| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词 | 第18-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-39页 |
| 1.1 原癌基因Ras促进肿瘤进展的基本信号通路 | 第20-24页 |
| 1.1.1 Ras激活可以促进细胞增殖 | 第20-21页 |
| 1.1.2 Ras激活可以影响细胞凋亡 | 第21-22页 |
| 1.1.3 Ras激活可以改变细胞代谢 | 第22页 |
| 1.1.4 Ras激活可以重新编码肿瘤细胞的微环境 | 第22-23页 |
| 1.1.5 Ras激活可以使细胞避免免疫应激的过程 | 第23页 |
| 1.1.6 Ras激活可以促进肿瘤的转移 | 第23-24页 |
| 1.2 癌基因诱导的衰老是防止肿瘤发生的天然屏障 | 第24-28页 |
| 1.2.1 癌基因诱导衰老(OIS) | 第24-26页 |
| 1.2.2 Ras诱导衰老的基本信号通路的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.2.2.1 Ras通过依赖p53的通路诱导衰老 | 第26-28页 |
| 1.3 线粒体与癌基因诱导的衰老密切相关 | 第28-31页 |
| 1.3.1 ROS与癌基因诱导的衰老 | 第29页 |
| 1.3.2 PGC1-α是线粒体功能,生物合成以及ROS水平的的重要调控者 | 第29-31页 |
| 1.4 Ras激活的细胞逃逸衰老的基本机制 | 第31-32页 |
| 1.5 抑癌基因p53及p53突变 | 第32-37页 |
| 1.5.1 抑癌基因p53结构与功能 | 第32-34页 |
| 1.5.2 p53突变体与功能性获得假说 | 第34-35页 |
| 1.5.3 p53~(N236S)突变体的发现与功能初探 | 第35-37页 |
| 1.5.4 p53与Ras在肿瘤进展过程的相互作用研究现状 | 第37页 |
| 1.6 课题主要研究内容及意义 | 第37-39页 |
| 第二章 原癌基因H-Ras~(G12V)与p53~(N236S)通过PGC1-α协同作用逃逸Ras诱导衰老的机制 | 第39-78页 |
| 2.1 材料与方法 | 第39-66页 |
| 2.1.1 p53S小鼠基因型的鉴定 | 第39-42页 |
| 2.1.1.1 小鼠尾巴DNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.1.1.2 小鼠p53S基因型鉴定 | 第40-42页 |
| 2.1.2 小鼠MEF细胞的制作 | 第42-45页 |
| 2.1.3 细胞培养 | 第45-48页 |
| 2.1.3.1 细胞复苏 | 第45-46页 |
| 2.1.3.2 细胞传代 | 第46页 |
| 2.1.3.3 细胞冻存 | 第46-47页 |
| 2.1.3.4 收集细胞沉淀 | 第47-48页 |
| 2.1.4 H-RasG12V质粒转染细胞以及稳转细胞的筛选 | 第48-50页 |
| 2.1.4.1 质粒转化感受态细胞 | 第48页 |
| 2.1.4.2 质粒大提 | 第48-49页 |
| 2.1.4.3 质粒转染293T细胞进行病毒包装以及稳转细胞系的筛选 | 第49-50页 |
| 2.1.5 Western blot实验 | 第50-56页 |
| 2.1.5.1 蛋白提取 | 第50-51页 |
| 2.1.5.2 考马斯亮蓝法蛋白定量 | 第51页 |
| 2.1.5.3 聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第51-56页 |
| 2.1.6 流式细胞仪检测细胞ROS水平 | 第56-57页 |
| 2.1.7 免疫荧光实验 | 第57-59页 |
| 2.1.8 核质蛋白提取及Western Blot实验 | 第59-60页 |
| 2.1.9 染色质免疫共沉淀(ChIP)实验 | 第60-66页 |
| 2.2 实验主要仪器 | 第66-67页 |
| 2.3 结果与分析 | 第67-75页 |
| 2.3.1 p53~(S/+) +Ras细胞诱导衰老可能与Ras下游信号通路激活有关 | 第69-71页 |
| 2.3.2 p53S蛋白在逃逸衰老的过程中被激活 | 第71-73页 |
| 2.3.3 与Ras协同时,p53S蛋白的细胞定位有所改变 | 第73-74页 |
| 2.3.4 p53S调控PGC1-α的表达并降低细胞中ROS的水平 | 第74-75页 |
| 2.4 讨论 | 第75-78页 |
| 第三章 原癌基因K-Ras~(G12D)与p53~(N236S)协同促进肺癌发生的小鼠模型构建以及机理初探 | 第78-107页 |
| 3.1 材料与方法 | 第78-91页 |
| 3.1.1 小鼠杂交以及基因型鉴定 | 第78-80页 |
| 3.1.1.1 小鼠杂交 | 第78-79页 |
| 3.1.1.2 K-RasG12D以及p53S小鼠基因型鉴定 | 第79-80页 |
| 3.1.1.3 小鼠MEF细胞的制作 | 第80页 |
| 3.1.2 细胞培养 | 第80-81页 |
| 3.1.2.1 细胞复苏 | 第80-81页 |
| 3.1.2.2 细胞传代,冻存,收集 | 第81页 |
| 3.1.3 AD-Cre腺病毒感染细胞实验 | 第81页 |
| 3.1.4 细胞水平以及组织水平Western blot实验 | 第81-84页 |
| 3.1.5 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第84-85页 |
| 3.1.6 鼻腔滴入法注射AD-Cre病毒以及肺癌的诱导 | 第85-86页 |
| 3.1.7 小鼠组织切片HE染色 | 第86-88页 |
| 3.1.7.1 石蜡包埋 | 第86-87页 |
| 3.1.7.2 石蜡切片的制作 | 第87页 |
| 3.1.7.3 HE染色 | 第87-88页 |
| 3.1.8 小鼠组织切片免疫组化(IHC)实验 | 第88-90页 |
| 3.1.9 TUNEL法原位检测凋亡实验 | 第90-91页 |
| 3.2 实验主要仪器 | 第91-93页 |
| 3.3 结果与分析 | 第93-104页 |
| 3.3.1 AD-Cre病毒成功感染细胞并诱导K-Ras的表达 | 第93-94页 |
| 3.3.2 K-Ras p53~(S/S)+AD-Cre细胞具有增殖,抗凋亡等优势 | 第94-96页 |
| 3.3.3 成功在小鼠肺部诱导K-Ras的表达并引发病变 | 第96-98页 |
| 3.3.4 K-Ras和p53~(S/S)通过削弱损伤应激和抗凋亡来协同促进肿瘤进展 | 第98-104页 |
| 3.4 讨论 | 第104-107页 |
| 第四章 总结与展望 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-117页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第117-118页 |
| 附录B 其他需要说明的内容 | 第118页 |
