| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 线虫的简介 | 第12-14页 |
| 1.1.1 线虫的种类与危害 | 第12页 |
| 1.1.2 秀丽隐杆线虫 | 第12-13页 |
| 1.1.3 植物寄生性线虫 | 第13-14页 |
| 1.2 线虫防治方法研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 线虫致病细菌 | 第14-15页 |
| 1.2.2 食线虫真菌 | 第15-16页 |
| 1.3 丁香假单胞菌 | 第16-20页 |
| 1.3.1 丁香假单胞菌MB03简介 | 第16-17页 |
| 1.3.2 转座子的简介及应用 | 第17页 |
| 1.3.3 转座突变文库的构建 | 第17-19页 |
| 1.3.4 突变株插入位点鉴定 | 第19-20页 |
| 1.4 铜绿假单胞菌 | 第20-21页 |
| 1.4.1 铜绿假单胞菌PA14 | 第20-21页 |
| 1.4.2 铜绿假单胞菌PAO1 | 第21页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-30页 |
| 2.1.0 菌株和质粒 | 第23-25页 |
| 2.1.1 PCR引物 | 第25-26页 |
| 2.1.2 培养基 | 第26页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第26-30页 |
| 2.1.4 线虫 | 第30页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-44页 |
| 2.2.1 突变文库的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.2 目的菌株的筛选 | 第31页 |
| 2.2.3 TALL-PCR | 第31-32页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.5 大肠杆菌质粒提取 | 第33页 |
| 2.2.6 酶切、酶连 | 第33-34页 |
| 2.2.7 PCR扩增产物的NaAc法回收 | 第34页 |
| 2.2.8 感受态的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.9 大肠杆菌的CaCl2法转化及转化子筛选 | 第35-36页 |
| 2.2.10 转化子质粒的快速检测 | 第36页 |
| 2.2.11 重组菌蛋白诱导 | 第36页 |
| 2.2.12 大肠杆菌的诱导表达、亲和纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.13 SDS-PAGE | 第37-38页 |
| 2.2.14 透析目的蛋白 | 第38页 |
| 2.2.15 秀丽隐杆线虫的饲养与同步化 | 第38-39页 |
| 2.2.16 重组菌秀丽隐杆线虫生测试验 | 第39-40页 |
| 2.2.17 纯化蛋白生测试验中LC_(50)值和LT_(50)值的测定 | 第40页 |
| 2.2.18 L1期线虫生长抑制试验 | 第40页 |
| 2.2.19 影响线虫产卵率实验 | 第40-41页 |
| 2.2.20 影响线虫运动性实验 | 第41页 |
| 2.2.21 取食抑制测定 | 第41页 |
| 2.2.22 荧光显微观察 | 第41-42页 |
| 2.2.23 秀丽隐杆线虫的快/慢杀测定 | 第42页 |
| 2.2.24 以南方根结线虫线虫为试虫的生物活性测定 | 第42-44页 |
| 3 结果与讨论 | 第44-67页 |
| 3.1 突变文库中筛选毒性菌株 | 第44-50页 |
| 3.1.1 毒性基因相关蛋白结构与功能预测 | 第44-48页 |
| 3.1.2 毒性基因重组菌的构建 | 第48-50页 |
| 3.2 丁香假单胞菌MB03毒性蛋白纯化及杀虫实验 | 第50-59页 |
| 3.2.1 重组菌株蛋白的诱导与纯化 | 第50-53页 |
| 3.2.2 丁香假单胞菌MB03中纯化蛋白对线虫LC_(50)值测定 | 第53页 |
| 3.2.3 丁香假单胞菌MB03中纯化蛋白对线虫产卵率影响 | 第53-54页 |
| 3.2.4 丁香假单胞菌MB03中纯化蛋白对线虫运动性影响 | 第54-56页 |
| 3.2.5 丁香假单胞菌MB03中纯化蛋白荧光显微实验 | 第56页 |
| 3.2.6 丁香假单胞菌MB03中纯化蛋白对南方根结线虫毒杀作用 | 第56-57页 |
| 3.2.7 丁香假单胞菌MB03中蛋白与线虫作用机制讨论 | 第57-59页 |
| 3.3 铜绿假单胞菌中毒性基因的扩增及重组菌构建 | 第59-62页 |
| 3.3.1 铜绿假单胞菌中毒性基因的筛选 | 第59-60页 |
| 3.3.2 铜绿假单胞菌中毒性基因的扩增及重组质粒构建 | 第60-62页 |
| 3.4 铜绿假单胞菌中毒性蛋白纯化及杀虫实验 | 第62-67页 |
| 3.4.1 铜绿假单胞菌中毒性蛋白的诱导与纯化 | 第62-64页 |
| 3.4.2 铜绿假单胞菌中纯化蛋白对南方根结线虫毒性测定 | 第64-65页 |
| 3.4.3 铜绿假单胞菌中纯化蛋白对南方根结线虫作用机制分析 | 第65-67页 |
| 4 结论与展望 | 第67-69页 |
| 4.1 结论 | 第67-68页 |
| 4.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
