| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 文献综述 | 第8-15页 |
| 1.1 蛋白酶抑制剂简述 | 第8页 |
| 1.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂的分类 | 第8-10页 |
| 1.2.1 非经典类丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第8页 |
| 1.2.2 经典类丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第8-10页 |
| 1.2.2.1 Kazal型家族 | 第9页 |
| 1.2.2.2 Kunitz型家族 | 第9页 |
| 1.2.2.3 Bowman-Birk型家族 | 第9-10页 |
| 1.2.2.4 PI-I和PI-II家族 | 第10页 |
| 1.2.2.5 Serpin类丝氨白酶抑制剂 | 第10页 |
| 1.3 昆虫免疫系统 | 第10-12页 |
| 1.3.1 酚氧化酶(PO)级联介导的昆虫黑化反应 | 第11页 |
| 1.3.2 抗菌肽诱导合成表达的相关信号通路 | 第11-12页 |
| 1.4 昆虫中serpin的研究现状 | 第12-15页 |
| 2 引言 | 第15-18页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第15页 |
| 2.2 主要研究内容 | 第15-17页 |
| 2.2.1 家蚕Bmserpin-15 的原核表达及多克隆抗体制备 | 第15-16页 |
| 2.2.2 家蚕Bmserpin-15 组织表达分布 | 第16页 |
| 2.2.3 家蚕Bmserpin-15 在脂肪体和血淋巴中的诱导表达模式 | 第16页 |
| 2.2.4 Bmserpin-15 蛋白对家蚕血淋巴PPO激活及PO活性的影响 | 第16页 |
| 2.2.5 Bmserpin-15 蛋白对细菌诱导的AMPs表达的影响 | 第16-17页 |
| 2.3 技术路线 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-32页 |
| 3.1 实验材料 | 第18页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第18-21页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第18-19页 |
| 3.2.2 主要生化试剂 | 第19页 |
| 3.2.3 主要溶液的配置 | 第19-21页 |
| 3.3 实验方法 | 第21-32页 |
| 3.3.1 家蚕饲养 | 第21页 |
| 3.3.2 家蚕总RNA的提取 | 第21页 |
| 3.3.3 提取总RNA质量的检测 | 第21-22页 |
| 3.3.4 家蚕Bmserpin-15 基因的克隆 | 第22-25页 |
| 3.3.4.1 总RNA的DNase消化 | 第22页 |
| 3.3.4.2 第一链cDNA的合成 | 第22页 |
| 3.3.4.3 数据库和序列分析 | 第22-23页 |
| 3.3.4.4 引物设计和PCR扩增 | 第23-24页 |
| 3.3.4.5 PCR扩增后目的产物的纯化 | 第24页 |
| 3.3.4.6 目的片段与pMD19-T(simple)连接和转化 | 第24-25页 |
| 3.3.5 家蚕Bmserpin-15 基因的原核表达 | 第25-26页 |
| 3.3.5.1 质粒抽提 | 第25页 |
| 3.3.5.2 目的片段和pET-28a(+)双酶切及连接 | 第25-26页 |
| 3.3.5.3 重组蛋白的诱导 | 第26页 |
| 3.3.6 重组蛋白的检测 | 第26-27页 |
| 3.3.6.1 SDS-PAGE电泳检测 | 第26-27页 |
| 3.3.6.2 Western blot检测 | 第27页 |
| 3.3.7 重组蛋白的纯化及多克隆抗体制备 | 第27-29页 |
| 3.3.7.1 重组蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| 3.3.7.2 蛋白定量 | 第28页 |
| 3.3.7.3 多克隆抗体制备 | 第28-29页 |
| 3.3.8 实时定量PCR | 第29页 |
| 3.3.9 组织中总蛋白的提取 | 第29页 |
| 3.3.10 组织表达分布 | 第29-30页 |
| 3.3.11 免疫刺激对Bmserpin-15 表达的影响 | 第30页 |
| 3.3.12 Bmserpin-15 蛋白对PPO激活及PO活性的影响 | 第30-31页 |
| 3.3.12.1 血淋巴的筛选 | 第30-31页 |
| 3.3.12.2 Bmserpin-15 蛋白对家蚕血淋巴PPO激活的影响 | 第31页 |
| 3.3.12.3 Bmserpin-15 蛋白对家蚕血淋巴PO活性的影响 | 第31页 |
| 3.3.13 Bmserpin-15 蛋白对细菌诱导的AMPs表达的影响 | 第31页 |
| 3.3.14 数据分析 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-42页 |
| 4.1 家蚕Bmserpin-15 基因的序列分析 | 第32页 |
| 4.2 家蚕Bmserpin-15 基因的克隆 | 第32-33页 |
| 4.3 家蚕Bmserpin-15 重组表达载体的双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 4.4 家蚕Bmserpin-15 蛋白表达的SDS-PAGE和Western Blot分析 | 第34-35页 |
| 4.5 家蚕Bmserpin-15 蛋白纯化 | 第35-36页 |
| 4.6 家蚕Bmserpin-15 组织表达分布 | 第36-37页 |
| 4.7 家蚕Bmserpin-15 在脂肪体和血淋巴中的诱导表达模式 | 第37-39页 |
| 4.8 Bmserpin-15 蛋白对家蚕血淋巴PPO激活及PO活性的影响 | 第39-40页 |
| 4.9 Bmserpin-15 蛋白对细菌诱导的AMPs表达的影响 | 第40-42页 |
| 5 讨论 | 第42-44页 |
| 6 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 个人简介 | 第55页 |
| 在研期间发表论文 | 第55页 |
