.2.3 火菇素包涵体蛋白的复性 | 第47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-49页 |
| 3.3.1 火菇素包涵体蛋白的获得 | 第47-48页 |
| 3.2.2 火菇素包涵体蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 3.2.3 火菇素包涵体蛋白的复性 | 第49页 |
| 3.4 讨论与分析 | 第49-51页 |
| 4 火菇素抑瘤机制的探讨 | 第51-59页 |
| 4.1 材料、试剂与设备 | 第51-52页 |
| 4.1.1 材料 | 第51页 |
| 4.1.2 试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 设备 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 U937细胞的培养 | 第52页 |
| 4.2.2 普通光学显微镜观察凋亡情况 | 第52页 |
| 4.2.3 激光扫描共聚焦显微镜观察凋亡情况 | 第52-53页 |
| 4.2.4 流式细胞仪检测凋亡情况 | 第53页 |
| 4.3 实验结果 | 第53-58页 |
| 4.3.1 U937细胞的培养 | 第53-55页 |
| 4.3.2 普通光学显微镜观察凋亡情况 | 第55页 |
| 4.3.3 激光扫描共聚焦显微镜观察凋亡情况 | 第55-57页 |
| 4.3.4 流式细胞仪检测凋亡情况 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论与分析 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 在读期间发表论文 | 第64-65页 |
| 感谢 | 第65-66页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第66页 |
