| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第1章 前言 | 第12-38页 |
| 1.1 朊病毒假说及其证实 | 第12-15页 |
| 1.2 Protein X | 第15-16页 |
| 1.3 种间屏障和朊病毒株 | 第16-19页 |
| 1.4 细胞型朊蛋白概述 | 第19-21页 |
| 1.5 细胞型朊蛋白的生理功能 | 第21页 |
| 1.6 朊蛋白与锌离子 | 第21-22页 |
| 1.7 锌离子的生理功能和稳态 | 第22-24页 |
| 1.8 锌离子对细胞凋亡的影响 | 第24-25页 |
| 1.9 锌离子和神经细胞的死亡 | 第25-27页 |
| 1.10 离子和蛋白质聚集 | 第27-33页 |
| 1.11 Prion-like蛋白和神经退行性疾病 | 第33-36页 |
| 1.12 本课题的研究意义 | 第36-38页 |
| 第2章 锌离子对人朊蛋白聚集途径和聚集体结构的影响 | 第38-79页 |
| 2.1 摘要 | 第38页 |
| 2.2 引言 | 第38-39页 |
| 2.3 实验材料和仪器 | 第39-40页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第39页 |
| 2.3.2 主要仪器 | 第39-40页 |
| 2.4 实验方法 | 第40-48页 |
| 2.4.1 朊蛋白的原核表达与复性纯化 | 第40-44页 |
| 2.4.2 ThT荧光法检测纤维生长动力学 | 第44-45页 |
| 2.4.3 Sarcosyl-soluble SDS-PAGE实验 | 第45页 |
| 2.4.4 透射电镜观察聚集样品 | 第45页 |
| 2.4.5 等温滴定量热法测定锌离子和朊蛋白及其突变体的结合 | 第45-46页 |
| 2.4.6 圆二色光谱法测定蛋白质的二级结构 | 第46-47页 |
| 2.4.7 圆二色光谱法测定蛋白质的热稳定性 | 第47页 |
| 2.4.8 傅里叶红外光谱法分析聚集体的二级结构 | 第47-48页 |
| 2.5 实验结果 | 第48-75页 |
| 2.5.1 人野生型朊蛋白及其突变体的分离纯化 | 第48-49页 |
| 2.5.2 ThT荧光法监测锌离子对人野生型朊蛋白及其突变体的聚集动力学的影响 | 第49-52页 |
| 2.5.3 Sarkosyl-soluble SDS-PAGE实验检测锌离子对人野生型朊蛋白及其突变体的聚集动力学的影响 | 第52-54页 |
| 2.5.4 透射电子显微镜观察锌离子对朊蛋白所形成聚集体形态的影响 | 第54-56页 |
| 2.5.5 高分辨率透射电子显微镜观察人野生型朊蛋白的聚集过程 | 第56-58页 |
| 2.5.6 等温滴定量热法研究锌离子和朊蛋白的结合 | 第58-62页 |
| 2.5.7 检测锌离子对朊蛋白及其突变体热稳定性的影响 | 第62-64页 |
| 2.5.8 检测锌离子对朊蛋白及其聚集体的二级结构的影响 | 第64-69页 |
| 2.5.9 蛋白酶K酶解实验检测朊蛋白聚集体的抗酶解能力 | 第69-72页 |
| 2.5.10 ThT-UV同步检测朊蛋白纤维生长动力学 | 第72-75页 |
| 2.6 讨论 | 第75-79页 |
| 第3章 锌离子对细胞水平朊蛋白聚集的影响 | 第79-97页 |
| 3.1 摘要 | 第79页 |
| 3.2 引言 | 第79-80页 |
| 3.3 实验材料和仪器 | 第80页 |
| 3.4 实验方法 | 第80-84页 |
| 3.4.1 相关缓冲液的配方 | 第80-81页 |
| 3.4.2 Western Blot对细胞内可溶于Sarcosyl的朊蛋白的检测 | 第81-82页 |
| 3.4.3 激光共聚焦显微镜观察样品制备 | 第82-83页 |
| 3.4.4 免疫电镜 | 第83-84页 |
| 3.5 实验结果 | 第84-94页 |
| 3.5.1 Western Blot检测细胞内溶于sarcosyl的朊蛋白 | 第84-85页 |
| 3.5.2 Annexin V-FTTC/PI双染观察锌离子对细胞毒性的影响 | 第85-86页 |
| 3.5.3 激光共聚焦显微镜观察细胞中朊蛋白的聚集情况 | 第86-88页 |
| 3.5.4 免疫电镜观察细胞内朊蛋白聚集体的形态 | 第88-89页 |
| 3.5.5 NAC可以保护细胞免受异常锌离子的影响 | 第89-90页 |
| 3.5.6 维生素c对锌离子的细胞毒性没有保护作用 | 第90-91页 |
| 3.5.7 锌离子导致的细胞死亡和朊蛋白聚集关系研究 | 第91-94页 |
| 3.6 讨论 | 第94-97页 |
| 参考文献 | 第97-116页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
