| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 引言 | 第16-29页 |
| 1 鱼类性别决定 | 第16-18页 |
| 1.1 鱼类性别决定 | 第16页 |
| 1.2 鱼类自然性逆转 | 第16-17页 |
| 1.3 外源因素影响鱼类性腺分化 | 第17-18页 |
| 2 dazl基因概述 | 第18-21页 |
| 2.1 dazl基因结构 | 第19-21页 |
| 2.2 dazl基因功能 | 第21页 |
| 3 WT1基因概述 | 第21-24页 |
| 3.1 WT1基因结构 | 第21-23页 |
| 3.2 WT1的基因功能 | 第23-24页 |
| 4 microRNA简介 | 第24-27页 |
| 4.1 microRNA的起源 | 第24-25页 |
| 4.2 microRNA的结构 | 第25-26页 |
| 4.3 microRNA的研究进展 | 第26-27页 |
| 5 研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 第一章 pol-miR-200b在牙鲆性腺中的表达分析 | 第29-44页 |
| 1 实验材料 | 第30-32页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第30页 |
| 1.2 实验试剂 | 第30-31页 |
| 1.3 溶液配制 | 第31页 |
| 1.4 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-41页 |
| 2.1 总RNA提取与鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2 实时荧光定量qRT-PCR分析pol-miR-200b的组织表达 | 第33-36页 |
| 2.3 原位杂交技术分析pol-miR-200b的定位表达 | 第36-41页 |
| 3 结果 | 第41-42页 |
| 3.1 RNA提取质量检测 | 第41页 |
| 3.2 牙鲆pol-miR-200b在不同组织中的定量表达 | 第41页 |
| 3.3 牙鲆pol-miR-200b在牙鲆精巢、卵巢和脑组织中的定位表达 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第二章 牙鲆dazl、Wt1a基因的克隆与表达分析 | 第44-69页 |
| 1 实验材料 | 第45-47页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第45页 |
| 1.2 实验试剂 | 第45-46页 |
| 1.3 溶液配制 | 第46-47页 |
| 2 实验方法 | 第47-58页 |
| 2.1 牙鲆各组织RNA提取与鉴定 | 第47页 |
| 2.2 牙鲆dazl、Wt1a基因的cDNA片段克隆 | 第47-50页 |
| 2.3 牙鲆dazl、Wt1a基因的RACE (Rapid Amplification cDNA Ends)实验 | 第50-56页 |
| 2.4 牙鲆dazl、Wt1a基因序列分析 | 第56-57页 |
| 2.5 利用实时荧光定量qRT-PCR检测dazl和Wt1a的表达 | 第57-58页 |
| 3 结果 | 第58-67页 |
| 3.1 牙鲆各组织和各时期RNA提取质量检测 | 第58页 |
| 3.2 牙鲆dazl和Wt1a基因克隆和结构分析 | 第58-62页 |
| 3.3 牙鲆dazl和Wt1a基因的同源性和系统进化分析 | 第62-65页 |
| 3.4 牙鲆dazl和Wt1a基因的组织分布及在早期发育中的表达 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 第三章 温度、性激素对牙鲆性腺分化过程中miR-200b、dazl和wt1a基因表达的影响 | 第69-82页 |
| 1 实验材料 | 第70-71页 |
| 1.1 实验用鱼和样品采集 | 第70-71页 |
| 1.2 实验试剂 | 第71页 |
| 1.3 溶液配制 | 第71页 |
| 1.4 实验器材 | 第71页 |
| 2 实验方法 | 第71-72页 |
| 2.1 牙鲆 105d性腺各处理组的HE染色 | 第71-72页 |
| 2.2 牙鲆性腺各时期RNA提取与鉴定 | 第72页 |
| 2.3 实时荧光定量qRT-PCR分析pol-miR-200b、Wt1a、dazl的各时期的表达 | 第72页 |
| 3 实验结果 | 第72-79页 |
| 3.1 牙鲆的生长情况 | 第72-73页 |
| 3.2 牙鲆雌雄性别比例统计 | 第73-74页 |
| 3.3 牙鲆性腺各时期RNA提取质量检测 | 第74-75页 |
| 3.4 pol-miR-200b、dazl、Wt1a性腺的各时期的表达 | 第75-79页 |
| 4 讨论 | 第79-82页 |
| 4.1 温度处理和外源激素对牙鲆性别比例的影响 | 第79-80页 |
| 4.2 pol-miR-200b、dazl、Wt1a对性腺分化的影响 | 第80-82页 |
| 小结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-95页 |
| 发表论文 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
