| 1 引言 | 第9-34页 |
| 1.1 禽流感病毒研究进展 | 第9-24页 |
| 1.1.1 禽流感的病原及其特性 | 第10-11页 |
| 1.1.2 禽流感病毒的分子生物学特性 | 第11-17页 |
| 1.1.3 禽流感在宿主中的存在和传播方式 | 第17-18页 |
| 1.1.4 禽流感病毒的致病性及危害 | 第18-20页 |
| 1.1.5 禽流感的公共卫生意义 | 第20-23页 |
| 1.1.6 小结 | 第23-24页 |
| 1.2 反向遗传学技术及其在流感禽流感病毒研究中的应用 | 第24-31页 |
| 1.2.1 RNA病毒反向遗传学操作技术的策略 | 第24页 |
| 1.2.2 正链RNA病毒的反向遗传学操作 | 第24-26页 |
| 1.2.3 负链RNA病毒的反向遗传学操作 | 第26-28页 |
| 1.2.4 影响感染性克隆的因素 | 第28页 |
| 1.2.5 反向遗传学技术在流感禽流感病毒研究中的应用 | 第28-30页 |
| 1.2.6 小结 | 第30-31页 |
| 1.3 本论文研究概述 | 第31-34页 |
| 2 实验部分 | 第34-85页 |
| 2.1 实验一 A/Duck/Shanghai/8/01(H5N1)禽流感病毒的分子遗传与衍化分析 | 第34-66页 |
| 2.1.1 材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1.1 病毒 | 第34页 |
| 2.1.1.2 SPF 鸡胚 | 第34页 |
| 2.1.1.3 主要试剂 | 第34页 |
| 2.1.1.4 引物 | 第34-35页 |
| 2.1.2 方法 | 第35-40页 |
| 2.1.2.1 病毒的增殖和鉴定 | 第35页 |
| 2.1.2.2 病毒RNA的提取 | 第35页 |
| 2.1.2.3 病毒RNA的RT-PCR | 第35-36页 |
| 2.1.2.4 PCR产物回收和纯化 | 第36页 |
| 2.1.2.5 目的基因DNA产物的连接与转化 | 第36-37页 |
| 2.1.2.6 阳性重组质粒的筛选 | 第37页 |
| 2.1.2.7 酚氯仿高真空绝缘硅脂粗提质粒 | 第37页 |
| 2.1.2.8 质粒DNA纯化 | 第37-38页 |
| 2.1.2.9 质粒DNA PCR鉴定 | 第38页 |
| 2.1.2.10 质粒DNA测序 | 第38-39页 |
| 2.1.2.11 病毒的核苷酸序列与氨基酸序列分析 | 第39-40页 |
| 2.1.3 结果 | 第40-60页 |
| 2.1.3.1 病毒RNA的RT-PCR产物电泳鉴定图 | 第40-41页 |
| 2.1.3.2 T载体克隆质粒DNA试剂盒纯化电泳鉴定图 | 第41页 |
| 2.1.3.3 质粒DNAPCR鉴定电泳图 | 第41页 |
| 2.1.3.4 病毒全基因组序列测定结果与各基因的分子遗传衍化分析 | 第41-60页 |
| 2.1.4 讨论 | 第60-66页 |
| 2.2 实验二 A/Duck/Shanghai/8/01(H5N1)禽流感病毒对鸡的致病性试验 | 第66-70页 |
| 2.2.1 材料 | 第66页 |
| 2.2.1.1 病毒 | 第66页 |
| 2.2.1.2 SPF鸡和鸡胚 | 第66页 |
| 2.2.2 方法 | 第66-67页 |
| 2.2.2.1 病毒的鸡胚半数感染量(EID50)的测定试验 | 第66页 |
| 2.2.2.2 病毒对鸡的静脉接种致病指数(IVPI)的测定试验 | 第66页 |
| 2.2.2.3 病毒对鸡的鼻腔感染试验 | 第66页 |
| 2.2.2.4 病毒对鸡的组织嗜性试验 | 第66-67页 |
| 2.2.3 结果 | 第67-69页 |
| 2.2.3.1 病毒EID50测定结果 | 第67页 |
| 2.2.3.2 病毒对鸡的IVPI测定和鼻腔感染试验结果 | 第67-68页 |
| 2.2.3.3 病毒对鸡的组织嗜性试验结果 | 第68-69页 |
| 2.2.4 讨论 | 第69-70页 |
| 2.3 实验三 A/Duck/Shanghai/8/01(H5N1)禽流感病毒对小鼠的致病性试验 | 第70-77页 |
| 2.3.1 材料 | 第70页 |
| 2.3.1.1 病毒 | 第70页 |
| 2.3.1.2 实验动物 | 第70页 |
| 2.3.2 方法 | 第70页 |
| 2.3.2.1 病毒对小鼠的致病性试验 | 第70页 |
| 2.3.2.2 病毒对小鼠的组织嗜性实验 | 第70页 |
| 2.3.3 结果 | 第70-75页 |
| 2.3.4 讨论 | 第75-77页 |
| 2.4 实验四 A/Duck/Shanghai/8/01禽流感病毒感染性克隆质粒构建及重组病毒的救获 | 第77-85页 |
| 2.4.1 材料 | 第77页 |
| 2.4.1.1 病毒 | 第77页 |
| 2.4.1.2 SPF鸡胚 | 第77页 |
| 2.4.1.3 主要试剂 | 第77页 |
| 2.4.1.4 引物 | 第77页 |
| 2.4.2 方法 | 第77-81页 |
| 2.4.2.1 病毒RNA的提取 | 第77页 |
| 2.4.2.2 病毒RNA的RT-PCR | 第77-78页 |
| 2.4.2.3 PCR产物的回收和纯化 | 第78页 |
| 2.4.2.4 回收目的DNA片段的处理 | 第78-79页 |
| 2.4.2.5 反向遗传载体pBD的处理 | 第79页 |
| 2.4.2.6 目的基因DNA片段与的连接和转化 | 第79页 |
| 2.4.2.7 阳性克隆质粒的纯化和鉴定 | 第79页 |
| 2.4.2.8 转染用质粒DNA的提取与纯化 | 第79-80页 |
| 2.4.2.9 重组病毒的救获及救获病毒的鉴定 | 第80-81页 |
| 2.4.3 结果 | 第81-83页 |
| 2.4.4 讨论 | 第83-85页 |
| 3 结论 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 附录 | 第97-110页 |
| 作者简介 | 第110页 |
