| 英文缩略词 | 第10-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 前言 | 第18-21页 |
| 一、材料与方法 | 第21-48页 |
| (一) 实验料料 | 第21-29页 |
| 1. 细胞 | 第21页 |
| 2. 免疫组织化学芯片 | 第21页 |
| 3. 动物 | 第21-22页 |
| 4. 主要试剂 | 第22-26页 |
| 5. 主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| 6. 计算机分析软件 | 第27页 |
| 7. 主要试剂及其配方 | 第27-29页 |
| (二) 实验方法 | 第29-48页 |
| 1. 肝癌细胞的培养 | 第29页 |
| 2. 肝癌细胞的无血清悬浮培养 | 第29页 |
| 3. 抗体纯化 | 第29-32页 |
| 4. 流式细胞荧光 | 第32-33页 |
| 5. 肝癌干细胞PKH26染色 | 第33页 |
| 6. 细胞免疫荧光 | 第33-35页 |
| 7. 免疫组织化学 | 第35-36页 |
| 8. 肝癌干细胞体外生物学特征的分析 | 第36-37页 |
| 9. 抗肝癌干细胞单抗对肝癌于细胞生物学功能影响的分析 | 第37-39页 |
| 10. H基因小分子抑制剂对肝癌干细胞生物学功能影响的分析 | 第39-40页 |
| 11. 瞬时敲降基因H对肝癌于细胞生物学功能影响的分析 | 第40-44页 |
| 12. 动物实验 | 第44-45页 |
| 13. Western-Blotting及斑点杂交实验 | 第45-46页 |
| 14. 基因表达谱芯片制备 | 第46-47页 |
| 15. 蛋白表达谱芯片制备 | 第47页 |
| 16. 统计学分析 | 第47-48页 |
| 二、实验结果 | 第48-87页 |
| (一) 肝癌干细胞相关功能性抗原基因的鉴定 | 第48-51页 |
| 1. 免疫共沉淀鉴定11C9抗原基因 | 第48-49页 |
| 2. 细胞免疫荧光共定位鉴定11C9抗原基因 | 第49-50页 |
| 3. H基因敲降验证11C9抗原基因 | 第50-51页 |
| (二) 肝癌干细胞相关功能性H基因在肝癌组织中的表达与临床相关性分析 | 第51-55页 |
| 1. H蛋白在人肝癌组织中的表达 | 第51页 |
| 2. H蛋白在肝脏炎症及肝硬化中的表达 | 第51-52页 |
| 3. H蛋白与肝癌分期、分级相关性的分析 | 第52-53页 |
| 4. H蛋白与肝癌转移相关性的分析 | 第53-54页 |
| 5. H蛋白与肝癌预后及生存期的相关性分析 | 第54-55页 |
| (三) 肝癌干细胞相关功能性抗原H蛋白分子表型的鉴定 | 第55-61页 |
| 1. MHCC97L亲本、sphere细胞及CD90自我更新的研究 | 第55页 |
| 2. BEL7402亲本、sphere细胞及ESA标志物自我更新的研究 | 第55-56页 |
| 3. H蛋白在肝癌细胞系MHCC97L、BEL7402中的表达 | 第56-57页 |
| 4. CD90标志物在肝癌细胞系MHCC97L中的表达 | 第57-58页 |
| 5. ESA标志物在肝癌细胞系BEL7402中的表达 | 第58-59页 |
| 6. H蛋白/基因与肝癌干细胞标志物CD90、ESA共表达的研究 | 第59页 |
| 7. H蛋白/基因与PKH26共染的研究 | 第59-60页 |
| 8. H蛋白/基因与肝癌干细胞标志物CD90共定位的研究 | 第60-61页 |
| (四) H蛋白/基因干性特征的研究 | 第61-68页 |
| 1. H蛋白/基因阳性细胞干性特征的研究 | 第61-65页 |
| 1.1 蛋白/基因阳性细胞侵袭特性的研究 | 第61-62页 |
| 1.2 H蛋白/基因阳性细胞自我更新特性的研究 | 第62-63页 |
| 1.3 H蛋白/基因阳性细胞耐药特性的研究 | 第63-64页 |
| 1.4 H蛋白/基因阳性细胞体内致瘤能力研究 | 第64-65页 |
| 2. H蛋白/基因在肝癌干细胞中作用的研究 | 第65-68页 |
| 2.1 H蛋白/基因对肝癌干细胞侵袭作用的究 | 第65-66页 |
| 2.2 H蛋白/基因对肝癌干细胞自我更新作用的研究 | 第66-67页 |
| 2.3 H蛋白/基因对肝癌干细胞耐药作用的 | 第67-68页 |
| (五) 肝癌干细胞相关功能性H蛋白/基因体外功能研究 | 第68-80页 |
| 1. siRNA瞬时敲降H基因对肝癌干细胞体外功能的影响 | 第68-72页 |
| 1.1 H基因敲降效率的检测 | 第68-69页 |
| 1.2 H基因敲降对肝癌干细胞自我更新能力的影响 | 第69-70页 |
| 1.3 H基因敲降对肝癌干细胞侵袭能力的影响 | 第70-71页 |
| 1.4 H基因敲降对肝癌干细胞耐药能力的影响 | 第71-72页 |
| 2. 小分子抑制剂干预H蛋白/基因对肝癌干细胞体外功能的影响 | 第72-75页 |
| 2.1 小分子抑制剂干预对人肝癌干细胞自我更新能力的影响 | 第72-73页 |
| 2.2 小分子抑制剂干预对人肝癌干细胞侵袭能力的影响 | 第73-74页 |
| 2.3 小分子抑制剂干预对人肝癌干细胞耐药能力的影响 | 第74-75页 |
| 3. 功能性抗体11C9干预H蛋白/基因对肝癌干细胞体外功能的影响 | 第75-78页 |
| 3.1 功能性单抗11C9对人肝癌干细胞自我更新能力的影响 | 第75-76页 |
| 3.2 功能性单抗11C9对人肝癌干细胞侵袭能力的影响 | 第76-78页 |
| 3.3 功能性单抗11C9对人肝癌干细胞耐药能力的影响 | 第78页 |
| 4. H蛋白/基因对肝癌干细胞标志物CD90表达的影响 | 第78-79页 |
| 5. siRNA瞬时敲降H基因对肝癌干细胞CD90表达的影响 | 第79页 |
| 6. 肝癌干细胞相关功能性H基因对亲本细胞增殖的影响 | 第79-80页 |
| (六) 肝癌干细胞相关功能性H基因作用分子机制的研究 | 第80-87页 |
| 1. H基因表达谱差异性研究 | 第80-82页 |
| 1.1 H基因表达阳性与表达阴性的肝癌干细胞基因表达谱分析 | 第80-81页 |
| 1.2 11C9抗体干预H基因表达阳性肝癌干细胞基因表达谱分析 | 第81-82页 |
| 2. H基因的WNT信号通路研究 | 第82-87页 |
| 2.1 小分子抑制剂对H基因表达的影响 | 第83-84页 |
| 2.2 小分子抑制剂对磷酸化GSK-3β表达的影响 | 第84页 |
| 2.3 小分子抑制剂对β-catenin表达的影响 | 第84-85页 |
| 2.4 小分子抑制剂对β-catenin磷酸化的影响 | 第85-87页 |
| 三、讨论 | 第87-96页 |
| 小结 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-103页 |
| 文献综述 | 第103-123页 |
| 参考文献 | 第114-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 附录 | 第124-125页 |
| 个人简历 | 第125-126页 |
| 基金资助情况 | 第126-127页 |
