| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-32页 |
| 1.1 鱼类原始生殖细胞胚胎期的发生发育研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.1 鱼类PGCs的形态组织学、免疫组织化学和电镜超微结构特征 | 第15-16页 |
| 1.1.2 鱼类PGCs标记基因及技术研究进展 | 第16页 |
| 1.1.3 鱼类PGC(s)的起源 | 第16-17页 |
| 1.1.4 鱼类PGC(s)迁移路线及机制研究进展 | 第17-18页 |
| 1.1.5 环境因子对鱼类PGCs迁移的影响 | 第18页 |
| 1.2 硬骨鱼类性腺的分化和发育研究进展 | 第18-26页 |
| 1.2.1 硬骨鱼类性腺分化的判断标准研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2.1.1 性腺分化类型 | 第19-20页 |
| 1.2.1.2 性腺分化的时间 | 第20页 |
| 1.2.1.3 性别雌雄判断的标志 | 第20-21页 |
| 1.2.2 鱼类性别分化与日龄和全长的关系 | 第21页 |
| 1.2.3 抗缪勒氏管激素在性别分化中的作用研究 | 第21-23页 |
| 1.2.4 生殖细胞在性别分化过程中的作用 | 第23-24页 |
| 1.2.5 性别分化过程中相关基因的研究进展 | 第24-26页 |
| 1.2.5.1 生殖细胞标记基因dnd | 第24页 |
| 1.2.5.2 P450arom | 第24-25页 |
| 1.2.5.3 foxl | 第25-26页 |
| 1.2.5.5 sox9 | 第26页 |
| 1.3 人工诱导鱼类性腺的分化 | 第26-29页 |
| 1.3.1 人工诱导鱼类性分化的方式 | 第26-29页 |
| 1.3.1.1 外源激素诱导鱼类性分化 | 第27页 |
| 1.3.1.2 高温诱导鱼类雄性化 | 第27-28页 |
| 1.3.1.3 药物诱导鱼类性腺的分化 | 第28-29页 |
| 1.3.2 细胞凋亡与性别分化的关系 | 第29页 |
| 1.4 牙鲆胚胎发育及性分化的研究进展 | 第29-30页 |
| 1.4.1 牙鲆概述 | 第29页 |
| 1.4.2 牙鲆胚胎发育及性分化研究进展 | 第29-30页 |
| 1.5 本研究的意义及目的 | 第30-32页 |
| 第二章 牙鲆原始生殖细胞的起源、增殖和迁移及在成熟性腺中的表达模式 | 第32-54页 |
| 2.1 研究背景 | 第32-33页 |
| 2.2 材料与方法 | 第33-40页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.2.2 主要仪器和试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.2.1 主要仪器 | 第33页 |
| 2.2.2.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.3 牙鲆原始生殖细胞标记基因dnd的克隆 | 第34-36页 |
| 2.2.3.1 总RNA提取（RNA提取试剂盒） | 第34页 |
| 2.2.3.2 反转录cDNA第一链合成 | 第34页 |
| 2.2.3.3 dnd部分片段的获得 | 第34-35页 |
| 2.2.3.4 RACE获得dnd c DNA全长序列 | 第35-36页 |
| 2.2.4 dnd序列分析及进化树构建 | 第36页 |
| 2.2.5 dnd在牙鲆胚胎发育期及成鱼各组织的荧光定量检测 | 第36-37页 |
| 2.2.6 dnd在牙鲆胚胎发育期及性腺的原位检测 | 第37-40页 |
| 2.2.6.1 Podnd正义和反义探针合成 | 第37-38页 |
| 2.2.6.2 切片原位杂交 | 第38-39页 |
| 2.2.6.3 胚胎整体原位杂交 | 第39-40页 |
| 2.2.7 数据统计 | 第40页 |
| 2.3 结果 | 第40-51页 |
| 2.3.1 dnd基因序列和进化关系分析 | 第40-42页 |
| 2.3.2 牙鲆dnd成鱼各组织和胚胎发育时序表达情况 | 第42-44页 |
| 2.3.3 牙鲆dnd基因在性腺中的表达定位 | 第44-46页 |
| 2.3.4 牙鲆dnd基因在胚胎发育过程中的定位 | 第46-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-54页 |
| 2.4.1 牙鲆dnd基因的克隆和序列特征分析 | 第51-52页 |
| 2.4.2 牙鲆dnd基因的成鱼各组织及在成熟性腺中的定位模式检测 | 第52页 |
| 2.4.3 牙鲆dnd基因在胚胎期的表达模式分析 | 第52页 |
| 2.4.4 牙鲆原始生殖细胞的迁移模式分析 | 第52-54页 |
| 第三章 雄激素诱导牙鲆性分化过程中生殖细胞数量变化及相关基因差异表达研究 | 第54-74页 |
| 3.1 研究背景 | 第54-55页 |
| 3.2 材料与方法 | 第55-57页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第55页 |
| 3.2.2 实验设计和取样 | 第55-56页 |
| 3.2.3 主要仪器和试剂 | 第56页 |
