| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第1章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 microRNA研究现状 | 第12-22页 |
| 1.1.1 miRNA的概念及特征 | 第12-13页 |
| 1.1.2 miRNA的加工过程 | 第13-15页 |
| 1.1.3 miRNA的作用机制 | 第15页 |
| 1.1.4 miRNA的表达 | 第15-16页 |
| 1.1.5 miRNA,siRNA及其RNAi | 第16-19页 |
| 1.1.6 miRNA的研究策略 | 第19-21页 |
| 1.1.7 miRNA的功能 | 第21-22页 |
| 1.2 立题背景 | 第22-24页 |
| 1.2.1 miR-505与mTOR信号通路 | 第22-23页 |
| 1.2.2 miRNA过表达载体 | 第23-24页 |
| 1.3 研究内容 | 第24-25页 |
| 1.4 研究意义 | 第25-26页 |
| 第2章 材料与方法 | 第26-48页 |
| 2.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 生物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 实验仪器与试剂 | 第26-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-47页 |
| 2.2.1 miR-505慢病毒载体的构建及鉴定 | 第28-38页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第38-40页 |
| 2.2.3 脂质体法转染细胞 | 第40-41页 |
| 2.2.4 流式细胞仪检测细胞转染效率 | 第41页 |
| 2.2.5 细胞总RNA的抽提及定量 | 第41-42页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第42-44页 |
| 2.2.7 蛋白质抽提及蛋白质印迹法 | 第44-47页 |
| 2.3 数据分析 | 第47-48页 |
| 第3章 结果与分析 | 第48-70页 |
| 3.1 质粒的构建及鉴定 | 第48-55页 |
| 3.1.1 PCR扩增miR-505 shRNA基因 | 第48页 |
| 3.1.2 菌落PCR鉴定重组质粒FUGW-miR-505、Fsy-miR-505 | 第48-52页 |
| 3.1.3 BamHI酶切鉴定FUGW-miR-505、Fsy-miR-505 | 第52-53页 |
| 3.1.4 DNA测序鉴定质粒FUGW-miR-505、Fsy-miR-505 | 第53-55页 |
| 3.2 脂质体转染细胞 | 第55-58页 |
| 3.2.1 不同质粒转染HEK 293T细胞 | 第55-57页 |
| 3.2.2 不同质粒转染原代培养的神经元细胞 | 第57-58页 |
| 3.3 流式细胞技术检测转染效率 | 第58-61页 |
| 3.4 细胞中miR-505的检测 | 第61-68页 |
| 3.4.1 不同时间点HEK 293T细胞中miR-505的检测 | 第61-65页 |
| 3.4.2 不同细胞中miR-505的检测 | 第65-68页 |
| 3.5 Western Blot鉴定ASF/SF2 | 第68-70页 |
| 第4章 讨论 | 第70-72页 |
| 4.1 miR-505慢病毒重组载体的构建 | 第70页 |
| 4.2 脂质体转染 | 第70-71页 |
| 4.3 基因转录表达水平分析 | 第71-72页 |
| 第5章 结论与展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 课题来源 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间学术论文目录 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
