| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词 | 第11-14页 |
| 第一章 肿瘤靶向基因病毒治疗概述 | 第14-31页 |
| ·前言 | 第14-16页 |
| ·溶瘤腺病毒的发展与研究概述 | 第16-31页 |
| ·腺病毒的结构特点及应用优势和分类 | 第16-18页 |
| ·肿瘤特异性增殖腺病毒的常用构建策略 | 第18-19页 |
| ·肿瘤靶向基因-病毒治疗的特点 | 第19-20页 |
| ·人甲胎蛋白（human alpha-fetoprotein，hAFP）启动子和SV40 增强子 | 第20-31页 |
| ·hAFP 启动子 | 第20-22页 |
| ·SV40 增强子 | 第22页 |
| ·SV40 Enhancer-AFP Promoter | 第22页 |
| ·治疗基因Apoptin | 第22-31页 |
| 第二章 AFP 介导的肿瘤特异性增殖腺病毒携带Apoptin 基因治疗癌症的研究 | 第31-72页 |
| ·实验材料 | 第31-34页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要菌株与质粒 | 第31页 |
| ·腺病毒 | 第31页 |
| ·细胞株 | 第31-32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32-33页 |
| ·抗体 | 第33-34页 |
| ·引物的合成与序列 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-55页 |
| ·分子克隆部分：携带Apoptin 的pAd·eAFP-E1A- E1B_((△55)) –Apoptin 载体的构建 | 第34-41页 |
| ·Apoptin 分子克隆 | 第38-41页 |
| ·病毒构建部分：Ad·eAFP-E1A- E1B_((△55)) -Apoptin 的包装、小扩、鉴定、纯化、大量扩增及病毒滴度的测定 | 第41-47页 |
| ·重组腺病毒Ad·eAFP-E1A- E1B_((△55)) –Apoptin 的包装 | 第41-43页 |
| ·重组病毒的小量扩增 | 第43页 |
| ·重组病毒Ad·eAFP-E1A- E1B_((△55))-Apoptin 的鉴定 | 第43-44页 |
| ·病毒Ad·eAFP-E1A- E1B_((△55))-Apoptin 的纯化 | 第44页 |
| ·病毒的大量制备 | 第44-45页 |
| ·重组病毒的滴度测定 | 第45-47页 |
| ·溶瘤腺病毒Ad·eAFP-E1A-E1B_((△55)) -Apoptin 体外抗瘤效果评价 | 第47-52页 |
| ·MTT 法检测肿瘤细胞存活率 | 第47页 |
| ·细胞病变效应实验（CPE） | 第47-48页 |
| ·Hoechst 33342 染色观察细胞凋亡 | 第48页 |
| ·Western Blot | 第48-52页 |
| ·Reverse-transcripted PCR检测在肝癌细胞中Apoptin基因的表达情况 | 第52页 |
| ·溶瘤腺病毒体内抗瘤效果评价 | 第52-55页 |
| ·肝癌Huh-7 细胞株的荷瘤裸鼠模型的实验及瘤内注射 | 第52-53页 |
| ·肿瘤抑制曲线 | 第53页 |
| ·给药肿瘤组织的免疫组化实验及TUNEL 实验 | 第53-55页 |
| ·统计学分析 | 第55页 |
| ·实验结果 | 第55-70页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第55-59页 |
| ·质粒peAFP-E1A-E1B_((△55))-HCMV-polyA 鉴定 | 第55-56页 |
| ·peAFP-E1A-E1B_((△55)) -Apoptin SalI 酶切鉴定、EcoRI、XhoI 双切鉴定正反向 | 第56-57页 |
| ·腺病毒的穿梭质粒peAFP-E1A-E1B_((△55))–Apoptin 与pBHGE3 共转染 HEK293 细胞，包装出重组腺病毒后挑空斑纯化 | 第57-58页 |
| ·病毒大扩之后鉴定 | 第58-59页 |
| ·MTT 法检测溶瘤腺病毒Ad·eAFP-E1A-E1B_((△55))-Apoptin 对肝癌细胞的体外杀伤效果 | 第59-63页 |
| ·细胞病变效应分析溶瘤腺病毒 Ad·eAFP-E1A-E1B_((△55))-Apoptin 对肿瘤细胞的毒性 | 第63-64页 |
| ·凋亡细胞的染色实验 | 第64-65页 |
| ·Western Blot 检测细胞内源蛋白表达 | 第65-67页 |
| ·肿瘤细胞内Apoptin 基因表达量 | 第67-68页 |
| ·Ad·eAFP-E1A-E1B_((△55))-Apoptin 能有效抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长 | 第68-69页 |
| ·瘤体病理学检测 | 第69-70页 |
| ·裸鼠的血常规及肝功能检测 | 第70页 |
| ·讨论与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
| 硕士期间发表文章 | 第78页 |
