| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 中英文对照和缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-33页 |
| 1.1 膜蛋白 | 第15-17页 |
| 1.1.1 生物膜与膜蛋白 | 第15-16页 |
| 1.1.2 膜蛋白的重要性 | 第16-17页 |
| 1.2 水通道蛋白 | 第17-22页 |
| 1.2.1 水通道蛋白的结构 | 第18-19页 |
| 1.2.2 大肠杆菌水通道蛋白Z(AquaproinZ,AqpZ) | 第19-20页 |
| 1.2.3 深海嗜压菌水通道蛋白SS9(AquaporinSS9,AqpSS9) | 第20-21页 |
| 1.2.4 开发P.profundum SS9新型水通道蛋白的意义 | 第21-22页 |
| 1.3 水通道蛋白的表达策略研究进展 | 第22-26页 |
| 1.3.1 胞内表达系统 | 第22页 |
| 1.3.2 无细胞表达系统 | 第22-26页 |
| 1.4 含水通道蛋白的生物仿生膜的研究进展 | 第26-32页 |
| 1.4.1 水通道蛋白的功能表征 | 第26-28页 |
| 1.4.2 水通道蛋白在仿生膜领域的应用 | 第28-32页 |
| 1.5 本课题拟研究内容 | 第32-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-36页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第33页 |
| 2.1.2 质粒 | 第33页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.4 培养基 | 第34页 |
| 2.1.5 实验试剂的配制 | 第34-35页 |
| 2.1.6 主要实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-42页 |
| 2.2.1 分子克隆实验 | 第36页 |
| 2.2.2 细胞密度的测定 | 第36页 |
| 2.2.3 感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第37页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE电泳 | 第37页 |
| 2.2.6 Western-blot分析 | 第37-38页 |
| 2.2.7 脂质体的制备 | 第38页 |
| 2.2.8 Batch模式大肠杆菌无细胞体系的制备 | 第38-42页 |
| 第三章 水通道蛋白AqpSS9的无细胞表达和功能测定 | 第42-63页 |
| 3.1 引言 | 第42-43页 |
| 3.2 材料与方法 | 第43-48页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第43页 |
| 3.2.2 工具酶与主要试剂 | 第43页 |
| 3.2.3 分子生物学基本操作 | 第43页 |
| 3.2.4 Batch模式大肠杆菌无细胞表达体系的制备 | 第43页 |
| 3.2.5 无细胞表达载体pIVEX2.4c-AqpSS9的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.6 去污剂重悬无细胞体系表达的AqpSS9 | 第45页 |
| 3.2.7 无细胞体系添加去污剂表达AqpSS9 | 第45页 |
| 3.2.8 DOPC脂质体的制备 | 第45页 |
| 3.2.9 无细胞体系添加脂质体表达AqpSS9 | 第45-46页 |
| 3.2.10 AqpSS9的纯化 | 第46页 |
| 3.2.11 AqpSS9的蛋白浓度测定 | 第46页 |
| 3.2.12 AqpSS9脂蛋白体的制备 | 第46-47页 |
| 3.2.13 AqpSS9脂蛋白体的透水功能分析 | 第47-48页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第48-61页 |
| 3.3.1 无细胞表达载体pIVEX2.4c-AqpSS9的构建 | 第48页 |
| 3.3.2 AqpSS9的无细胞表达 | 第48-50页 |
| 3.3.3 去污剂重悬制备可溶性AqpSS9(P-CF) | 第50-52页 |
| 3.3.4 无细胞体系添加去污剂表达可溶性AqpSS9(D-CF) | 第52-53页 |
| 3.3.5 Brij-78浓度的筛选 | 第53-54页 |
| 3.3.6 无细胞体系添加脂质体表达可溶性AqpSS9(L-CF) | 第54-56页 |
| 3.3.7 AqpSS9的纯化 | 第56-57页 |
| 3.3.8 AqpSS9脂蛋白体的制备 | 第57-58页 |
| 3.3.9 AqpSS9脂蛋白体的透水功能检测 | 第58-61页 |
| 3.4 小结 | 第61-63页 |
| 第四章 水通道蛋白AqpZ的无细胞表达和功能测定 | 第63-72页 |
| 4.1 引言 | 第63-64页 |
| 4.2 材料与方法 | 第64-66页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第64页 |
| 4.2.2 工具酶与主要试剂 | 第64页 |
| 4.2.3 分子生物学基本操作 | 第64页 |
| 4.2.4 Batch模式大肠杆菌无细胞表达体系的制备 | 第64页 |
| 4.2.5 无细胞表达载体pIVEX2.4c-AqpZ的构建 | 第64-65页 |
| 4.2.6 无细胞体系添加去污剂表达AqpZ | 第65页 |
| 4.2.7 DOPC脂质体的制备 | 第65-66页 |
| 4.2.8 AqpZ的纯化 | 第66页 |
| 4.2.9 AqpZ的蛋白浓度测定 | 第66页 |
| 4.2.10 AqpZ脂蛋白体的制备 | 第66页 |
| 4.2.11 AqpZ脂蛋白体的透水功能分析 | 第66页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第66-70页 |
| 4.3.1 无细胞表达载体pIVEX2.4c-AqpZ的构建 | 第66-67页 |
| 4.3.2 无细胞体系添加去污剂表达可溶性AqpZ(D-CF) | 第67页 |
| 4.3.3 AqpZ的纯化 | 第67-68页 |
| 4.3.4 AqpZ脂蛋白体的制备 | 第68-69页 |
| 4.3.5 AqpZ脂蛋白体的透水功能检测 | 第69-70页 |
| 4.4 小结 | 第70-72页 |
| 第五章 静电吸附法制备嵌入水通道蛋白的仿生膜 | 第72-89页 |
| 5.1 引言 | 第72-73页 |
| 5.2 材料与方法 | 第73-78页 |
| 5.2.1 菌株与质粒 | 第73页 |
| 5.2.2 工具酶与主要试剂 | 第73页 |
| 5.2.3 分子生物学基本操作 | 第73页 |
| 5.2.4 AqpZ的定点突变 | 第73-74页 |
| 5.2.5 脂质体的制备 | 第74页 |
| 5.2.6 脂蛋白体的制备 | 第74-75页 |
| 5.2.7 聚丙烯腈基膜的制备 | 第75页 |
| 5.2.8 聚丙烯腈基膜的碱处理 | 第75页 |
| 5.2.9 静电吸附层及磷脂层的铺展 | 第75-76页 |
| 5.2.10 仿生膜结构与性能的表征 | 第76-78页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第78-87页 |
| 5.3.1 无细胞表达载体pIVEX2.4c-AqpZ-Mutant的构建 | 第78页 |
| 5.3.2 红外表征 | 第78-79页 |
| 5.3.3 原子力显微镜表征 | 第79-80页 |
| 5.3.4 扫描电镜表征 | 第80-82页 |
| 5.3.5 仿生膜的纳滤分离性能表征 | 第82-84页 |
| 5.3.6 仿生膜的正渗透分离性能表征 | 第84-85页 |
| 5.3.7 采用商业化聚丙烯腈底膜的仿生膜的纳滤分离性能表征 | 第85-87页 |
| 5.4 小结 | 第87-89页 |
| 第六章 结论与展望 | 第89-92页 |
| 6.1 结论 | 第89-91页 |
| 6.2 展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 作者简历 | 第102页 |
