| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-35页 |
| 1.1 低温胁迫对植物的影响 | 第13-15页 |
| 1.1.1 冷害对植物的影响 | 第13-14页 |
| 1.1.2 冻害对植物的影响 | 第14-15页 |
| 1.2 植物应对低温胁迫的生理基础 | 第15页 |
| 1.3 植物感受低温信号的分子机制 | 第15-19页 |
| 1.3.1 细胞膜流动性变化 | 第15-16页 |
| 1.3.2 双组分磷酸系统 | 第16-17页 |
| 1.3.3 钙离子通道 | 第17-18页 |
| 1.3.4 其它温度相关感受器 | 第18-19页 |
| 1.4 植物响应低温胁迫的信号转导途径 | 第19-22页 |
| 1.4.1 CBF依赖的信号转导途径 | 第19-21页 |
| 1.4.2 CBF不依赖的信号转导途径 | 第21-22页 |
| 1.5 14-3-3蛋白相关研究 | 第22-29页 |
| 1.5.1 14-3-3蛋白的分类与结构解析 | 第23-24页 |
| 1.5.2 14-3-3蛋白的互作域分析和互作组研究 | 第24-25页 |
| 1.5.3 14-3-3蛋白与蛋白激酶 | 第25-27页 |
| 1.5.4 14-3-3蛋白调控的转录因子 | 第27-29页 |
| 1.5.5 14-3-3参与调控的其它蛋白 | 第29页 |
| 1.6 类受体激酶相关研究 | 第29-33页 |
| 1.6.1 RLK的分类和结构 | 第30-31页 |
| 1.6.2 RLK调控的信号转导途径 | 第31-33页 |
| 1.6.3 RLK与低温信号转导 | 第33页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第35-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第35页 |
| 2.1.2 相关菌株 | 第35页 |
| 2.1.3 相关载体 | 第35-36页 |
| 2.1.4 相关载体构建 | 第36-37页 |
| 2.2 相关试剂 | 第37-38页 |
| 2.3 相关培养基和试剂的配制 | 第38-43页 |
| 2.3.1 相关培养基的配制 | 第38-39页 |
| 2.3.2 抗生素贮存液配制 | 第39页 |
| 2.3.3 拟南芥原生质体瞬时转化相关试剂 | 第39-40页 |
| 2.3.4 DNA提取及PCR相关试剂 | 第40页 |
| 2.3.5 蛋白提取及检测相关试剂 | 第40-41页 |
| 2.3.6 农杆菌注射烟草表达蛋白缓冲液 | 第41页 |
| 2.3.7 磷酸化相关缓冲液 | 第41-42页 |
| 2.3.8 原核蛋白纯化相关缓冲液 | 第42-43页 |
| 2.4 相关实验仪器 | 第43-44页 |
| 2.5 实验方法 | 第44-53页 |
| 2.5.1 植物培养条件 | 第44页 |
| 2.5.2 冻处理实验 | 第44页 |
| 2.5.3 离子渗漏率测定 | 第44页 |
| 2.5.4 植物基因组DNA提取 | 第44-45页 |
| 2.5.5 植物总RNA提取 | 第45页 |
| 2.5.6 Real-time PCR扩增 | 第45页 |
| 2.5.7 质粒小量提取 | 第45-46页 |
| 2.5.8 质粒大量提取 | 第46页 |
| 2.5.9 植物总蛋白提取 | 第46-47页 |
| 2.5.10 酵母蛋白提取 | 第47页 |
| 2.5.11 蛋白质免疫印迹(western blot) | 第47页 |
| 2.5.12 Co-IP实验 | 第47-48页 |
| 2.5.13 Pull-down实验 | 第48页 |
| 2.5.14 核酵母系统双杂交 | 第48-49页 |
| 2.5.15 原生质体转化 | 第49页 |
| 2.4.16 His蛋白纯化 | 第49-50页 |
| 2.4.17 细胞核质蛋白分离 | 第50页 |
