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肝癌干细胞相关功能性基因的研究

英文缩略词第10-11页
中文摘要第11-14页
英文摘要第14-17页
前言第18-21页
一、材料与方法第21-48页
    (一) 实验料料第21-29页
        1. 细胞第21页
        2. 免疫组织化学芯片第21页
        3. 动物第21-22页
        4. 主要试剂第22-26页
        5. 主要仪器与设备第26-27页
        6. 计算机分析软件第27页
        7. 主要试剂及其配方第27-29页
    (二) 实验方法第29-48页
        1. 肝癌细胞的培养第29页
        2. 肝癌细胞的无血清悬浮培养第29页
        3. 抗体纯化第29-32页
        4. 流式细胞荧光第32-33页
        5. 肝癌干细胞PKH26染色第33页
        6. 细胞免疫荧光第33-35页
        7. 免疫组织化学第35-36页
        8. 肝癌干细胞体外生物学特征的分析第36-37页
        9. 抗肝癌干细胞单抗对肝癌于细胞生物学功能影响的分析第37-39页
        10. H基因小分子抑制剂对肝癌干细胞生物学功能影响的分析第39-40页
        11. 瞬时敲降基因H对肝癌于细胞生物学功能影响的分析第40-44页
        12. 动物实验第44-45页
        13. Western-Blotting及斑点杂交实验第45-46页
        14. 基因表达谱芯片制备第46-47页
        15. 蛋白表达谱芯片制备第47页
        16. 统计学分析第47-48页
二、实验结果第48-87页
    (一) 肝癌干细胞相关功能性抗原基因的鉴定第48-51页
        1. 免疫共沉淀鉴定11C9抗原基因第48-49页
        2. 细胞免疫荧光共定位鉴定11C9抗原基因第49-50页
        3. H基因敲降验证11C9抗原基因第50-51页
    (二) 肝癌干细胞相关功能性H基因在肝癌组织中的表达与临床相关性分析第51-55页
        1. H蛋白在人肝癌组织中的表达第51页
        2. H蛋白在肝脏炎症及肝硬化中的表达第51-52页
        3. H蛋白与肝癌分期、分级相关性的分析第52-53页
        4. H蛋白与肝癌转移相关性的分析第53-54页
        5. H蛋白与肝癌预后及生存期的相关性分析第54-55页
    (三) 肝癌干细胞相关功能性抗原H蛋白分子表型的鉴定第55-61页
        1. MHCC97L亲本、sphere细胞及CD90自我更新的研究第55页
        2. BEL7402亲本、sphere细胞及ESA标志物自我更新的研究第55-56页
        3. H蛋白在肝癌细胞系MHCC97L、BEL7402中的表达第56-57页
        4. CD90标志物在肝癌细胞系MHCC97L中的表达第57-58页
        5. ESA标志物在肝癌细胞系BEL7402中的表达第58-59页
        6. H蛋白/基因与肝癌干细胞标志物CD90、ESA共表达的研究第59页
        7. H蛋白/基因与PKH26共染的研究第59-60页
        8. H蛋白/基因与肝癌干细胞标志物CD90共定位的研究第60-61页
    (四) H蛋白/基因干性特征的研究第61-68页
        1. H蛋白/基因阳性细胞干性特征的研究第61-65页
            1.1 蛋白/基因阳性细胞侵袭特性的研究第61-62页
            1.2 H蛋白/基因阳性细胞自我更新特性的研究第62-63页
            1.3 H蛋白/基因阳性细胞耐药特性的研究第63-64页
            1.4 H蛋白/基因阳性细胞体内致瘤能力研究第64-65页
        2. H蛋白/基因在肝癌干细胞中作用的研究第65-68页
            2.1 H蛋白/基因对肝癌干细胞侵袭作用的究第65-66页
            2.2 H蛋白/基因对肝癌干细胞自我更新作用的研究第66-67页
            2.3 H蛋白/基因对肝癌干细胞耐药作用的第67-68页
    (五) 肝癌干细胞相关功能性H蛋白/基因体外功能研究第68-80页
        1. siRNA瞬时敲降H基因对肝癌干细胞体外功能的影响第68-72页
            1.1 H基因敲降效率的检测第68-69页
            1.2 H基因敲降对肝癌干细胞自我更新能力的影响第69-70页
            1.3 H基因敲降对肝癌干细胞侵袭能力的影响第70-71页
            1.4 H基因敲降对肝癌干细胞耐药能力的影响第71-72页
        2. 小分子抑制剂干预H蛋白/基因对肝癌干细胞体外功能的影响第72-75页
            2.1 小分子抑制剂干预对人肝癌干细胞自我更新能力的影响第72-73页
            2.2 小分子抑制剂干预对人肝癌干细胞侵袭能力的影响第73-74页
            2.3 小分子抑制剂干预对人肝癌干细胞耐药能力的影响第74-75页
        3. 功能性抗体11C9干预H蛋白/基因对肝癌干细胞体外功能的影响第75-78页
            3.1 功能性单抗11C9对人肝癌干细胞自我更新能力的影响第75-76页
            3.2 功能性单抗11C9对人肝癌干细胞侵袭能力的影响第76-78页
            3.3 功能性单抗11C9对人肝癌干细胞耐药能力的影响第78页
        4. H蛋白/基因对肝癌干细胞标志物CD90表达的影响第78-79页
        5. siRNA瞬时敲降H基因对肝癌干细胞CD90表达的影响第79页
        6. 肝癌干细胞相关功能性H基因对亲本细胞增殖的影响第79-80页
    (六) 肝癌干细胞相关功能性H基因作用分子机制的研究第80-87页
        1. H基因表达谱差异性研究第80-82页
            1.1 H基因表达阳性与表达阴性的肝癌干细胞基因表达谱分析第80-81页
            1.2 11C9抗体干预H基因表达阳性肝癌干细胞基因表达谱分析第81-82页
        2. H基因的WNT信号通路研究第82-87页
            2.1 小分子抑制剂对H基因表达的影响第83-84页
            2.2 小分子抑制剂对磷酸化GSK-3β表达的影响第84页
            2.3 小分子抑制剂对β-catenin表达的影响第84-85页
            2.4 小分子抑制剂对β-catenin磷酸化的影响第85-87页
三、讨论第87-96页
小结第96-98页
参考文献第98-103页
文献综述第103-123页
    参考文献第114-123页
致谢第123-124页
附录第124-125页
个人简历第125-126页
基金资助情况第126-127页

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