黑曲霉中ras基因的沉默及其对菌丝生长影响的初步研究
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 课题来源 | 第10页 |
| 1.2 研究背景及目的意义 | 第10-11页 |
| 1.3 黑曲霉的研究现状及应用 | 第11-15页 |
| 1.3.1 黑曲霉简介 | 第11页 |
| 1.3.2 黑曲霉生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.3.3 黑曲霉主要应用 | 第12-15页 |
| 1.4 RNA干扰国内外研究现状 | 第15-18页 |
| 1.4.1 RNA干扰原理 | 第16页 |
| 1.4.2 RNA干扰在真菌中的应用 | 第16-18页 |
| 1.5 小G蛋白的研究进展 | 第18-22页 |
| 1.5.1 小G蛋白家族的结构与相关机制 | 第19-20页 |
| 1.5.2 小G蛋白家族的功能 | 第20-21页 |
| 1.5.3 Ras蛋白在真菌中的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.6 课题技术路线及主要研究内容 | 第22-24页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第24-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 实验所用的菌株与质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.2 实验所用的培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.3 实验所用酶和试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 实验试剂配置 | 第26-27页 |
| 2.1.5 引物 | 第27页 |
| 2.1.6 实验中所用的仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-40页 |
| 2.2.1 黑曲霉ras基因片段克隆及鉴定 | 第28-30页 |
| 2.2.2 沉默质粒的构建 | 第30-34页 |
| 2.2.3 黑曲霉 3.316 原生质体的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.4 黑曲霉原生质体的转化 | 第35页 |
| 2.2.5 转化子的筛选与鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.6 黑曲霉RNA的提取及RT-PCR | 第36-37页 |
| 2.2.7 实时定量PCR检测基因表达量 | 第37-38页 |
| 2.2.8 转化子生长速度测定 | 第38页 |
| 2.2.9 转化子产孢观测 | 第38页 |
| 2.2.10 转化子生物量测定 | 第38页 |
| 2.2.11 转化子酶活的测定 | 第38-40页 |
| 第3章 黑曲霉ras基因沉默质粒的构建 | 第40-46页 |
| 3.1 保守区域分析及ras基因克隆 | 第40-43页 |
| 3.1.1 保守区域分析 | 第40页 |
| 3.1.2 ras基因克隆 | 第40-43页 |
| 3.2 沉默质粒pS-ras的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.1 中间载体pS-R的构建及验证 | 第43-44页 |
| 3.2.2 沉默质粒pS-ras的构建及验证 | 第44-45页 |
| 3.3 本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 黑曲霉原生质体转化及转化子筛选鉴定 | 第46-52页 |
| 4.1 黑曲霉对潮霉素B的敏感性实验 | 第46-47页 |
| 4.2 黑曲霉原生质体的制备 | 第47-49页 |
| 4.2.1 菌龄对原生质体形成的影响 | 第47页 |
| 4.2.2 不同裂解酶对原生质体形成的影响 | 第47-48页 |
| 4.2.3 酶解时间对原生质体形成的影响 | 第48-49页 |
| 4.3 黑曲霉原生质体转化 | 第49-50页 |
| 4.4 转化子筛选及鉴定 | 第50-51页 |
| 4.4.1 转化子的保存 | 第50页 |
| 4.4.2 转化子的鉴定 | 第50-51页 |
| 4.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第5章 转化子特性研究 | 第52-59页 |
| 5.1 ras基因的表达差异及分析 | 第52-53页 |
| 5.1.1 半定量PCR检测 | 第52-53页 |
| 5.1.2 实时定量PCR检测沉默效率 | 第53页 |
| 5.2 转化子生长速度的测定 | 第53-54页 |
| 5.3 转化子菌丝形态及产孢情况观察 | 第54-55页 |
| 5.4 转化子生物量测定 | 第55页 |
| 5.5 转化子酶活测定 | 第55-58页 |
| 5.5.1 葡萄糖标准曲线 | 第56页 |
| 5.5.2 β-葡萄糖苷酶酶活测定 | 第56-57页 |
| 5.5.3 内切葡聚糖酶（Cx）测定 | 第57页 |
| 5.5.4 总酸含量测定 | 第57-58页 |
| 5.6 本章小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