| 3.2.3.1 主要仪器 | 第56页 |
| 3.2.3.2 主要试剂 | 第56页 |
| 3.2.4 性分化关键期性腺组织学观察 | 第56页 |
| 3.2.5 性分化关键期基因dnd和amh荧光定量PCR检测 | 第56-57页 |
| 3.2.6 ELISA法检测激素含量 | 第57页 |
| 3.2.7 数据统计 | 第57页 |
| 3.3 结果 | 第57-71页 |
| 3.3.1 牙鲆对照组和雄激素诱导组诱导率统计 | 第57-58页 |
| 3.3.2 牙鲆性分化关键期对照组和雄激素诱导组幼鱼全长比较 | 第58-59页 |
| 3.3.3 在性分化关键期，对照组和雄激素诱导组生殖细胞形态、分布和数量变化及增殖方式比较 | 第59-65页 |
| 3.3.3.1 在性分化关键期，表型雌雄的生殖细胞形态及分布变化 | 第59-64页 |
| 3.3.3.2 在性分化关键期中，表型雌雄的生殖细胞增殖规律 | 第64-65页 |
| 3.3.4 性分化完成后，对照组和雄激素组，表型雌雄性腺组织学比较 | 第65-68页 |
| 3.3.5 牙鲆性分化关键期相关基因的表达量变化 | 第68-71页 |
| 3.3.5.1 dnd基因在性腺分化过程中的表达变化 | 第68-69页 |
| 3.3.5.2 amh基因在各组织中的表达情况 | 第69-70页 |
| 3.3.5.3 amh基因在性腺分化过程中的表达情况 | 第70-71页 |
| 3.3.6 牙鲆性分化关键期抗缪勒氏管激素变化 | 第71页 |
| 3.4 讨论 | 第71-73页 |
| 3.4.1 外源添加17α-甲基睾酮诱导雄性化 | 第71-72页 |
| 3.4.2 雄激素诱导对幼鱼生长的抑制作用 | 第72页 |
| 3.4.3 amh基因和抗缪勒氏管激素的作用 | 第72-73页 |
| 3.5 小结 | 第73-74页 |
| 第四章 高温影响牙鲆原始生殖细胞迁移及雄性化过程中生殖细胞数量变化及相关基因差异表达 | 第74-109页 |
| 4.1 研究背景 | 第74-76页 |
| 4.2 高温影响牙鲆sdf-1 和cxcr4表达量的变化 | 第76-87页 |
| 4.2.1 材料与方法 | 第76-78页 |
| 4.2.1.1 实验设计及取样 | 第76页 |
| 4.2.1.2 主要仪器和试剂 | 第76页 |
| 4.2.1.3 牙鲆分泌和趋化因子sdf-1/cxcr4基因克隆 | 第76-77页 |
| 4.2.1.4 序列分析及进化树构建 | 第77页 |
| 4.2.1.5 实时荧光定量PCR检测 | 第77页 |
| 4.2.1.6 数据统计 | 第77-78页 |
| 4.2.2 结果 | 第78-86页 |
| 4.2.2.1 牙鲆sdf-1 和cxcr4基因克隆和序列分析 | 第78-83页 |
| 4.2.2.1.1 sdf-1 基因克隆和序列分析 | 第78-80页 |
| 4.2.2.1.2 cxcr4基因克隆和序列分析 | 第80-83页 |
| 4.2.2.2 牙鲆sdf-1 和cxcr4基因的组织特异性 | 第83-84页 |
| 4.2.2.3 不同温度处理条件下，sdf-1 和cxcr4的表达变化 | 第84-86页 |
| 4.2.3 讨论 | 第86-87页 |
| 4.3 高温诱导牙鲆雄性化过程中生殖细胞数量和基因表达差异研究 | 第87-109页 |
| 4.3.1 材料与方法 | 第87-88页 |
| 4.3.1.1 实验材料 | 第87页 |
| 4.3.1.2 实验设计和取样 | 第87页 |
| 4.3.1.3 主要仪器和试剂 | 第87页 |
| 4.3.1.4 凋亡检测 | 第87-88页 |
| 4.3.1.5 数据统计 | 第88页 |
| 4.3.2 结果 | 第88-106页 |
| 4.3.2.1 对照组和高温诱导组的诱导率及全长比较 | 第88-89页 |
| 4.3.2.2 性腺分化关键期性腺组织切片观察 | 第89-106页 |
| 4.3.2.2.1 性分化关键期，对照组和高温诱导组的生殖细胞形态和分布变化 | 第89-96页 |
| 4.3.2.2.2 性分化关键期，对照组和高温诱导组生殖细胞数量变化比较。 | 第96-97页 |
| 4.3.2.2.3 性腺分化完成后，对照组和高温诱导组的性腺组织学比较 | 第97-101页 |
| 4.3.2.2.4 凋亡相关检测 | 第101-102页 |
| 4.3.2.2.5 性腺分化关键期，基因dnd和amh的表达情况检测 | 第102-103页 |
| 4.3.2.2.6 性分化过程中，对照组和高温诱导组相关激素含量的变化 | 第103-106页 |
| 4.3.3 讨论 | 第106-108页 |
| 4.3.3.1 性别分化过程中，生殖细胞数量呈现性别二态性 | 第106-107页 |
| 4.3.3.2 凋亡在精巢和卵巢中呈现不同的分布特征 | 第107页 |
| 4.3.3.3 amh和激素在高温雄性化中的作用 | 第107-108页 |
| 4.3.4 小结 | 第108-109页 |
| 第五章 结论与展望 | 第109-111页 |
| 5.1 主要研究结论 | 第109-110页 |
| 5.2 展望 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-128页 |
| 作者简介 | 第128-129页 |
| 博士期间发表和完成的论文 | 第129页 |
