| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| ·前言 | 第10页 |
| ·卵母细胞成熟过程中RNA 的转录 | 第10-11页 |
| ·DDRT-PCR 技术的发展及在胚胎发育生物学中的应用 | 第11-13页 |
| ·Real-Time quantitative PCR 技术的原理及应用 | 第13-15页 |
| ·幼畜超排与成年畜的卵母细胞的差异性研究 | 第15-16页 |
| ·关于CTSB&CTSS 基因的介绍 | 第16页 |
| ·小结 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-30页 |
| ·试验材料 | 第17-20页 |
| ·试验绵羊来源与采样方法 | 第17页 |
| ·主要药品和酶 | 第17-18页 |
| ·试验仪器设备 | 第18-19页 |
| ·试剂配制 | 第19-20页 |
| ·分析工具软件 | 第20页 |
| ·试验方法 | 第20-30页 |
| ·卵母细胞的体外成熟及选择处理和反转录 | 第20-23页 |
| ·单个卵母细胞DDRT-PCR 系统稳定性及重复性分析 | 第23-24页 |
| ·成年绵羊GV&MII 卵母细胞差异表达基因的筛选 | 第24-27页 |
| ·绵羊幼羔超排与成年绵羊MII 期单卵差异表达基因的筛选 | 第27页 |
| ·对成年绵羊GV 期、MII 期及幼羔超排单卵MII 期的共有条带进行测序 | 第27页 |
| ·qPCR 检测卵母细胞成熟过程中CTSB&CTSS mRNA 表达情况 | 第27-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-43页 |
| ·单个卵母细胞的体外成熟及选择处理和反转录cDNA 质量鉴定结果 | 第30页 |
| ·单个卵母细胞DDRT-PCR 系统稳定性及重复性分析 | 第30-31页 |
| ·成年绵羊GV& MII 期单卵 DDRT-PCR 结果 | 第31-33页 |
| ·绵羊幼羔超排与成年绵羊MII 期单卵DDRT-PCR 结果 | 第33-36页 |
| ·成年绵羊 GV 期、MII 期、绵羊幼羔MII 期共有条带的测序分析 | 第36-37页 |
| ·qPCR 检测卵母细胞成熟过程中CTSB&CTSS mRNA 表达情况 | 第37-43页 |
| ·qPCR 结果融解曲线分析 | 第37-38页 |
| ·单个卵母细胞成熟培养过程中各时间点CTSB、CTSS 和 GAPDH 检测结果 | 第38-43页 |
| 4 讨论 | 第43-48页 |
| ·影响单卵DDRT-PCR 的因素 | 第43-44页 |
| ·试验材料的鉴定及处理 | 第43页 |
| ·反转录所用的酶 | 第43页 |
| ·差异显示PCR 的酶和反应条件 | 第43-44页 |
| ·差异显示PCR 的弊端及补救措施 | 第44页 |
| ·影响实时定量PCR 的因素 | 第44-45页 |
| ·反转录时间对mRNA 拷贝数的影响 | 第44页 |
| ·实时定量PCR 的操作过程 | 第44-45页 |
| ·实时定量PCR的引物 | 第45页 |
| ·对本研究试验结果的讨论 | 第45-47页 |
| ·成年绵羊单卵GV 和MII 期DDRT-PCR 结果 | 第45-46页 |
| ·成年绵羊与幼羔单卵MII 期DDRT-PCR 结果 | 第46页 |
| ·成年绵羊单卵GV~MII 期 CTSB&CTSS mRNA 相对数量变化情况 | 第46-47页 |
| ·有待进一步研究的问题 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 在读期间发表论文 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
