| 中文摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 插图和附表清单 | 第13-14页 |
| 缩略词 | 第14-15页 |
| 第一篇 肠道病毒 71 型与人类共同抗原的鉴定及其对神经系统潜在致病作用的研究 | 第15-59页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 手足口病概览 | 第15-17页 |
| 1.2 病毒学 | 第17页 |
| 1.3 病毒的致病机理 | 第17-19页 |
| 1.4 分子流行病学 | 第19-21页 |
| 1.5 机体对病毒的免疫反应及免疫病理 | 第21-25页 |
| 1.5.1 固有免疫反应 | 第22-24页 |
| 1.5.2 抗体反应 | 第24-25页 |
| 1.5.3 T 细胞免疫反应 | 第25页 |
| 1.6 本研究要解决的问题、实验思路及意义 | 第25-27页 |
| 第二章 材料及方法 | 第27-41页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 常用化学药品 | 第27页 |
| 2.1.2 抗体和抗原 | 第27-28页 |
| 2.1.3 载体及细胞 | 第28页 |
| 2.1.4 其它试剂 | 第28页 |
| 2.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-41页 |
| 2.3.1 病毒蛋白氨基酸序列与人体蛋白共同抗原表位的扫描 | 第29页 |
| 2.3.2 共同表位在病毒颗粒中位置的确定 | 第29页 |
| 2.3.3 共同表位抗原肽的合成 | 第29页 |
| 2.3.4 共同表位单克隆抗体的制备 | 第29-30页 |
| 2.3.5 MED25 真核表达质粒的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.5.1 MED25 基因的 PCR 扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.5.2 PCR 产物和质粒的酶切和连接 | 第31页 |
| 2.3.5.3 连接产物的转化与酶切鉴定 | 第31页 |
| 2.3.6 MED25 的真核表达和鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.7 MED25 与 2H2 和 MED25 多克隆抗体的免疫荧光共定位实验 | 第32-33页 |
| 2.3.8 MED25 截短蛋白（241-1080 bp）原核表达质粒的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.9 MED25 截短蛋白的原核表达 | 第34页 |
| 2.3.10 MED25 截短蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.11 MED25 截短蛋白与 2H2 单抗的 ELISA 试验及 ELISA 抑制试验 | 第35-36页 |
| 2.3.12 MED25 截短蛋白与 2H2 之间亲和常数的测定 | 第36页 |
| 2.3.13 EV 71 VLP 和 MED25 兔高免血清的制备 | 第36-37页 |
| 2.3.14 EV 71 VLP 和 MED25 免疫血清以及 EV71 感染人血清中共同抗体的检测 | 第37页 |
| 2.3.15 小鼠脑组织的免疫组化 | 第37-39页 |
| 2.3.16 小动物活体成像技术检测抗共同抗原的抗体在体内的分部 | 第39-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-53页 |
| 3.1 EV71 VP1 蛋白与人类脑组织蛋白存在共同表位 | 第41页 |
| 3.2 共同表位位于病毒颗粒外表面峡谷斜坡上 | 第41-42页 |
| 3.3 单克隆抗体 2H2 的纯化及其与共同表位抗原肽和 EV71 VP1 的反应性 | 第42-43页 |
| 3.4 真核细胞表达质粒 pcDNA3.1-MED25XXH 构建 | 第43-44页 |
| 3.5 MED25-His 真核细胞内的表达和鉴定 | 第44-45页 |
| 3.6 MED25 蛋白的 2H2 和抗 MED25 抗体免疫荧光共定位 | 第45页 |
| 3.7 MED25 截短蛋白原核表达质粒 pET28a-MJDEXH 的构建 | 第45-46页 |
| 3.8 MED25 截短蛋白的表达与纯化 | 第46-47页 |
| 3.9 MED25 截短蛋白可有效地抑制 2H2 与 VLP 的结合反应 | 第47-48页 |
| 3.10 MED25 与 2H2 的亲和常数 | 第48页 |
| 3.11 MED25 和 VLP 高免血清以及 EV71 感染人血清中存在高水平的抗共同抗原的抗体 | 第48-49页 |
| 3.12 小鼠脑组织免疫组化 | 第49-50页 |
| 3.13 2H2 在体内与小鼠脑组织间的反应性 | 第50-53页 |
| 第四章 讨论 | 第53-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-59页 |
| 第二篇 高灵敏性核酸酶联免疫荧光探针试验的建立 | 第59-85页 |
| 第一章 绪论 | 第59-64页 |
| 1.1 ELISA 方法的背景与现状 | 第59-63页 |
| 1.2 本研究目的、创新性及意义 | 第63-64页 |
| 第二章 材料及方法 | 第64-71页 |
| 2.1 材料 | 第64-65页 |
| 2.1.1 缓冲液 | 第64页 |
| 2.1.2 试剂 | 第64页 |
| 2.1.3 仪器 | 第64-65页 |
| 2.2 方法 | 第65-71页 |
| 2.2.1 核酸酶活性评估 | 第65页 |
| 2.2.2 酶-底物反应灵敏性测定 | 第65-66页 |
| 2.2.3 Turbo 核酸酶的生物素化及生物素化后活性鉴定 | 第66页 |
| 2.2.4 核酸酶联免疫荧光探针试验 | 第66-67页 |
| 2.2.5 NP-SA、bio-TN、荧光探针的最适工作浓度和纳米颗粒粒径的优化 | 第67页 |
| 2.2.6 NP-SA 和荧光探针底物信号放大效应的鉴定 | 第67-68页 |
| 2.2.7 灵敏性、特异性和重复性检测 | 第68页 |
| 2.2.8 NLFOA 与 ELISA 方法的灵敏性比较 | 第68页 |
| 2.2.9 NLFOA 与 ELISA 两种方法信噪比（S/N）的比较 | 第68-69页 |
| 2.2.10 统计方法 | 第69-71页 |
| 第三章 实验结果 | 第71-79页 |
| 3.1 标记酶的选择 | 第71-72页 |
| 3.2 常用集中酶-底物系统和 TurboNclease-荧光探针系统的敏感性检测 | 第72-73页 |
| 3.3 NP-SA、bio-TN 和荧光探针的最适工作浓度 | 第73-74页 |
| 3.4 NP-SA 和荧光探针的信号放大效应 | 第74-75页 |
| 3.5 NLFOA 与 ELISA 对 p24 的检测灵敏性比较 | 第75-76页 |
| 3.6 NLFOA 的特异性和重复性 | 第76-78页 |
| 3.7 NLFOA 的信噪比（S/N） | 第78-79页 |
| 第四章 讨论 | 第79-83页 |
| 第五章 结论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-107页 |
| 附录 | 第107-112页 |
| 作者简历 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
