| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第8-19页 |
| 1. 溶菌酶概述 | 第8页 |
| 2. 分类与分布 | 第8页 |
| 3. 溶菌酶结构 | 第8-10页 |
| 4. 溶菌酶催化机理 | 第10-13页 |
| 5. 溶菌酶的抗菌活性 | 第13-15页 |
| 6. 溶菌酶研究的意义 | 第15-16页 |
| 7. 立题背景及研究内容 | 第16-19页 |
| 第一章 具有天然N端LYC1的LYC1-PPIC9K表达载体构建及重组毕赤酵母的菌株筛选 | 第19-36页 |
| 材料方法 | 第19-30页 |
| 1. 材料和试剂 | 第19-22页 |
| 1.1 菌株 | 第19页 |
| 1.2 载体 | 第19页 |
| 1.3 引物 | 第19-20页 |
| 1.4 试剂及耗材 | 第20页 |
| 1.5 常用培养基及试剂配制 | 第20-22页 |
| 1.6 主要仪器 | 第22页 |
| 2. 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.1 具有天然N端LYC1的毕赤酵母表达载体LYC1-pPIC9k的构建 | 第22-27页 |
| 2.2 巴斯德毕赤酵母的电转化及菌株筛选 | 第27-28页 |
| 2.3 重组毕赤酵母的摇瓶表达及发酵菌株筛选 | 第28-30页 |
| 结果 | 第30-36页 |
| 1. LYC1的序列分析和同源比较 | 第30-31页 |
| 2. LYC1和其它人c型溶菌酶的基因定位和结构分析 | 第31-32页 |
| 3. 天然N端LYC1重组表达载体LYC1-pPIC9k的构建 | 第32-34页 |
| 4. 重组菌株的鉴定、筛选和摇瓶表达 | 第34-36页 |
| 第二章 重组毕赤酵母菌株在30L发酵罐中高密度发酵表达LYC1及发酵上清活性分析 | 第36-52页 |
| 材料方法 | 第36-42页 |
| 1. 材料和试剂 | 第36-38页 |
| 1.1 菌株 | 第36页 |
| 1.2 培养基及试剂配制 | 第36-38页 |
| 1.3 主要仪器 | 第38页 |
| 2. 实验方法 | 第38-42页 |
| 2.1 重组毕赤酵母菌株的发酵罐发酵 | 第38-40页 |
| 2.2 目的蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第40页 |
| 2.3 发酵上清的溶菌活性检测 | 第40-41页 |
| 2.4 重组蛋白的鉴定 | 第41-42页 |
| 结果 | 第42-47页 |
| 1. 发酵过程的工艺控制及参数优化结果 | 第42页 |
| 2. 重组菌株的发酵结果 | 第42-44页 |
| 3. 重组蛋白鉴定 | 第44-45页 |
| 4. 重组LYC1发醇上清的活性检测 | 第45-47页 |
| 讨论 | 第47-52页 |
| 1. 蛋白表达系统的选择 | 第47页 |
| 2. 天然N端LYC1的LYC1-PPIC9K表达载体构建 | 第47-48页 |
| 3. 重组质粒整合进酵母基因组及重组菌株筛选策略 | 第48-49页 |
| 4. 重组菌株在摇瓶中的表达 | 第49-50页 |
| 5. 发酵过程的工艺控制及参数优化 | 第50页 |
| 6. 重组菌株的发酵表达结果及LYC1的活性分析 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 综述：毕赤酵母重组蛋白表达系统 | 第56-66页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