| 2.4.18 体外磷酸化实验 | 第50页 |
| 2.4.19 胶内磷酸化(In-gel)实验 | 第50-51页 |
| 2.4.20 稳定转基因株系构建 | 第51页 |
| 2.5.21 DNA的定点突变 | 第51-52页 |
| 2.5.22 碱性磷酸酶(CIAP)处理 | 第52页 |
| 2.5.23 双分子荧光互补实验(BiFC) | 第52-53页 |
| 第三章 结果与分析 | 第53-92页 |
| 3.1 CRPK1缺失突变体具有抗冻表型 | 第53-54页 |
| 3.2 野生型CRPK1基因回复crpk1-1突变体的抗冻表型 | 第54-56页 |
| 3.3 CRPK1蛋白的激酶活性在低温应答调控中至关重要 | 第56-57页 |
| 3.4 CRPK1参与调节CBF信号途径 | 第57-59页 |
| 3.5 CRPK1的性质分析 | 第59-63页 |
| 3.5.1 CRPK1基因的表达模式分析 | 第59页 |
| 3.5.2 CRPK1蛋白的定位分析 | 第59-61页 |
| 3.5.3 CRPK1蛋白的性质和亲缘关系 | 第61-63页 |
| 3.6 低温对CRPK1的影响 | 第63-64页 |
| 3.6.1 低温对CRPK1表达的影响 | 第63页 |
| 3.6.2 低温对CRPK1蛋白激酶活性的影响 | 第63-64页 |
| 3.7 CRPK1蛋白与14-3-3λ蛋白相互作用 | 第64-66页 |
| 3.7.1 CRPK1互作蛋白的筛选 | 第64-65页 |
| 3.7.2 CRPK1和14-3-3λ在植物体内发生相互作用 | 第65-66页 |
| 3.8 CRPK1磷酸化14-3-3λ蛋白 | 第66-70页 |
| 3.8.1 CRPK1在体外磷酸化14-3-3λ | 第66-67页 |
| 3.8.2 CRPK1在植物体内磷酸化14-3-3λ | 第67-69页 |
| 3.8.3 CRPK1磷酸化14-3-3λ蛋白的靶位点 | 第69-70页 |
| 3.9 14-3-3λ参与低温调控 | 第70-73页 |
| 3.10 14-3-3λ参与低温调控依赖于CRPK1 | 第73-76页 |
| 3.10.1 CRPK1和14-3-3λ的遗传关系分析 | 第73-74页 |
| 3.10.2 14-3-3λ参与低温调控依赖于CRPK1对其磷酸化 | 第74-76页 |
| 3.11 低温处理诱导14-3-3λ入核 | 第76-80页 |
| 3.12 14-3-3λ磷酸化入核的过程对于其发挥功能是必要的 | 第80-83页 |
| 3.13 14-3-3λ参与低温调控依赖于CBF信号途径 | 第83页 |
| 3.14 14-3-3λ与CBFs互作 | 第83-85页 |
| 3.15 14-3-3λ促进CBF1和CBF3蛋白的降解 | 第85-87页 |
| 3.16 14-3-3λ促进CBF1和CBF3的降解依赖于CRPK1对其磷酸化 | 第87-89页 |
| 3.17 14-3-3λ在CBFs上游发挥低温调控功能 | 第89-90页 |
| 3.18 CRPK1在CBFs上游发挥低温调控功能 | 第90-92页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第92-96页 |
| 4.1 类受体激酶CRPK1响应低温信号的机制 | 第92-93页 |
| 4.2 14-3-3蛋白调控CRPK1的可能性探究 | 第93页 |
| 4.3 14-3-3蛋白的磷酸化与功能关系 | 第93-94页 |
| 4.4 14-3-3蛋白对CBF蛋白的调控和互作域分析 | 第94-95页 |
| 4.5 CRPK1和14-3-3蛋白介导的负反馈调控 | 第95-96页 |
| 第五章 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-115页 |
| 附录 | 第115-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 作者简介 | 第120页 |
