| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 引言 | 第16-29页 |
| 1 牙鲆研究概述 | 第16-17页 |
| 2 部分异时性基因研究概况 | 第17-23页 |
| 2.1 异时性基因lin-28的研究概述 | 第18-20页 |
| 2.2 异时性基因lin-41的研究概述 | 第20-22页 |
| 2.3 异时性基因lin-29的研究概述 | 第22-23页 |
| 3 let-7 microRNA的研究概述 | 第23-25页 |
| 4 lin-28与let-7 的相互调控 | 第25-27页 |
| 5 研究目的与意义 | 第27-29页 |
| 第一章 牙鲆异时性基因的克隆及表达 | 第29-66页 |
| 1.1 试验材料与试剂 | 第29-32页 |
| 1.1.1 样品来源及采集 | 第29-30页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第30-31页 |
| 1.1.3 本章相关试剂的配置 | 第31页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 1.2 试验方法 | 第32-43页 |
| 1.2.1 总RNA的提取与鉴定 | 第32-33页 |
| 1.2.2 牙鲆总RNA的逆转录 | 第33-34页 |
| 1.2.3 引物设计 | 第34-35页 |
| 1.2.4 牙鲆异时性基因的cDNA扩增 | 第35-37页 |
| 1.2.5 RACE试验 | 第37-42页 |
| 1.2.6 牙鲆异时性基因的cDNA和氨基酸序列分析 | 第42页 |
| 1.2.7 荧光定量PCR | 第42-43页 |
| 1.3 实验结果 | 第43-62页 |
| 1.3.1 异时性基因的克隆及序列分析 | 第43-57页 |
| 1.3.2 各异时性基因在牙鲆发育中的表达 | 第57-62页 |
| 1.4 讨论 | 第62-66页 |
| 第二章 let-7 microRNAs靶基因预测及验证 | 第66-84页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第66-68页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第66页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第66-67页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第67-68页 |
| 2.2 实验方法 | 第68-74页 |
| 2.2.1 let-7 microRNAs靶基因预测 | 第68页 |
| 2.2.2 候选靶基因 3'-UTR引物的设计 | 第68-69页 |
| 2.2.3 双荧光报告重组载体的构建 | 第69-72页 |
| 2.2.4 靶位点验证 | 第72-74页 |
| 2.3 试验结果 | 第74-81页 |
| 2.3.1 靶基因的预测及载体构建 | 第74-75页 |
| 2.3.2 靶基因验证 | 第75-81页 |
| 2.4 讨论 | 第81-84页 |
| 第三章 牙鲆lin-28a和lin-28b真核表达载体的构建及鉴定 | 第84-106页 |
| 3.1 试验试剂与仪器 | 第84-86页 |
| 3.1.1 实验用主要试剂及仪器 | 第84-85页 |
| 3.1.2 蛋白实验常用试剂配制 | 第85-86页 |
| 3.2 实验方法 | 第86-93页 |
| 3.2.1 总RNA的提取及反转录 | 第86页 |
| 3.2.2 引物设计及合成 | 第86-87页 |
| 3.2.3 真核表达重组质粒载体的构建 | 第87-89页 |
| 3.2.4 真核细胞过表达 | 第89-90页 |
| 3.2.5 RT-PCR检测细胞过表达后相关异时性基因的表达 | 第90页 |
| 3.2.6 真核过表达后细胞周期检测 | 第90-91页 |
| 3.2.7 Western blot检测LIN-28a在FECs中的表达 | 第91-93页 |
| 3.3 试验结果 | 第93-103页 |
| 3.3.1 真核表达载体的构建 | 第93-94页 |
| 3.3.2 FECs中的真核过表达 | 第94-98页 |
| 3.3.3 实时定量检测真核过表达效果 | 第98-99页 |
| 3.3.4 let-7 miRNAs和lin-28a过表达后FECs中LIN-28a的表达 | 第99-100页 |
| 3.3.5 真核过表达后FECs中异时性基因的表达 | 第100-102页 |
| 3.3.6 真核过表达对细胞周期的影响 | 第102-103页 |
| 3.4 讨论 | 第103-106页 |
| 小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-114页 |
| 发表文章 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
