| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 猪胸膜肺炎 | 第13-15页 |
| 1.1.1 病原学 | 第13页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第13-14页 |
| 1.1.3 APP的发病机制和毒力因子 | 第14-15页 |
| 1.1.3.1 与定植有关的毒力因子 | 第14页 |
| 1.1.3.2 逃脱宿主清除机制的毒力因子 | 第14-15页 |
| 1.1.3.3 破坏宿主组织和诱导肺部病变的毒力因子 | 第15页 |
| 1.2 细菌脂蛋白特征及其功能研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 革兰氏阴性菌脂蛋白的特征 | 第15-16页 |
| 1.2.2 脂蛋白的功能 | 第16-18页 |
| 1.2.2.1 脂蛋白与细菌抗逆性 | 第16-17页 |
| 1.2.2.2 脂蛋白与营养物质的运输和吸收 | 第17页 |
| 1.2.2.3 脂蛋白与细菌致病性 | 第17页 |
| 1.2.2.4 脂蛋白与炎症反应 | 第17页 |
| 1.2.2.5 脂蛋白的其他功能 | 第17-18页 |
| 1.3 APP当前疫苗以及开发中存在的问题 | 第18-20页 |
| 1.3.1 灭活疫苗 | 第18页 |
| 1.3.2 单位疫苗 | 第18-19页 |
| 1.3.3 减毒活疫苗 | 第19页 |
| 1.3.4 Ghosts疫苗 | 第19-20页 |
| 1.4 本课题的研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第21页 |
| 2.1.2 培养基和抗生素配方 | 第21-22页 |
| 2.1.3 工具酶和试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要溶液的配置 | 第23-26页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-42页 |
| 2.2.1 胸膜肺炎放线杆菌的增殖 | 第27页 |
| 2.2.2 APP基因组的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 palA基因的克隆 | 第28-32页 |
| 2.2.3.1 引物设计 | 第28页 |
| 2.2.3.2 palA基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.3.3 palA的PCR产物的回收与纯化 | 第29页 |
| 2.2.3.4 PCR产物与pMD18-T载体连接 | 第29-30页 |
| 2.2.3.5 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞DH5α | 第30页 |
| 2.2.3.6 克隆载体pMD18-T与目的基因palA连接产物的转化 | 第30-31页 |
| 2.2.3.7 重组质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.3.8 重组质粒pMD18-PalA的酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.2.4 原核表达载体pKG-PalA的构建 | 第32-34页 |
| 2.2.4.1 目的基因palA和原核表达载体pGEX-KG酶切及酶切产物的回收 | 第32-33页 |
| 2.2.4.2 表达载体pGEX-KG与目的基因palA的连接 | 第33页 |
| 2.2.4.3 利用CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞BL21 | 第33页 |
| 2.2.4.4 表达载体pGEX-KG与目的基因palA连接产物的转化 | 第33页 |
| 2.2.4.5 重组表达质粒pKG-PalA的提取 | 第33页 |
| 2.2.4.6 重组表达质粒pKG-PalA的双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.5 目的蛋白的表达和纯化 | 第34-36页 |
| 2.2.5.1 GST-PalA融合蛋白的表达 | 第34页 |
| 2.2.5.2 GST-PalA融合蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.5.3 目的蛋白的SDS-PAGE检测 | 第35页 |
| 2.2.5.4 目的蛋白Western blotting鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.6 多克隆抗体的制备 | 第36-38页 |
| 2.2.6.1 目的蛋白兔抗血清的制备 | 第36页 |
| 2.2.6.2 间接ELISA法测定兔多克隆抗体含量 | 第36-38页 |
| 2.2.6.3 Western blotting鉴定多克隆抗体 | 第38页 |
| 2.2.7 PalA的亚细胞定位 | 第38-39页 |
| 2.2.7.1 提取和分离胸膜肺炎放线杆菌血清1型SLW01菌株的亚细胞成分 | 第38-39页 |
| 2.2.7.2 亚细胞成分的SDS-PAGE和Western blot | 第39页 |
| 2.2.8 小鼠的免疫保护实验 | 第39-41页 |
| 2.2.8.1 免疫原的准备 | 第39-40页 |
| 2.2.8.2 不同免疫原免疫BALB/c小鼠 | 第40页 |
| 2.2.8.3 ELISA检测各组小鼠血清的抗体效价 | 第40页 |
| 2.2.8.4 免疫攻毒 | 第40-41页 |
| 2.2.9 被动免疫保护实验 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-53页 |
| 3.1 palA基因的PCR扩增 | 第42页 |
| 3.2 pMD18-PalA克隆载体的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 重组表达载体pKG-PalA的构建和酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.4 重组蛋白的诱导表达 | 第44-45页 |
| 3.4.1 重组表达载体pKG-PalA的诱导表达和纯化 | 第44页 |
| 3.4.2 重组蛋白pKG-PalA的Western blotting鉴定 | 第44-45页 |
| 3.5 PalA-ELISA方法的建立 | 第45页 |
| 3.6 制备兔多克隆抗体血清以及效价的分析 | 第45-47页 |
| 3.7 亚细胞的定位 | 第47-48页 |
| 3.8 免疫保护实验小鼠特异性血清抗体效价的检测 | 第48-49页 |
| 3.9 免疫小鼠攻毒实验 | 第49-51页 |
| 3.10 被动免疫 | 第51-53页 |
| 3.10.1 被动免疫小鼠存活 | 第51页 |
| 3.10.2 被动免疫肺部切片的分析 | 第51-53页 |
| 第四章 论文总结 | 第53-56页 |
| 4.1 讨论 | 第53-55页 |
| 4.2 结论与展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 在读期间发表的论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
