| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-36页 |
| 1.1 沙门氏菌鞭毛蛋白的概况 | 第15-19页 |
| 1.1.1 鞭毛蛋白的结构与功能 | 第15-17页 |
| 1.1.2 鞭毛蛋白与天然免疫 | 第17-19页 |
| 1.1.3 鞭毛蛋白与获得性免疫 | 第19页 |
| 1.2 沙门氏菌鞭毛蛋白的佐剂作用 | 第19-26页 |
| 1.2.1 鞭毛蛋白作为佐剂的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.2.2 鞭毛蛋白作为鸡疫苗佐剂的研究 | 第22-26页 |
| 1.3 乳酸菌表达重组蛋白的优势 | 第26-29页 |
| 1.3.1 乳酸菌作为疫苗佐剂的潜能 | 第26-28页 |
| 1.3.2 乳酸菌作为活菌载体表达外源蛋白的研究 | 第28-29页 |
| 1.3.3 禽为模型的乳酸菌相关研究 | 第29页 |
| 1.4 IBDV疫苗的研究与应用 | 第29-34页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第34-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-52页 |
| 2.1 试验材料 | 第36-38页 |
| 2.1.1 病毒、细胞和抗体 | 第36页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第36页 |
| 2.1.3 质粒和菌株 | 第36页 |
| 2.1.4 酶类及主要试剂 | 第36页 |
| 2.1.5 引物 | 第36-38页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第38页 |
| 2.2 试验方法 | 第38-52页 |
| 2.2.1 FIiB、FIiBc和IBDV VP2基因片段的克隆 | 第38-42页 |
| 2.2.2 FliB、FliBc、VP2和FliBc-VP2基因E.coli表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.3 FliB、FliBc、VP2和FliBc-VP2在E.coli中表达和鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.4 乳酸菌表达载体pPG-2-FliB、pPG-2-FliBc和pPG-2-FliBc-VP2的构建 | 第44-45页 |
| 2.2.5 目的蛋白在干酪乳杆菌L.393中的诱导表达及鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2.6 乳酸菌表达的重组蛋白体外活性检测 | 第46-47页 |
| 2.2.7 FliBc、VP2和FliBc-VP2重组蛋白的纯化和免疫 | 第47-48页 |
| 2.2.8 pPG-2-FliB/L.casei393和pPG-2-FliBc/L.casei393培养上清的处理并和IBDV弱毒疫苗配合的免疫 | 第48页 |
| 2.2.9 乳酸菌活载体疫苗的制备和免疫 | 第48-49页 |
| 2.2.10 疫苗免疫效果的评估 | 第49-52页 |
| 3 实验结果 | 第52-80页 |
| 3.1 IBDV-VP2、FliB和FliBc基因的克隆 | 第52-56页 |
| 3.1.1 FliB和FliBc基因的克隆 | 第52-54页 |
| 3.1.2 IBDV-VP2基因的克隆 | 第54-56页 |
| 3.2 FliBc、VP2和FliBc-VP2基因E.coli表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 3.2.1 Ppro-HTa-FliB和Ppro-HTa-FliBc的构建 | 第56页 |
| 3.2.2 重组载体Ppro-HTa-VP2的构建 | 第56-57页 |
| 3.2.3 重组载体Ppro-HTa-FliBc-VP2的构建 | 第57-58页 |
| 3.3 重组E.coli的诱导表达和鉴定 | 第58-63页 |
| 3.3.1 鞭毛蛋白Fli的多克隆抗体的制备 | 第58-59页 |
| 3.3.2 E.coli表达重组蛋白FliB和FliBc的表达鉴定 | 第59-60页 |
| 3.3.3 Ppro-HTa-VP2/BL21的诱导表达和鉴定 | 第60-61页 |
| 3.3.4 Ppro-HTa-FliC-VP2/BL21的诱导表达和鉴定 | 第61-63页 |
| 3.4 重组乳酸菌载体的构建与鉴定 | 第63-65页 |
| 3.4.1 重组载体pPG-2-FliB的构建及鉴定 | 第63页 |
| 3.4.2 重组载体pPG-2-FliBc的构建及鉴定 | 第63-64页 |
| 3.4.3 重组载体pPG-2-FliB-VP2的构建及鉴定 | 第64-65页 |
| 3.5 FliB、FliBc和FliBc-VP2基因的乳酸菌表达及鉴定 | 第65-67页 |
| 3.5.1 pPG-2-FliB/L.casei393、pPG-2-FliBc/L.casei393的诱导表达 | 第65-66页 |
| 3.5.2 pPG-2-FliBc-VP2/L.casei393的诱导表达 | 第66-67页 |
| 3.6 乳酸菌表达的重组蛋白FliB和FliBc体外活性检测 | 第67-70页 |
| 3.6.1 重组乳酸菌表达蛋白的处理和检测 | 第67页 |
| 3.6.2 对Caco-2细胞表达TLR-5和IL-8水平的影响 | 第67-70页 |
| 3.7 FliBc对VP2亚单位疫苗佐剂活性的评估 | 第70-73页 |
| 3.7.1 亚单位疫苗重组疫苗的纯化 | 第70页 |
| 3.7.2 免疫SPF鸡血清中特异性IgY的测定 | 第70-71页 |
| 3.7.3 特异性脾淋巴细胞增殖试验 | 第71-72页 |
| 3.7.4 血清中和抗体效价 | 第72页 |
| 3.7.5 攻毒保护性试验 | 第72-73页 |
| 3.8 FliBc对IBDV弱毒疫苗佐剂活性的评估 | 第73-76页 |
| 3.8.1 免疫SPF鸡血清中特异性IgY的测定 | 第73-74页 |
| 3.8.2 特异性脾淋巴细胞增殖试验 | 第74页 |
| 3.8.3 中和抗体水平 | 第74-75页 |
| 3.8.4 攻毒保护试验 | 第75-76页 |
| 3.9 FliBc对IBDV活载体疫苗佐剂活性的评估 | 第76-80页 |
| 3.9.1 pPG2-VP2/L.casei393和pPG2-FliBc-VP2/L.casei393免疫SPF鸡血清特异性IgY的测定 | 第76-77页 |
| 3.9.2 特异性脾淋巴细胞增殖活性 | 第77-78页 |
| 3.9.3 液、气管灌洗液和肠粘液中分泌型IgA的测定 | 第78-79页 |
| 3.9.4 中和抗体水平检测 | 第79页 |
| 3.9.5 攻毒保护试验 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-86页 |
| 4.1 重组目的蛋白表达条件的优化选择 | 第80页 |
| 4.2 鞭毛蛋白佐剂活性区域的选择 | 第80-81页 |
| 4.3 IBDV作为抗原模型的选择 | 第81-82页 |
| 4.4 鞭毛蛋白作为免疫佐剂对亚单位疫苗的免疫增强效应 | 第82-83页 |
| 4.5 鞭毛蛋白对弱毒疫苗的免疫增强作用 | 第83页 |
| 4.6 鞭毛蛋白作为乳酸菌疫苗的分子佐剂的免疫增强作用 | 第83-84页 |
| 4.7 鞭毛蛋白应用的潜在价值 | 第84-86页 |
| 5 结论 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-102页 |
| 附录 | 第102-105页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第105页 |
